一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法技术

本发明专利技术的目的在于提供一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法，属于干细胞冻存技术领域。本发明专利技术所提供的保护液包括如下组分：40% DMEM/F12，50% FBS，10% DMSO，2.5mg/ml‑10mg/ml海雹菜多糖。本发明专利技术的有益效果在于，使用本发明专利技术冻存保护液进行牙髓干细胞冻存时，不仅可以有效的维持牙髓干细胞的活性，而且可以使牙髓干细胞具有更好的干性和成骨能力。

【技术实现步骤摘要】
一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法
本专利技术属于干细胞冻存
，尤其涉及一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法。
技术介绍
干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞。其中，牙髓干细胞是来源于牙髓腔内软组织的一类干细胞，其具有良好的增殖和分化能力。由于牙髓干细胞具有采集方便，来源丰富，具有多向分化潜能，免疫原性低等优点，因此其在再生医学和组织工程修复中被广泛的应用。伴随着干细胞的广泛应用，干细胞的冻存问题也逐渐成为了研究的热点。目前，牙髓干细胞主要用于成骨分化来修复牙齿，但是，目前尚无一种干细胞冻存液专门用于保存牙髓干细胞使其保持活性的同时，更好的保持其干性和成骨能力。海雹菜是蓝藻门,藻殖段纲,念珠藻目,鞭枝藻科,海雹菜属的一种藻类，目前常用于食用或是治疗水肿。当前，尚无关于海雹菜多糖用于牙髓干细胞冻存液的相关内容。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种专用于牙髓干细胞的一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法。为实现上述目的，本专利技术提供了一种牙髓干细胞冻存保护液，所述保护液包括如下组分：40%DMEM/F12，50%FBS，10%DMSO，2.5mg/ml-10mg/ml海雹菜多糖。优选地，所述保护液包括如下组分：40%DMEM/F12，50%FBS，10%DMSO，5mg/ml海雹菜多糖。优选地，所述海雹菜多糖的制备方法包括如下步骤：（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖。此外，本专利技术提供了一种用于牙髓干细胞冻存保护液的海雹菜多糖，所述海雹菜多糖的制备方法包括如下步骤：（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖；所述海雹菜多糖在牙髓干细胞冻存保护液中用于维持牙髓干细胞活性；所述海雹菜多糖在牙髓干细胞冻存液中用于维持牙髓干细胞成骨转化能力。此外，本专利技术提供了一种用于牙髓干细胞冻存保护液的海雹菜多糖的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖。此外，本专利技术提供了海雹菜多糖在制备牙髓干细胞活性维持剂中的应用。此外，本专利技术提供了海雹菜多糖在制备牙髓干细胞Oct4和Sox2基因表达维持剂中的应用。此外，本专利技术提供了海雹菜多糖在制备牙髓干细胞成骨转化维持剂中的应用。优选地，所述海雹菜多糖由以下制备方法制备得到：（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖。除此之外，本专利技术提供了一种牙髓干细胞冻存方法，所述方法包括如下步骤：（1）按照40%DMEM/F12，50%FBS，10%DMSO，2.5mg/ml-10mg/ml海雹菜多糖的百分比配置冻存保护液，过滤除菌后得到牙髓干细胞冻存保护液；（2）将牙髓干细胞与所述牙髓干细胞冻存保护液在冻存管中混合，置于冻存盒中，置于-80℃冰箱过夜，之后转移至液氮中保存。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种用于牙髓干细胞冻存的细胞冻存液，使用本专利技术冻存液进行牙髓干细胞冻存时，不仅可以有效的维持牙髓干细胞的活性，而且可以使牙髓干细胞具有更好的干性和成骨能力。附图说明图1实施例2和实施例4冻存细胞中Sox2和Oct4基因的表达水平；图2实施例2和实施例4冻存细胞的ALP酶染色结果和定量结果。具体实施方式为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。实施例1（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；（2）称取100g的海雹菜粉末，加入2000ml的水，浸泡24h；（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至200ml，加入600ml95%乙醇，醇沉12h；（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖。实施例2（1）按照如下配方配置冻存保护液:400ulDMEM/F12,500ulFBS,100ulDMSO，过滤除菌；（2）将1×106个人牙髓干细胞与1ml冻存保护液混合，置于冻存盒中，置于-80℃冰箱过夜，之后转移至液氮中保存。实施例3（1）按照如下配方配置冻存保护液:400ulDMEM/F12,500ulFBS,100ulDMSO，加入2.5mg海雹菜多糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牙髓干细胞冻存保护液，其特征在于，所述保护液包括如下组分：40% DMEM/F12，50% FBS，10% DMSO，2.5mg/ml-10mg/ml海雹菜多糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种牙髓干细胞冻存保护液，其特征在于，所述保护液包括如下组分：40%DMEM/F12，50%FBS，10%DMSO，2.5mg/ml-10mg/ml海雹菜多糖。


2.根据权利要求1所述的保护液，其特征在于，所述保护液包括如下组分：40%DMEM/F12，50%FBS，10%DMSO，5mg/ml海雹菜多糖。


3.根据权利要求1或2所述的保护液，其特征在于，所述海雹菜多糖的制备方法包括如下步骤：
（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；
（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；
（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；
（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；
（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；
（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖。


4.一种用于牙髓干细胞冻存保护液的海雹菜多糖，其特征在于，所述海雹菜多糖的制备方法包括如下步骤：
（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；
（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；
（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；
（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；
（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；
（6）加水溶解海雹菜粗多糖，加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖；
所述海雹菜多糖在牙髓干细胞冻存保护液中用于维持牙髓干细胞活性；
所述海雹菜多糖在牙髓干细胞冻存保护液中用于维持Oct4和Sox2基因表达；
所述海雹菜多糖在牙髓干细胞冻存液中用于维持牙髓干细胞成骨能力。


5.一种用于牙髓...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈义，常化松，孙明辉，王琦，马雪娇，陈春雷，
申请(专利权)人：山东博森医学工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37