一种样品中蛋白质的检测方法技术

本申请属于化学检测技术领域，具体涉及一种样品中蛋白质的检测方法。所述检测方法为采用浊度仪来测定；所述样品在酸性5‑磺基水杨酸水溶液中可溶解。该方法以浊度仪法测定蛋白质的含量，方法灵敏度高(检测限浓度3.351ng/ml、定量限浓度10.16ng/ml)，稳定性好(2小时至24小时内稳定)，准确度高，可准确的测定样品中蛋白质的量。

【技术实现步骤摘要】
一种样品中蛋白质的检测方法
本申请属于化学检测
，具体涉及一种样品中蛋白质的检测方法。
技术介绍
酶法或发酵法生产的物质中可能含有酶或微生物组织的残留，其主要成份为蛋白质，外源性蛋白质有可能导致人体过敏等不良反应，因此，为更好的对样品进行质量控制，需对蛋白质的量进行定量检测并控制，以保证样品的安全性。专利CN102000139A中公开了艾迪注射制剂的检测方法，其中涉及到蛋白质检查，具体内容为：蛋白质：取冻干粉针10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取输液4-10ml浓缩至1ml、或取水针剂1ml；加新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊。中国药典2020年版二部葡萄糖质量标准蛋白质检查项，具体内容为：取本品1.0g，加水10ml溶解后，加磺基水杨酸(1→5)3ml，不得发生沉淀。可见，浊度法作为蛋白质的定性检查方法已经被应用，上述两种检测的共同点均为定性检查，无法准确检测蛋白质的具体含量，目前尚无采用浊度仪法作为定量测定蛋白质的方法。知乎帖子《蛋白质定量分析的十种方法(下)》，发表日期2020-07-21，公开了蛋白质定量分析的方法，其中提到：“浊度法蛋白质定量分析：利用沉淀剂与蛋白质反应所产生的浊度与标准溶液浊度比较而定量测得未知蛋白浓度的定量分析法。磺基水杨酸和三氯化铁是常用的蛋白质沉淀剂。30g·L-1磺基水杨酸作为沉淀剂可沉淀白蛋白、球蛋白及血红蛋白。50g·L-1三氯乙酸蛋白作沉淀剂，可沉淀白蛋白和球蛋白。”该帖子提及浊度法可以作为蛋白质的定量分析方法，但未详细说明到底怎么样操作才能实现用浊度法定量检测蛋白质的量。通过浊度比较仅可得知蛋白浓度的大致范围，但无法准确测得蛋白质的含量，在蛋白质浓度较低或相近时，肉眼的分辨率将无法确定是否有浊度或浊度的差异，无法扣除非蛋白质浊度的干扰。因此该方法仍为定性检查方法，无法准确检测蛋白质的具体含量。专利CN101865926A中记载到：现行药典(2010年版)控制中药注射剂蛋白含量的方法沿用了以前的磺基水杨酸比浊法，控制的蛋白质限量约为37～110μg/ml左右，低于此限量的蛋白药典方法很难检出。因此，蛋白含量低于37μg/ml的中药注射剂将被视为“合格”，这导致磺基水杨酸法应用范围受限。该专利记载了浊度法测定蛋白质的方法的缺陷，即最低限量浓度过高，蛋白含量低于37μg/ml的溶液采用浊度法无法检测。
技术实现思路
为了解决上述的技术问题，本申请解决的技术问题在于提供一种样品中蛋白质的检测方法。本申请的检测方法能够实现样品中蛋白质的检测，且灵敏度高、准确性高与稳定性好。有鉴于此，本申请提供了所述检测方法为浊度仪法，采用浊度仪来测定；所述样品需在酸性5-磺基水杨酸水溶液中可溶解。所述性5-磺基水杨酸水溶液浓度可以为10ppm5-磺基水杨酸溶液～5-磺基水杨酸饱和溶液。所述样品可以在酸性5-磺基水杨酸水溶液中可溶解的药品，药品辅料，食品等。所述检测方法包括如下步骤：(a)校正溶液的制备；(b)供试品溶液的制备；(c)标准品溶液的制备；(d)测定法。因样品溶液本身可能有浊度，需消除该浊度对蛋白质检测的干扰，所述校正溶液制备方法为：取待测样品，加溶剂溶解并配制成适宜浓度的溶液并测定该溶液的浊度，得校正溶液浊度，供试品溶液浊度扣除校正溶液浊度即为供试品溶液中蛋白质产生的浊度。所述校正溶液溶解所用溶剂为水或适宜浓度的酸溶液。所述酸溶液为无浊度且对蛋白质生成的沉淀无干扰的酸溶液，例如盐酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液、磷酸溶液、甲酸溶液、乙酸溶液、甲磺酸溶液、马来酸溶液、琥珀酸溶液、酒石酸溶液、柠檬酸溶液、富马酸溶液，氢溴酸溶液，所述浓度可以为10ppm-该酸溶液的饱和溶液。所述供试品溶液的制备方法为：取待测样品与5-磺基水杨酸，加水溶解并定量稀释制得所需浓度的溶液。所述供试品溶液中5-磺基水杨酸的浓度为供试品溶液中蛋白质浓度的300～120000倍。所述标准品溶液的制备方法为：取蛋白质标准品与5-磺基水杨酸，加溶剂溶解并定量稀释制得含蛋白质0～70μg/ml，并含与供试品溶液中相同浓度5-磺基水杨酸的溶液。上述的样品中蛋白质的检测方法，详细步骤为：5-磺基水杨酸溶液：取5-磺基水杨酸，加水溶解并定量稀释制得的溶液，记录浓度为C；供试品溶液取待测样品，记录其质量为M1克，加5-磺基水杨酸溶液，记录5-磺基水杨酸溶液体积为V2毫升，振摇使溶解，用水定量稀释，摇匀记录稀释后的体积为V1毫升；样品校正溶液取待测样品，记录其质量为M2克，加溶剂(水或盐酸溶液)溶解并定量稀释至V1毫升，摇匀；标准品溶液取蛋白质标准品与5-磺基水杨酸溶液，用水制得含蛋白质0～70μg/ml、含5-磺基水杨酸浓度为C×V2/V1的线性关系溶液；系统适用性标准品溶液浓度与相应浊度值的线性回归方程相关系数r应不小于0.99；测定法取各标准品溶液，依法测定(中国药典2020年版通则0902第二法)，记录浊度值，计算标准品溶液浓度与相应浊度值的线性回归方程；另取溶剂、样品校正溶液、5-磺基水杨酸溶液、供试品溶液，同法测定，记录浊度值并用相应的线性回归方程计算蛋白质的含量，公式如下：校正浊度值T＝T0-T1-(T2-T3)×(M1/M2)含量％＝[T0-T1-(T2-T3)×(M1/M2)-b]/k×V1/M1×100％。式中：T：校正浊度值；T0：供试品溶液浊度值；T1：20％5-磺基水杨酸浊度值；T2：样品校正溶液浊度值；T3：溶剂浊度值；M1：供试品溶液中样品称样量；M2：样品校正溶液中样品称样量；V1：供试品溶液与校正溶液的体积；b：线性回归方程中截距项；k：线性回归方程中斜率项。所述样品校正溶液中的溶剂为水或盐酸溶液。所述盐酸溶液的浓度为0.1mmol/L～10mol/L。中国药典2020年版三部通则0731蛋白质含量测定法收载了6种蛋白质测定法，第2、3、4、5法均采用血清白蛋白质(牛)或蛋白质含量测定国家标准品进行相应测定。故本申请中采用血清白蛋白质(牛)来测定样品中蛋白质的含量。本申请的样品中蛋白质的检测方法，其原理为：5-磺基水杨酸电离生成的磺酸根离子可与蛋白质中氨基酸阳离子结合，生成不溶性的蛋白质盐沉淀而产生浑浊，浊度值与蛋白质的浓度成正比。配制不同浓度的蛋白质溶液与5-磺基水杨酸反应并用浊度仪测定浊度值，浊度值与蛋白质浓度线性回归得线性方程；制备待测供试品溶液并通过浊度仪测定浊度值，浊度值代入线性方程可计算可求得蛋白质的浓度，进而计算得供试品中蛋白质的含量。作为本专利技术的具体样品的检测方法，可以为：一种头孢丙烯中蛋白质的检测方法，包括如下步骤：5-磺基水杨酸溶液：取5-磺基水杨酸，加水溶解并定量稀释制得的溶液，记录浓度为C；供试品溶液取头孢丙烯样品，记录其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种样品中蛋白质的含量检测方法，其特征在于，所述检测方法为采用浊度仪来测定；所述样品在酸性5-磺基水杨酸水溶液中可溶解。/n

【技术特征摘要】
1.一种样品中蛋白质的含量检测方法，其特征在于，所述检测方法为采用浊度仪来测定；所述样品在酸性5-磺基水杨酸水溶液中可溶解。


2.根据权利要求1所述的样品中蛋白质的含量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：
(a)校正溶液的制备；
(b)供试品溶液的制备；
(c)标准品溶液的制备；
(d)测定法。


3.根据权利要求2所述的样品中蛋白质的检测方法，其特征在于，所述校正溶液制备方法为：取待测样品，加溶剂溶解并配制成适宜浓度的溶液，目的为测定样品本身的浊度，供试品溶液浊度扣除校正溶液浊度即为供试品溶液中蛋白质产生的浊度。


4.根据权利要求2所述的样品中蛋白质的检测方法，其特征在于，所述校正溶液溶解所用溶剂为水或适宜浓度的酸溶液。


5.根据权利要求2所述的样品中蛋白质的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为：取待测样品与5-磺基水杨酸，加水溶解并定量稀释制得所需浓度的溶液。


6.根据权利要求2所述的样品中蛋白质的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液中5-磺基水杨酸的浓度为供试品溶液中蛋白质浓度的300-120000倍。


7.根据权利要求2所述的样品中蛋白质的检测方法，其特征在于，所述标准品溶液的制备方法为：取蛋白质标准品与5-磺基水杨酸，加溶剂溶解并定量稀释制得含蛋白质0～70μg/ml并含与供试品溶液中相同浓度5-磺基水杨酸的溶液。


8.根据权利要求3所述的样品中蛋白质的检测方法，其特征在于，详细步骤为：
...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹悦兴，张展，任霞，闫婷婷，贾右刚，
申请(专利权)人：济南尚诚医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37