一种灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺及其产品和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺及其产品和在制备具有改善睡眠作用的复方制剂中的应用。制备与提取工艺包括：以灵芝孢子粉为原料，经蛋白酶酶解法得到灵芝孢子粉酶解物粗品；再经过滤处理，再经浓缩、干燥得到所述灵芝孢子粉酶解物。制备得到的灵芝孢子粉酶解物富含粗多糖、总三萜、小肽及氨基酸等水溶性功效物质，以及灵芝酸、皂甙和麦角甾醇等醇溶性活性成分的灵芝孢子粉酶解物，再以其与酸枣仁、蜂蜜粉作为活性组分组成复方制剂，具有优异的改善睡眠的效果，不仅可以减少入睡潜伏期，还可以提高入睡比例、延长睡眠时间。

【技术实现步骤摘要】
一种灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺及其产品和应用
本专利技术涉及灵芝孢子粉酶解物的
，尤其涉及一种灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺及其产品和在制备具有改善睡眠作用的复方制剂中的应用。
技术介绍
灵芝为担子菌纲多孔菌目多孔菌科(Polyporaceae)灵芝属(Ganoderma)药食两用真菌，被称为木灵芝、菌灵芝、魂草、仙草等，在我国灵芝药用已经有2000多年的历史。灵芝孢子(GanodermaLucidumSpore)是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来及其细小的孢子，为灵芝的生殖细胞，具有灵芝的全部遗传物质，现代药理研究表明，灵芝孢子粉具有许多药理作用，包括抗肿瘤、增强免疫力、抗病毒等。灵芝孢子粉主要有效成分为多糖类、三萜类、肽类、蛋白质、氨基酸及微量元素等，其中蛋白质含量15～18％，其主要分布在灵芝孢子粉的细胞壁中，灵芝孢子粉酶解物是以灵芝孢子粉为原料，利用酶解等生物技术制得的一类混合物，其既具有灵芝孢子粉有效成分(灵芝多糖、灵芝三萜等)又含蛋白质酶解得到的多肽、寡肽和氨基酸等(含量以寡肽为主)，其中的寡肽是一类氨基酸残基数目在2～12个的小肽。申请公布号为CN106834403A的中国专利文献公开了一种灵芝多肽的提取方法，包括(1)将灵芝子实体粉碎，得到灵芝粉；(2)灵芝粉沸水回流4h；(3)回流提取物用木瓜蛋白酶酶解4-6h；(4)喷雾干燥酶解物。申请公布号为CN101366737A的中国专利公开了一种纳米灵芝孢子粉多肽制品的制备方法，包括(1)灵芝孢子粉加8-10倍水混合，用0.5-3.0％中性蛋白酶35-65℃下酶解8-20h，(2)灭酶3-15min(3)浓缩酶解物，冻干或喷雾干燥制得纳米灵芝孢子多肽制品，其成分为多肽30-50％，多糖为10-15％，氨基酸20-40％，其余为微量的三萜、甾醇等物质。申请公布号为10819195A的中国专利公开了一种灵芝多肽的提取方法，包括以下步骤：(1)灵芝子实体粉碎；(2)70-80％乙醇回流提取3-6h；(3)提取液浓缩，用氯仿萃取浓缩液中的蛋白质；(4)萃取液浓缩，并分别用硅胶柱和LH-20凝胶柱纯化，洗脱物减压浓缩并干燥得到灵芝多肽纯品。以上三种方法中，公布号为CN106834403A的专利文献制备原料为灵芝子实体，其蛋白质含量仅2％左右，由此提取得到的物质中蛋白质、肽和氨基酸等物质的相对含量较低，而且提取得率不高，公布号CN101366737A的专利文献中，得到的产品组分以水溶性物质为主，如灵芝多肽含量为30-50％，粗多糖含量10-30％，氨基酸含量20-40％，其他的灵芝孢子中醇溶性的有效成分如灵芝酸(灵芝三萜)、皂甙、麦角甾醇未得到有效提取，公布号为CN10819195A的专利文献得到的是一种纯度较高的灵芝多肽物质，其中灵芝中一些功效成分如灵芝三萜、灵芝多糖在分离纯化过程中被去除了，所以终产物的功效成分相对原料灵芝减少了，其相应的功能作用也会减少或降低，而且由于其终产物灵芝多肽纯度较高，所以相对得率较低。失眠是一种常见的睡眠障碍，其发生与躯体疾病、压力、焦虑和抑郁状态密切相关，近年来，随着社会的发展和生活压力的加大，失眠的发病率呈上升的趋势。临床上对失眠的治疗以镇静、催眠类化学药物为主，这些药物对中枢神经系统有明显的不良反应，长期使用不仅有耐药性和依赖性，而且会加重病情。因此，安全性相对较高的具有改善睡眠作用的功能食品受到人们的关注。卫生部《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》中规定了改善睡眠功能保健食品的评价方法：直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阀下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏实验等。目前已报道的灵芝多肽的生物活性有抗氧化、降血糖、抗衰老等，如包焜等(包焜等，灵芝活性组分在小鼠体内的降糖功能研究，中国兽药杂志，2015,49(1):29-32)研究认为灵芝多肽可以通过增强肝脏细胞中SOD的活性，减少有害物质MDA的生成，增强机体抗氧化能力，保护糖尿病小鼠胰岛B细胞免受自由基和活性氧的进一步破坏，使胰岛素的合成和分泌有所升高，从而降低血糖含量。董颖等(董颖等，灵芝多肽的分离检识和抗氧自由基活性研究，北京医科大学学报，1993，25(2)：145-146)经实验证明灵芝多肽具有抗衰老的作用，同时揭示了其抗衰老的内在本质是清除氧红细胞膜上面的活性氧自由基。但是，尚未有文献报道灵芝多肽的改善睡眠功能。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术公开了一种灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺，以蛋白质含量高(约为15～18％，为灵芝子实体蛋白含量的7～9倍)的灵芝孢子粉为原料，经酶解法及简单的分离纯化工艺制备得到富含粗多糖、三萜、小肽及氨基酸等水溶性功效物质，以及灵芝酸、皂甙和麦角甾醇等醇溶性活性成分的灵芝孢子粉酶解物，工艺简单、易于操作，生产成本低。以该工艺制备的灵芝孢子粉酶解物为原料制备的复方制剂具有显著改善睡眠的作用。具体技术方案如下：一种灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺，包括如下步骤：(1)以灵芝孢子粉为原料，经蛋白酶酶解法得到灵芝孢子粉酶解物粗品；所述蛋白酶酶解法具体为：将灵芝孢子粉、胰蛋白酶与乙醇水溶液混合，在50～60℃，pH＝5.5～6.5下进行酶解反应；所述乙醇水溶液的体积浓度为40～60％；(2)将所述灵芝孢子粉酶解物粗品进行过滤处理，再经浓缩、干燥得到所述灵芝孢子粉酶解物。本专利技术公开的制备与提取工艺，以蛋白质含量较高的灵芝孢子粉为原料，采用特定的胰蛋白酶，在一定浓度的乙醇/水混合体系下进行酶解反应，从而制备得到富含粗多糖、三萜、小肽及氨基酸等水溶性功效物质，以及灵芝酸、皂甙和麦角甾醇等醇溶性活性成分的灵芝孢子粉酶解物。经试验发现，若将胰蛋白酶替换为其它蛋白酶类，如木瓜蛋白酶，最终制备的灵芝孢子酶解物中，分子量在180～1000Da的小肽含量显著下降。步骤(1)中：以灵芝孢子粉的质量计，所述胰蛋白酶的加入量为0.15～0.25wt％；优选为0.20wt％。所述灵芝孢子粉与所述乙醇水溶液的质量之比为1：3～1：4。步骤(1)中，所述酶解反应的时间为2～5h；步骤(2)中，所述干燥为喷雾干燥。本专利技术还公开了根据上述制备与提取工艺制备的灵芝孢子粉酶解物，对其主要成分分析及其成分中肽的分子量分布进行测定：主要成分包括：粗多糖：1.5～4.5％，三萜：2.5～5.0％，小肽：7～18％，氨基酸2～7％；主要成分中，除包括粗多糖、三萜、小肽与氨基酸外，余量还包括水分、脂肪和蛋白质等。肽分子量分布：分子量为0～180Da：6～8％，分子量为180～1000Da：71～73％；余量为分子量大于1000Da的肽。本专利技术还公开了上述灵芝孢子粉酶解物在制备具有改善睡眠作用的复方制剂中的应用。具体为：一种具有改善睡眠作用的复方制剂，原料包括所述的灵芝孢子粉酶解物，按质量份数计，原料组成包括：灵芝孢子粉酶解物50～60份；酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)以灵芝孢子粉为原料，经蛋白酶酶解法得到灵芝孢子粉酶解物粗品；/n所述蛋白酶酶解法具体为：/n将灵芝孢子粉、胰蛋白酶与乙醇水溶液混合，在50～60℃，pH＝5.5～6.5下进行酶解反应；/n所述乙醇水溶液的体积浓度为40～60％；/n(2)将所述灵芝孢子粉酶解物粗品进行过滤处理，再经浓缩、干燥得到所述灵芝孢子粉酶解物。/n

【技术特征摘要】
1.一种灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺，其特征在于，包括如下步骤：
(1)以灵芝孢子粉为原料，经蛋白酶酶解法得到灵芝孢子粉酶解物粗品；
所述蛋白酶酶解法具体为：
将灵芝孢子粉、胰蛋白酶与乙醇水溶液混合，在50～60℃，pH＝5.5～6.5下进行酶解反应；
所述乙醇水溶液的体积浓度为40～60％；
(2)将所述灵芝孢子粉酶解物粗品进行过滤处理，再经浓缩、干燥得到所述灵芝孢子粉酶解物。


2.根据权利要求1所述的灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺，其特征在于，步骤(1)中：
以灵芝孢子粉的质量计，所述胰蛋白酶的加入量为0.15～0.25wt％；
所述灵芝孢子粉与所述乙醇水溶液的质量之比为1：3～1：4。


3.根据权利要求1所述的灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺，其特征在于：
步骤(1)中，所述酶解反应的时间为2～5h；
步骤(2)中，所述干燥为喷雾干燥。


4.根据权利要求1所述的灵芝孢子粉酶解物的制备与提取工艺，其特征在于，所述乙醇水溶液的体积浓度为50～60％。


5.一种根据权利要求1～4任一权利要求所述的制备与提取工艺得到的灵芝孢子粉酶解物，其特征在于，对其主要成分分析及其成分中肽的分子量分布进行测定：
主要成分包括：粗多糖：1.5～4.5％，三萜：2.5～5.0％，小肽：7～18％，氨基酸：2～7％；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾建萍，包国良，李跃中，
申请(专利权)人：杭州医学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33