一种检测人类易晒黑肤质的多重基因检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种检测人类易晒黑肤质的多重基因检测试剂盒及其使用方法。本发明专利技术采用多重PCR结合片段长短/质量分析方法，同步快速定性检测与皮肤是否易晒黑的相关基因ASIP上2个单核苷酸多态性(SNP)位点。检测方法包括采集样本并提取核酸的步骤；以提取的核酸为模板进行多重PCR扩增的步骤；最后毛细管电泳分离样品并进行结果分析判读的步骤，其优势是快速、准确、灵敏度高、特异性强、通量高、成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种检测人类易晒黑肤质的多重基因检测试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及基因检测领域，具体涉及一种检测人类易晒黑肤质的多重基因检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
肤质是指人类皮肤的多样化所形成的特殊属性，随着社会生活水平的提高，人们对皮肤的保养也更加重视。目前人们对肤质的了解也仅处在外观以及一些简单的理化检测上，实际影响肤质最根源的乃是遗传因素，通过对基因的检测可以了解自身肤质在基因层面的好坏倾向。外界坏境对肤质的影响很大，比如紫外线会造成晒黑、色斑问题，但是不同人对外部因素的敏感性不同，相同环境下有的人容易晒黑、产生色斑，有的人则不然。因此，及早的获取我们肌肤的特质信息能够让我们更有效的呵护肌肤。人类基因组80％以上基因多态性都是单核苷酸多态性(SingleNucleotidepolymorphism，SNP)。SNP指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，包括碱基转换、颠换、缺失和插入。有研究表明ASIP基因与肌肤是否易晒黑有很大相关性，ASIP基因编码Agouti信号蛋白，使毛囊黑色素细胞合成褐黑素，主要表达于皮肤中。一项涉及约9000例个体的GWAS研究显示，该基因的rs1015362和rs4911414的SNP多态性影响皮肤晒黑和色斑的形成。目前市场上，SNP分型检测技术主要有三种：测序法、荧光定量PCR法、基因芯片法。荧光定量PCR荧光定量PCR采用荧光淬灭及双末端标记技术，针对SNP位点设计特异性的探针，具有灵敏度高、准确性高和特异性高等优势。但荧光定量PCR通量低，若要同时检测多个个SNP位点，需要分管检测，操作复杂，样品用量大，难以适应临床需求。此外，荧光定量PCR难以设置内参质控，无法避免假阳性和假阴性。基因芯片技术：基因芯片是通过微加工技术，将数以万计的特定序列的DNA片段(基因探针)，有规律地排列固定于硅片、玻片等支持物上，构成的一个二维DNA探针阵列，利用这类芯片与标记的生物样品进行杂交，可对样品的基因表达谱生物信息进行快速定性和定量分析。其优点是通量高、操作简便；缺点是检测成本昂贵、重复性差、灵敏度较低。芯片的种类较多，难以制定一个统一的质量控制标准也限制了基因芯片技术的普及。测序法：Sanger测序法是SNP分型金标准，不仅能检测已知SNP，也能发现未知SNP。但Sanger测序法操作复杂，成本较高。当测序位点较多时需要逐个位点测序，耗时长，累计价格相对昂贵。二代测序技术实现了边合成边测序，具有高通量、高效率的优势。然而二代测序平台价格昂贵、普及度低，作为SNP检测技术在临床上的应用还不够成熟。基于此，本专利技术提供了一种基于多重PCR和CE分离技术的快速肤质检测组合引物及其应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测人类易晒黑肤质的多重基因检测试剂盒及其使用方法，该试剂盒能对受测者的相关基因进行检测，并给出分析。具体地，本专利技术公开了一种检测人类易晒黑肤质的多重基因检测试剂盒及其使用方法，包括如下步骤：a)采集受测者口腔内脱落细胞保存于采集卡或者对血液样本进行DNA核酸提取；b)取受测者唾液采集卡样本或提取的DNA样本加入到反应体系中，进行PCR扩增；c)运行扩增程序；d)对扩增产物进行电泳分析，并根据峰型图进行判读；本试剂盒包含以下几个组分：PrimerMix、PCR反应液和DNA/RNA-free水。其中的PrimerMix中，包含扩增ASIP基因的2个SNP多态位点的引物组及3个人类基因组DNA内参和反应内参pcDNA的引物组，详见表1。本试剂盒可对受测样本进行同步多重PCR扩增，通过SNP引物的设计，可以精确测出被检测基因ASIP的基因型：杂合子或纯合子；pcDNA用以检测反应体系，监控反应体系是否有效，扩增是否正常；3个人体基因组DNA内参用以检测人体样本，保证人体样本有效。其中PCR反应液包含以下组分：2×PCR缓冲液、DNA聚合酶、dNTPs、氯化钾、氯化镁等。本试剂盒的PCR扩增反应条件见表2。表2本专利技术的PCR扩增反应条件本试剂盒的扩增产物通过电泳对扩增产物进行分析；优选的电泳为毛细管电泳。本试剂盒可同时扩增多个位点，实现检测的简易性、高效性和特异性，通过分析扩增图谱判断测试者皮肤肤质，指导测试者进行针对性的皮肤保养，见表3。表3本专利技术的检测位点-肤质参考信息附图说明图1是本试剂盒阴性对照DNA/RNA-free水扩增图谱。只出现pcDNA特征峰。图2是受测者1口腔脱落细胞样本扩增图谱。该测试者ASIP基因rs4911414位点的基因型为TG；ASIP2基因rs1015362位点的基因型为GA；出现pcDNA峰及人基因组DNA(huDNA)内参-1、人基因组DNA(huDNA)内参-4、人基因组DNA(huDNA)内-7特征峰。图3是受测者2口腔脱落细胞样本扩增图谱。该测试者ASIP基因rs4911414的基因型为GG；ASIP2基因rs1015362位点的基因型为GG；出现pcDNA峰及人基因组DNA(huDNA)内参-1、人基因组DNA(huDNA)内参-4、人基因组DNA(huDNA)内-7特征峰。图4是受测者2血液提取DNA样本扩增图谱，同图3。具体实施方法：为了更好地理解本专利技术的内容，下面结合具体实施例和附图作进一步说明。应理解，这些实施例仅用于对本专利技术进一步说明，而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术的内容后，该领域的技术人员对本专利技术作出一些非本质的改动或调整，仍属于本专利技术的保护范围。检测是否属于易晒黑肤质的试剂盒，包括盒体和盒体内存放的试剂，包括如下步骤：a)采集受测者口腔内脱落细胞保存于采集卡或者对血液样本进行DNA核酸提取；b)取受测者唾液采集卡样本或提取的DNA样本加入到反应体系中，进行PCR扩增；c)运行扩增程序；d)对扩增产物进行电泳分析，并根据峰型图进行判读；本试剂盒包含以下几个组分：包含引物组在内的PrimerMix、PCR反应液和DNA/RNA-free水。其中的PCR反应体系PrimerMix中，包含扩增2个SNP多态位点、3个人类基因组内参和pcDNA反应内参的引物组，详见表1。其中PCR反应液包含以下组分：2×PCR缓冲液、DNA聚合酶、dNTPs、氯化钾、氯化镁等。在实施案例中，所述的样本为DNA/RNA-free水、受测者1口腔内壁脱落细胞采集卡、受测者2口腔内壁脱落细胞采集卡、受测者2血液DNA提取样本。在实施案例中，所述的电泳是通过毛细管电泳对扩增产物进行电泳，并结合分析软件给出扩增图谱并给出分析，判断受测者是否属于易晒黑肤质。实施例一(1)所选样本：DNA/RNA-free水。(2)体系配置根据说明书，将引物Pri本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测人类易晒黑肤质的多重基因检测试剂盒及其使用方法，包括如下步骤：/na)采集受测者口腔内脱落细胞保存于采集卡或者对血液样本进行DNA核酸提取；/nb)取受测者唾液采集卡样本或提取的DNA样本加入到反应体系中，进行PCR扩增；/nc)运行扩增程序；/nd)对扩增产物进行电泳片段分析，并根据峰型图进行判读。/n其中的PCR反应体系中，包含与皮肤是否易晒黑相关基因ASIP上的2个SNP位点、3个人体基因组DNA内参和一个PCR反应内参的引物组，见表1，以下引物序列方向均为5’端至3’端。/n表1本试剂盒SNP检测位点、引物序列及PCR扩增片段长度/n

【技术特征摘要】
1.一种检测人类易晒黑肤质的多重基因检测试剂盒及其使用方法，包括如下步骤：
a)采集受测者口腔内脱落细胞保存于采集卡或者对血液样本进行DNA核酸提取；
b)取受测者唾液采集卡样本或提取的DNA样本加入到反应体系中，进行PCR扩增；
c)运行扩增程序；
d)对扩增产物进行电泳片段分析，并根据峰型图进行判读。
其中的PCR反应体系中，包含与皮肤是否易晒黑相关基因ASIP上的2个SNP位点、3个人体基因组DNA内参和一个PCR反应内参的引物组，见表1，以下引物序列方向均为5’端至3’端。
表1本试剂盒SNP检测位点、引物序列及PCR扩增片段长度








2.权利要求1所述的一种检测人类易晒黑肤质的多重基因检测试剂盒及其使用方法，其特征在于，所述的口腔脱落细胞，为口腔内壁上脱落细胞，保存于细胞采集卡上，可直接用于PCR扩增。


3.权利要求1所述的一种检测人类易晒黑肤质的多重基因检测试剂盒及其使用方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：许娜，徐智，孔咪咪，余丁，吴勇，
申请(专利权)人：宁波海尔施基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33