一种球形晶煅烧骨的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种球形晶煅烧骨的制备方法。首先取异体骨去除软组织、粗切割，NaOH溶液和H

【技术实现步骤摘要】
一种球形晶煅烧骨的制备方法
本专利技术属于异体骨制备
，具体涉及一种球形晶煅烧骨的制备方法。
技术介绍
不同原因造成的骨缺损，临床医生需要选择优质的植骨材料。理想的骨移植修复材料应具备优良的成骨活性，同时还应具有良好的生物相容性。常用的移植材料包括自体骨、异体骨、异种骨和人工骨等。自体骨取骨会给伤者造成二次损伤，新的损伤会有加重失血、感染的风险，并增加术后并发症。近年来，异体骨的应用很多，但来源严重不足，并且存在免疫原性和传播疾病的风险。人工骨的成分和结构均不如天然骨，往往成骨活性较差。异种骨与人体骨组织具有相似的结构与形态，并且来源丰富、价格低廉，便于大量的获取和加工贮存，是未来骨移植材料发展的重要方向。但是异种骨的免疫排斥反应一直以来是棘手的问题，所以去抗原降低免疫原性成为异种骨应用的关键。国内常用的骨脱蛋白方法有化学试剂浸泡脱蛋白法、酶类脱蛋白法等。酶类脱蛋白法作用较温和，但效果不太明确。化学试剂浸泡法中，次氯酸钠溶液在骨组织工程早期就被广泛用于异种骨的脱蛋白处理，去蛋白的效果也得到了确切的证实，但仍存在以下不足：①脱蛋白后的材料上往往有含氯的残留物；②渗透性较差，不能保证被处理骨块内外脱蛋白的均一性；③电子扫描显微镜下可以见到其对松质骨支架有较强的侵蚀作用。进行脱细胞处理也可以达到异种骨降低抗原的目的。有研究在氯仿与甲醇混合液脱脂的基础上，设计使用TritonX-100与脱氧胆酸钠联合脱细胞，发挥两者高效脱细胞的优势，虽然增加脱细胞的效能，而且保留原骨组织的天然孔隙结构，但最终不能将细胞及其细胞器成分完全脱去。物理脱细胞方法也随着超声技术在细胞破碎、超声洗涤等生物研究领域的应用迅速发展，很多学者开始尝试将超声技术用于异种骨的脱细胞处理。超声脱细胞主要是通过其对细胞的裂解作用完成的。单独应用超声脱细胞技术通常无法完全脱细胞且过强又可能会破坏细胞外基质(ECM)。此外，还有α-半乳糖苷酶处理、深低温冷冻、反复冻融等方法可以用来去抗原，但效果都不尽如人意。国产的异种骨材料包括天津的金世植骨灵，上海的金骨威，西安的骼瑞、烟台海奥骨粉等，成骨性能均存在不够稳定或免疫原性不能满足临床需求的问题。而国内市场应用最为广泛的是瑞士的GeistlichBio-Oss骨粉，其性质稳定，成骨能力良好，但是价格昂贵，其工艺的具体参数因并不明确，多年来国内外的众多研究都未能成功制出超越其性能的异种骨产品。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种球形晶煅烧骨的制备方法。一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸10-20min，降温至室温；然后在NaOH溶液中摇床室温清洗20-30min，纯化水超声清洗10-20min，重复上述清洗步骤1-3次；(2)在H2O2水溶液清洗20-35min，然后用纯化水再次清洗15-25min，重复上述清洗步骤1-3次；(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至600-700℃，维持5-8h，随炉冷却；(4)将煅烧后的骨条浸入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，60-80℃的水浴箱中浸泡60-80h；(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至800-1000℃，维持5-8h，再次随炉冷却，制成。步骤(1)所述NaOH溶液的浓度为0.6-1.2mol/L。步骤(2)所述H2O2水溶液的体积浓度为0.8-1.5％。所述三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，三聚磷酸钠的浓度为0.05-0.15mol/L，磷酸氢二钙的浓度为0.15-0.35mol/L，采用稀盐酸调节溶液pH5.2-6.6。优选的，所述异体骨为牛骨。所述球形晶煅烧骨在骨移植中的应用。所述球形晶煅烧骨在制备仿生骨材料中的应用。优选的，所述仿生骨为所述球形晶煅烧骨附着骨形态发生蛋白和/或胶原凝胶。本专利技术的有益效果：本专利技术制备的球形晶煅烧骨具有较高的抗压强度和抗折强度，植入体内不会产生炎症反应，生物相容性高。本专利技术采用二次煅烧技术，二次煅烧中间加入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液浸泡的关键步骤，使得制备的材料强度增强，生物相容性提高，适用于骨移植。附图说明图1为各煅烧骨对MC3T3-E1细胞状态的影响。图2为各煅烧骨对MC3T3-E1细胞增殖的影响。图3为各煅烧骨对MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活力的影响。图4为实施例1球形煅烧骨股骨部位植入后4周成骨图像。图5为对照Bioss煅烧骨股骨植入4周成骨图像。图6为实施例1制备的球形晶煅烧骨材料内部形态。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。下述实施例子采用的异体骨为新鲜牛松质骨。实施例1一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸15min，降温至室温；然后在1.0mol/LNaOH溶液中摇床室温清洗25min，纯化水超声清洗15min，重复上述清洗步骤2次；(2)在1.2％H2O2水溶液清洗25min，然后用纯化水再次清洗20min，重复上述清洗步骤2次；(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至650℃，维持6h，随炉冷却；(4)将煅烧后的骨条浸入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，70℃的水浴箱中浸泡70h；所述三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，三聚磷酸钠的浓度为0.10mol/L，磷酸氢二钙的浓度为0.25mol/L，采用稀盐酸调节溶液pH5.8；(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至900℃，维持6h，再次随炉冷却，制成。实施例2一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸12min，降温至室温；然后在0.7mol/LNaOH溶液中摇床室温清洗22min，纯化水超声清洗18min，重复上述清洗步骤3次；(2)在0.9％H2O2水溶液清洗28min，然后用纯化水再次清洗18min，重复上述清洗步骤3次；(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至610℃，维持8h，随炉冷却；(4)将煅烧后的骨条浸入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，60℃的水浴箱中浸泡80h；所述三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，三聚磷酸钠的浓度为0.05mol/L，磷酸氢二钙的浓度为0.15mol/L，采用稀盐酸调节溶液pH6.2；(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至800℃，维持8h，再次随炉冷却，制成。实施例3一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种球形晶煅烧骨的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸10-20min，降温至室温；然后在NaOH溶液中摇床室温清洗20-30min，纯化水超声清洗10-20min，重复上述清洗步骤1-3次；/n(2)在H

【技术特征摘要】
1.一种球形晶煅烧骨的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸10-20min，降温至室温；然后在NaOH溶液中摇床室温清洗20-30min，纯化水超声清洗10-20min，重复上述清洗步骤1-3次；
(2)在H2O2水溶液清洗20-35min，然后用纯化水再次清洗15-25min，重复上述清洗步骤1-3次；
(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至600-700℃，维持5-8h，随炉冷却；
(4)将煅烧后的骨条浸入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，60-80℃的水浴箱中浸泡60-80h；
(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至800-1000℃，维持5-8h，再次随炉冷却，制成。


2.根据权利要求1所述球形晶煅烧骨的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述NaOH溶液的浓度为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：侯嘉绮，赵贺凯，
申请(专利权)人：江西斯凯复医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36