一种苯胺废水优势菌的驯化及筛选方法技术

本发明专利技术提供了一种苯胺废水优势降解菌的驯化及筛选方法，属于微生物优势菌筛选技术领域。该方法包括如下步骤：(1)制备菌液；(2)制备硝基苯废水降解菌系；(3)筛选硝基苯废水优势降解菌系；(4)对纯化的降解菌进行复筛；其中步骤(2)是在步骤(1)的菌液中加入葡萄糖，再加入硝基苯废水，将其接入到无机盐培养基中，摇床避光传代培养，每次传代培养时培养基中葡萄糖的量均比上一代减少，硝基苯废水的量均比上一代增加，每次传代培养7d，传代培养在五代以上，最后一代培养时培养基中不添加葡萄糖。本发明专利技术采用生物法处理硝基苯废水，具有能耗低、反应条件温和且效率较高，降解菌株对硝基苯废水的降解效率可以达到89％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种苯胺废水优势菌的驯化及筛选方法
本专利技术是提供一种苯胺废水优势菌的驯化及筛选方法，属于微生物筛选
技术背景苯胺是一种重要的化工原料和中间体，广泛地应用于燃料、医药、炸药、农药、军工等行业，是国际公认的危险化学品。苯胺是一种严重污染环境、危害人体健康的有物质，此类废水排入水体，其毒性不但会妨碍水生生物的生长，同时也严重威胁人类的身体健康。因此，我国的废水排放标准中对苯胺类物质有严格的标准。苯胺废水具有生物毒性强、污染物浓度、含盐量高、色度高等特点，属于典型难降解工业废水。目前，苯胺废水的处理方法主要有物理法、化学法、生物法及联合处理法。其中，生物法是一种经济有效的净化方法，但废水的高毒性限制了其使用，因此，培养筛选出对苯胺有高效降解能力的菌种，使之广泛用于苯胺类化合物废水具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服生物法处理苯胺废水时存在的缺点与不足，提供一种苯胺废水优势降解菌。本专利技术的另一个目的是提供所述苯胺废水优势菌的筛选富集方法，该方法有效的提高了苯胺废水的降解效率。所述的苯胺废水优势降解菌的筛选富集方法，包括如下步骤：(1)制备菌液：将苯胺废水排污口污泥加入无菌水中，苯胺废水排污口污泥的浓度为0.06g/mL，摇床避光培养24h，得到菌悬液；在灭菌后的无机盐培养基中接种菌悬液，菌悬液的接种量为无机盐培养基体积的5％，摇床避光培养7d，得到菌液；(2)制备苯胺废水降解菌系：将葡萄糖加入步骤(1)的菌液中，按菌液体积的5％接种苯胺废水，摇床避光进行传代培养，得到苯胺废水降解菌系培养液；每次传代培养时菌液中葡萄糖的量均比上一代减少1/5，苯胺废水的量均比上一代增加，每次增加量为菌液体积的5％，每次传代培养7d，传代培养≥五代，最后一代培养时培养基中不再添加葡萄糖；(3)筛选苯胺废水降解菌系：往无机盐培养基中加入琼脂，灭菌后，待无机盐培养基凝固后加入经梯度稀释的步骤(2)的苯胺废水降解菌系培养液中并涂布均匀，30℃培养7d，挑取周围有透明圈的菌落，重复进行接种培养并划线分离，得到纯化的苯胺废水降解菌系；(4)对纯化的苯胺废水降解菌系进行复筛：将步骤(3)纯化的苯胺废水降解菌系接种于LB培养基中，长出菌落后，制备成浓度为OD600＝1的菌液，备用；步骤(1)中，所述的摇床避光条件为30℃、140r/min；所述的无机盐培养基的组分为：NaCl1.0g,NH4NO30.4g，KH2PO41.0g，K2HPO41.0g，酵母浸粉0.2g，微量元素液4mL，蒸馏水1000mL，调pH值为7.0；所述的微量元素液的组成为：MgSO41.0g，CuSO40.5g，MnSO40.5g，FeSO4·7H2O0.5g，CaCl20.5g，蒸馏水500mL。步骤(2)中，所述的苯胺废水的浓度为100mg/L；所述的葡萄糖的重量为无机盐培养基重量的0.5％；所述的摇床避光的条件为于30℃、140r/min培养7天；所述的无机盐培养基的组分为：NaCl1.0g，NH4NO30.4g，KH2PO41.0g，K2HPO41.0g，酵母浸粉0.2g，微量元素液4mL，蒸馏水1000mL，调pH值为7.0；所述的微量元素液的组成为：MgSO41.0g，CuSO40.5g，MnSO40.5g，FeSO4·7H2O0.5g，CaCl20.5g，蒸馏水500mL。步骤(3)中，所述的琼脂的重量为无机盐培养基重量的2％；所述的无机盐培养基与步骤(2)的苯胺废水降解菌系培养液的体积比为100:1；所述的梯度稀释为将步骤(2)的苯胺废水降解菌系培养液按照体积分别稀释103、104、105倍；所述的无机盐培养基的组分为：NaCl1.0g，NH4NO30.4g，KH2PO41.0g，K2HPO41.0g，酵母浸粉0.2g，微量元素液4mL，蒸馏水1000mL，调pH值为7.0；所述的微量元素液的组成为：MgSO41.0g，CuSO40.5g，MnSO40.5g，FeSO4·7H2O0.5g，CaCl20.5g，蒸馏水500mL。步骤(4)中，所述的LB平板培养基的组成为：蛋白胨2.5g，牛肉膏0.75g，NaCl1.25g，蒸馏水250mL。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：本专利技术采用生物法处理苯胺废水，具有能耗低、反应条件温和且效率较高。本专利技术具有专属适应性微生物的筛选驯化培养，降解菌株对苯胺废水的降解效率可以达到75％以上，对于提高生物反应系统的耐受性和稳定性、提高降解效率具有重要意义。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1(1)菌源的采集与菌悬液的制备：采集南京某公司苯胺排污口土壤，将污泥置于4℃冰箱中保存备用；将20g采集回来的土壤置于250mL的无菌水中，30℃振荡12小时，制成菌悬液；(2)取5mL菌悬液注入盛有100mL无机盐培养基的锥形瓶中，放置于30℃恒温摇床内，140r/min震荡培养7d，得到菌液；(3)无机盐培养基：无机盐培养基的组分为：NaCl1.0g，NH4NO30.4g，KH2PO41.0g，K2HPO41.0g，酵母浸粉0.2g，微量元素液4mL，蒸馏水1000mL，调pH值为7.0；其中微量元素液的组成为：MgSO41.0g，CuSO40.5g，MnSO40.5g，FeSO4·7H2O0.5g，CaCl20.5g，蒸馏水500mL；(4)取1mL步骤(2)中的菌液，加入100mL的无机盐培养基中，30℃，140r/min震荡培养7d，其中无机盐培养基中加入苯胺的含量至50mg/L，加入葡萄糖的含量至200mg/L；(5)取1mL步骤(4)中的菌液，加入100mL的无机盐培养基中，30℃，140r/min震荡培养7d，其中无机盐培养基中加入苯胺的含量至100mg/L，加入葡萄糖的含量至100mg/L；(6)取1mL步骤(5)中的菌液，加入100mL的无机盐培养基中，30℃，140r/min震荡培养7d，其中无机盐培养基中加入苯胺的含量至150mg/L，加入葡萄糖的含量至50mg/L；(7)取1mL步骤(6)中的菌液，加入100mL的无机盐培养基中，30℃，140r/min震荡培养7d，其中无机盐培养基中加入苯胺的含量至200mg/L，不再加葡萄糖；(8)将步骤(7)中的菌液进行梯度稀释，所述梯度稀释是将步骤(7)中的硝基苯降解菌系培养液按照体积分别稀释103、104、105倍，涂布于固体平板上，30℃培养7d，挑取周围有透明圈的菌落，重复接种培养并划线分离，得到纯化的苯胺废水降解菌。(9)对纯化的苯胺废水降解菌进行复筛：将步骤(8)得到的苯胺废水降解菌接种于LB平板培养基中，培养7d，待长出菌落后，将菌种刮于无菌水中，将菌打散成菌液，调节菌液的浓度为OD600＝1，备用。所述L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.本专利技术提供了一种苯胺废水优势菌的驯化及筛选方法，属于微生物优势菌筛选技术领域。/n

【技术特征摘要】
1.本发明提供了一种苯胺废水优势菌的驯化及筛选方法，属于微生物优势菌筛选技术领域。


2.该方法包括如下步骤：(1)制备菌液；(2)制备硝基苯废水降解菌系；(3)筛选硝基苯废水优势降解菌系；(4)对纯化的降解菌进行复筛；其中步骤(2)是在步骤(1)的菌液中加入葡萄糖，再加入硝基苯废水，将其接入到无机盐培...

【专利技术属性】
技术研发人员：王瑞，
申请(专利权)人：南京科技职业学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32