基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法技术

本发明专利技术属于微流控免疫芯片快速检测应用领域，具体涉及一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理分析方法。人参皂苷Re前处理供试品溶液经甲醇溶液超声处理，过滤即得；再结合微流控人参皂苷Re免疫芯片进行荧光快速检测。本发明专利技术提供一种比药典更简单样品前处理提取方法，仅需甲醇超声15‑45min，前处理后的样品检测速度快，大大提高了检测效率。有机试剂用量仅需几毫升，对环境污染少，无需昂贵的耗材和精密仪器，检测成本大大减低。

【技术实现步骤摘要】
基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法
本专利技术涉及中药成分检测
，具体涉及一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法。
技术介绍
近些年来，随着中医药现代化和人们对健康意识的不断提升，中药材和中药饮片质量的有效性和安全性受到普遍关注。目前，针对中药材的质量和安全性评价应用最多的仍是基于仪器分析的技术手段，如高效液相色谱、气相色谱、质谱、色谱-质谱联用技术等。仪器分析具有灵敏度高、精密度高、重现性好、易于标准化等优点，但样品前处理繁琐、操作复杂、使用有机试剂耗材多、耗时长、检测成本高、无法满足简单快速低成本的检测要求。免疫检测技术具有样品量小，操作简单，检测快速，检测成本低廉，高通量及易于现场化等优点。目前在中药领域应用较多有免疫检测有酶联免疫ELISA法和胶体金检测法，但酶联免疫ELISA法免疫反应操作繁琐，需要多次孵育、耗时、专业性强等，胶体金检测稳定性、准确度差等。酶联免疫和胶体金这两者都不能满足现场快速化检测。微流控免疫芯片是集微流控技术与免疫反应于一体的生物芯片，该芯片具有高效、快速地完成各种微分析检测，并具有试剂用量少、成本低和环保、快速等优点。近几年，微流控免疫芯片在细胞分析、离子和小分子分析、免疫分析、基因分析和蛋白质分析鉴定等领域得到广泛应用，但目前在中药材有效成分快速检测领域应用较少。人参为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根和根茎。人参性甘、微苦。归脾、肺、心、肾经。具有大补元气、复脉固脱，补脾益肺等功效，临床上用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少、肺虚喘咳，内热消渴等。主要化学成分包括皂苷类、多糖、挥发油、黄酮、有机酸、蛋白质、维生素以及无机元素等，其中皂苷类化合物为主要化学成分。人参皂苷Re是人参皂苷的重要组成部分，属于四环三萜类的衍生物，易溶于水、甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。目前，人参的含量主要采用2020版《中国药典》方法样品前处理方法，用HPLC检测人参皂苷Rg1、Re和Rb1但该方法人参前处理供试品溶液制备复杂，需要三氯甲烷索式提取，挥干、加饱和正丁醇溶液过夜净置，然后超声提取，过滤、再挥干，再用甲醇复溶并定容，最后进液相检测。此过程相当复杂，操作过程人为误差较大。并需要大量的三氯甲烷、饱和正丁醇和甲醇等试剂，不仅对环境污染大，而且对操作人员身体健康不利。并需要一个固定的分析实验室及昂贵的高效液相设备，不适合现场即时的大批量样品的快速检测。在研究微流控免疫芯片检测人参皂苷Re过程中，如采用2020版《中国药典》提供的样品前处理方法不仅制备过程复杂、试剂耗材用量大，且对环境污染大，因此有必要研究一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re前处理方法。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术提供一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法，解决现有技术传统前处理方法过程复杂、对环境污染大等问题。本专利技术提供的技术方案如下：一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法，将人参粉末经醇溶液超声处理后，取滤液得处理后样品；所述醇溶液包括甲醇。进一步地，按质量体积比g/ml计，所述人参粉末与醇的比例为1：(8-30)。进一步地，所述醇溶液为甲醇，或甲醇的混合醇溶液，混合醇溶液中包含乙醇和/或正丁醇。进一步地，所述超声条件为250W、50kHz，时间为15-45min。本专利技术还提供一种微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的方法，包括以下步骤：S1.取干人参粉碎，过筛得粉末；S2.取人参粉末加醇溶液，超声提取；S3.过滤，取续滤液采用微流控免疫芯片法进行荧光检测；所述醇溶液包括甲醇。进一步地，按质量体积比g/ml计，所述人参粉末与醇的比例为1：(8-30)。进一步地，所述醇溶液为甲醇，或甲醇的混合醇溶液，混合醇溶液中包含乙醇和/或正丁醇。进一步地，所述超声条件为250W、50kHz，时间为15-45min。对比现有技术，本专利技术的有益效果为：本专利技术的人参皂苷Re前处理提取方法操作简单，人参样品和有机试剂使用量少，耗时短，样品前处理简单便捷，同时采用人参皂苷Re微流控免疫芯片进行荧光检测，此检测方法速度快、高效、样品前处理溶液仅需几毫升，试剂耗量大大减少，该方法不仅绿色环保，还大大降低检测成本，适合大工业生产中大批量样品的即时检测。附图说明图1为本专利技术人参皂苷Re微流控检测法定量标准曲线。图2为本专利技术荧光检测图谱。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案和有益技术效果更加清晰明白，以下结合附图及具体实施方式，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本专利技术，并不是为了限定本专利技术。本专利技术提出一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法，将人参粉末经醇溶液超声处理后，取滤液得处理后样品。所述醇溶液包括甲醇，优选甲醇，或甲醇与乙醇和/或正丁醇的混合醇溶液。其中，按质量体积比g/ml计，所述人参粉末与醇的比例为1：(8-30)。优选地，所述超声条件为250W、50kHz，时间为15-45min。本专利技术还提出的一种微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的方法，包括以下步骤：1.取干人参粉碎，过筛得粉末；2.取人参粉末加醇溶液，超声提取；3.过滤，取续滤液采用微流控免疫芯片法进行荧光检测；所述醇溶液包括甲醇，还可以根据实际情况添加其他的醇类，如甲醇与乙醇，或甲醇和乙醇，或甲醇和正丁醇，或甲醇和乙醇和正丁醇的混合溶液。本专利技术中，按质量体积比g/ml计，所述人参粉末与醇的比例优选为1：(8-30)。所述超声条件为功率250W，频率50kHz，时间优选为15-45min。本专利技术中使用醇溶剂除甲醇之外，可添加的醇类包括但不限于乙醇、正丁醇等醇类。以下实施例中的人参样品粉末来自同一批次。实施例1本实施例提供了2020版《中国药典》人参样品前处理方法，具体按照如下操作进行：取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得前处理溶液。实施例2取本品粉末(过四号筛)约1g，精密加甲醇10ml，料液比为1：10，密塞，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min，滤过，取续滤液，即得前处理溶液。实施例3取本品粉末(过四号筛)约1g，精密加水饱和正丁醇50ml，料液比为1：50，密塞，超声处理(功率250W，频率50kHz)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法，其特征在于，将人参粉末经醇溶液超声处理后，取滤液得处理后样品；所述醇溶液包括甲醇。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法，其特征在于，将人参粉末经醇溶液超声处理后，取滤液得处理后样品；所述醇溶液包括甲醇。


2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，按质量体积比g/ml计，所述人参粉末与醇的比例为1：(8-30)。


3.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述醇溶液为甲醇，或甲醇的混合醇溶液，混合醇溶液中包含乙醇和/或正丁醇。


4.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述超声条件为250W、50kHz，时间为15-45min。


5.一种微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭璐，余友，管瑶，刘嫄嫄，杨钊，陈皓，
申请(专利权)人：九州通医药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42