基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法及应用，属于制药技术、药物筛选领域。所述的方法包括提取中药化学成分，敲出目标成分制备不同组分群，鉴定敲出成分评价敲出效果，量化敲出成分真实还原不同组分群在中药中的比例，确定主要药效组分群。本发明专利技术制备并筛选出具有抗白血病效应的青黛提取物敲出组分。为后续的青黛质量控制、抗白血病的药效研究及药物制剂提供基础支持，对于其它药物同样具有借鉴和推广价值。

【技术实现步骤摘要】
基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法及应用
本专利技术属于制药技术和药物筛选领域，具体涉及一种基于目标敲出成分和定量法结合的中药药效组分辨识或筛选方法，及其在青黛抗白血病中的应用。
技术介绍
白血病是造血系统的一种恶性疾病，是导致中国居民死亡的十大恶性肿瘤之一。在传统中医理论指导下，中药复方“当归龙荟丸”和“黄黛片”可有效治疗白血病。上述复方中青黛是抗白血病最为重要的一味中草药，它是爵床科植物马蓝Aphicacanthuscusia(Nees)Bremek、蓼科植物蓼蓝PolygonumtinctonumAit.或十字花科植物菘蓝IsatisindigoticaFort.的叶或茎叶经加工制得的干燥粉末或团块，具有清热解毒，凉血消斑，挥火定惊功效。随着中药现代化领域科研水平和创新能力的不断提升，青黛在抗菌、抗炎、抗肿瘤及治疗新冠肺炎等药理作用方面均有所突破，尤其在抗白血病作用方面，现代药理研究表明靛玉红、色胺酮和异鼠李素对治疗白血病有明显的疗效。而青黛所含成分的复杂性和现阶段药效辨识模式导致青黛提取物或其敲出组分(群)在抗白血病方面研究未能较好地体现敲出组分(群)在青黛(整体)的含量比例和浓度，导致无法准确反映其在整体生物活性的贡献值。
技术实现思路
为了解决现有的分离分析技术，在高通量、高精度等方面都难以兼顾中医学的整体观和系统观的问题，专利技术人提供了一种基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法，技术方案如下：一种基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法，所述的方法包括以下步骤：提取中药化学成分，敲出目标成分制备不同组分群，鉴定敲出成分评价敲出效果，量化敲出成分真实还原不同组分群在中药中的比例，确定主要药效组分群。进一步的，所述的基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法步骤如下：中药化学成分的提取：采用超声提取中药中的化学成分，浓缩干燥或冻干成粉末，备用；目标成分的敲出：将粉末溶解后，采用半制备液相色谱仪进行目标成分敲出，即分离出目标成分，分步收集敲除目标成分外的各馏份；对收集的各馏份进行浓缩和干燥，得到不同组分群样品；敲出成分的鉴定：采用液相色谱-质谱联用仪对目标敲出成分进行鉴定，确定相应的敲出馏份是否彻底敲出各目标成分；敲出成分的量化：采用液相色谱仪分析并计算敲出成分的相对含量，以中药提取物为基准，称取各组分群样品，配制成反映各组分群在中药提取物中实际含量的样品溶液；确定主要药效组分群：对上一步配制的样品溶液进行细胞增殖抑制和凋亡实验，确定中药中最有价值的效应组分群。进一步的，所述的基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法在青黛中的应用。所述的应用方法的步骤如下：青黛提取物的制备：超声提取青黛中的化学成分，超声条件为功率500-1000W，温度40-60℃，时间50-80min，次数3-4次；提取液浓缩，条件为转速120-160n·min-1，水浴加热温度50-80℃，冷却温度-10-0℃；将青黛提取物制备成粉末，备用；青黛不同组分群的制备：精密称取青黛提取物粉末，加入N,N-二甲基甲酰胺，超声10-20min溶解，冷却至室温，用N,N-二甲基甲酰胺:甲醇:冰醋酸体积比为(4-6):(3.9-5.5):(0.1-0.5)定容，微孔滤膜过滤，收集滤液；运用半制备液相色谱仪对滤液中的目标成分靛玉红、色胺酮和异鼠李素进行敲出，分别收集目标敲出成分靛玉红馏份，目标敲出成分色胺酮和异鼠李素馏份，目标敲出成分色胺酮、异鼠李素和靛玉红馏份，及相应的敲出靛玉红的馏份，敲出色胺酮和异鼠李素的馏份，敲出靛玉红、色胺酮和异鼠李素的馏份；并对收集的各馏份进行浓缩和干燥，即可得到不同组分群样品；其中，色谱条件为采用Shim-packGISSC18色谱柱，流速为3-5mL·min-1，检测波长为260-300nm，上样量为3-6mL；洗脱条件为以0.1％-0.5％冰醋酸-甲醇为流动相进行梯度洗脱。青黛提取物敲出组分的鉴定：采用液相色谱-质谱联用仪对目标敲出成分进行鉴定，确定相应的敲出馏份是否彻底敲出各目标成分；其中，液相色谱的条件为InetrSustainSwiftC18色谱柱，流速为0.5-1.5mL·min-1，检测波长为260-300nm，进样量为20-30μL，洗脱条件为以0.1％-0.5％冰醋酸-甲醇为流动相进行梯度洗脱；质谱参数：ESI+，离子扫描参数：100-1000m/z，干燥气为氮气：10-20L·min-1，温度：300-400℃，雾化气压力：40-60psig，毛细管电压：3000-4000V。量化青黛提取物敲出组分：采用液相色谱仪，分析并计算得到各敲出成分相对青黛提取物的含量比；以青黛提取物为基准，按含量比称取各组分群样品，配制成反映各组分群在青黛提取物中真实含量的样品溶液；其中，液相色谱的条件为InetrSustainSwiftC18色谱柱，流速为0.5-1.5mL·min-1，检测波长为260-300nm，进样量为20-30μL，洗脱条件为以0.1％-0.5％冰醋酸-甲醇为流动相进行梯度洗脱。主要药效组分群的确定：对上一步配制的样品溶液进行白血病细胞增殖抑制和凋亡实验，确定青黛中最有价值的抗白血病主要效应组分群。进一步的，所述的基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法在青黛主要药效组分群制备中的应用。所述的应用方法包括以下步骤：青黛提取物粉末的制备：超声提取青黛中的化学成分，超声条件为功率700W，温度50℃，时间60min，次数3次；提取液浓缩，条件为转速140n·min-1，水浴加热温度65℃，冷却温度-4℃；将青黛提取物制备成粉末，备用；青黛提取物敲出组分的制备：运用半制备液相色谱仪对目标成分靛玉红、色胺酮和异鼠李素进行分离，收集不含靛玉红、色胺酮和异鼠李素的馏份；其中，色谱条件：采用Shim-packGISSC18色谱柱，流速为3mL·min-1，检测波长为290nm，上样量为4mL；洗脱条件：以0.1％冰醋酸-甲醇为流动相进行梯度洗脱。进一步的，所述的青黛主要药效组分群在制备抗白血病药物中的应用。区别于现有技术，上述技术方案的优点在于：(1)本专利技术的方法通过体现各药效组分群在中药中的真实含量，准确反映了各药效组分群的实际药效。(2)本专利技术采用了“成分敲出”策略和“定量法”，制备和筛选具有抗白血病效应的青黛提取物敲出组分，为后续的青黛质量控制、抗白血病的药效研究及药物制剂提供基础支持，对于其它药物同样具有借鉴和推广价值。附图说明图1为具体实施方式所述的青黛提取物敲出组分的制备及辨识示意图图2为具体实施方式所述的青黛提取物与青黛三种加标溶液半制备液相色谱图，其中，图a为青黛提取物样品，图b为色胺酮加标溶液，图c为异鼠李素加标溶液，图d为靛玉红加标溶液。图3为具体实施方式所述的青黛提取物敲出组分的馏份收集示意图图4为具体实施方式所述的青黛提取物敲出组分的离子流图和二级质谱图图5为具体实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：提取中药化学成分，敲出目标成分制备不同组分群，鉴定敲出成分评价敲出效果，量化敲出成分真实还原不同组分群在中药中的比例，确定主要药效组分群。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：提取中药化学成分，敲出目标成分制备不同组分群，鉴定敲出成分评价敲出效果，量化敲出成分真实还原不同组分群在中药中的比例，确定主要药效组分群。


2.根据权利要求1所述的基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法，其特征在于，所述的方法步骤如下：
中药化学成分的提取：采用超声提取中药中的化学成分，浓缩干燥或冻干成粉末，备用；
目标成分的敲出：将粉末溶解后，采用半制备液相色谱仪进行目标成分敲出，即分离出目标成分，分步收集除目标成分外的各馏份；对收集的各馏份进行浓缩和干燥，得到不同组分群样品；
敲出成分的鉴定：采用液相色谱-质谱联用仪对目标敲出成分进行鉴定，确定相应的敲出馏份是否彻底敲出各目标成分；
敲出成分的量化：采用液相色谱仪分析并计算敲出成分的相对含量，以中药提取物为基准，称取各组分群样品，配制成反映各组分群在中药提取物中实际含量的样品溶液；
确定主要药效组分群：对上一步配制的样品溶液进行细胞增殖抑制和凋亡实验，确定中药中最有价值的效应组分群。


3.一种如权利要求1或2所述的基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法在青黛中的应用。


4.根据权利要求3所述的基于目标成分敲出的中药药效组分辨识的方法在青黛中的应用，其特征在于，所述的应用方法的步骤如下：
青黛提取物的制备：超声提取青黛中的化学成分，超声条件为功率500-1000W，温度40-60℃，时间50-80min，次数3-4次；提取液浓缩，条件为转速120-160n·min-1，水浴加热温度50-80℃，冷却温度-10-0℃；将青黛提取物制备成粉末，备用；
青黛不同组分群的制备：精密称取青黛提取物粉末，加入N,N-二甲基甲酰胺，超声10-20min溶解，冷却至室温，用N,N-二甲基甲酰胺:甲醇:冰醋酸体积比为(4-6):(3.9-5.5):(0.1-0.5)定容，微孔滤膜过滤，收集滤液；运用半制备液相色谱仪对滤液中的目标成分靛玉红、色胺酮和异鼠李素进行敲出，分别收集目标敲出成分靛玉红馏份，目标敲出成分色胺酮和异鼠李素馏份，目标敲出成分色胺酮、异鼠李素和靛玉红馏份，及相应的敲出靛玉红的馏份，敲出色胺酮和异鼠李素的馏份，敲出靛玉红、色胺酮和异鼠李素的馏份；并对收集的各馏份进行浓缩和干燥，即可得到不同组分群样品；
青黛提取物敲出组分的鉴定：采用液相色谱-质谱联用仪对目标敲出成分进行鉴定，确定相应的敲出馏份是否彻底敲出各目标成分；
量化青黛提取物敲出组分：采用液相色谱仪，分析并计算各敲出成分相对青黛提取物的含量比；以青黛提取物为基准，按含量比称取各组分群样品，配制成反映各组分群在青黛...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄慧，李泳宁，戴雅彬，张月芬，
申请(专利权)人：福建卫生职业技术学院，
类型：发明
国别省市：福建;35