T-ALL耐药模型的构建及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种MAEL基因的特异性敲降试剂在制备逆转T‑ALL耐药性症状的药物中的应用。本发明专利技术还公开了一种细胞，所述细胞源自T‑ALL生物体，所述细胞在编码MAEL的靶DNA序列中包含破坏，所述破坏使得MAEL基因的表达量下降。

【技术实现步骤摘要】
T-ALL耐药模型的构建及应用
本专利技术涉及耐药性
，特别是涉及T-ALL耐药模型的构建及应用。
技术介绍
急性淋巴细胞白血病(ALL)是一种常见的血液系统恶性肿瘤，由造血干细胞的异常增殖和分化引起。T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)是由T细胞前体的基因改变引起的，导致胸腺、血液、骨髓和外周组织中T细胞的发育停滞和聚集。多年来，转录因子表达失调、CDKN2A/2B细胞周期调节因子的损伤和NOTCH1信号的过度激活在T-ALL的发病机制中起着重要作用。尽管T-ALL的诊断和治疗已经取得了很大的进展，但耐药、复发等难治性T-ALL的治疗仍然是临床亟待解决的问题，因此构建合适的T-ALL研究模型和耐药研究对于T-ALL的临床研究具有重要的作用。
技术实现思路
基于此，有必要针对T-ALL耐药的问题，提供一种T-ALL耐药模型的构建及应用。MAEL基因的特异性敲降试剂在制备逆转T-ALL耐药性症状的药物中的应用。在其中一些实施例中，所述特异性敲降试剂用以执行以下任意一种方法：CRISPR/Cas9、锌指核酸酶、TALEN、MegaTAL、大范围核酸酶、Cpf1、同源重组、RNAi。在其中一些实施例中，所述特异性敲降试剂包括引物或探针。在其中一些实施例中，所述特异性敲降试剂选自以下siRNA对中的至少一种：(SEQIDNO:25，SEQIDNO:26)；(SEQIDNO:27，SEQIDNO:28)；(SEQIDNO:29，SEQIDNO:30)。在其中一些实施例中，所述T-ALL耐药性症状所耐药的种类为γ-分泌酶抑制剂。一种细胞，所述细胞源自T-ALL生物体，所述细胞在编码MAEL的靶DNA序列中包含破坏，所述破坏使得MAEL基因的表达量下降。在其中一些实施例中，所述破坏是插入突变、错义突变、移码突变或缺失突变。在其中一些实施例中，所述破坏使得所述细胞的MRP基因的表达量下降。在其中一些实施例中，所述破坏使得所述细胞的LRP基因的表达量下降。在其中一些实施例中，所述细胞为T-ALL体细胞通过基因重排而获得的诱导多能干细胞。本专利技术首次发现MAEL基因的高表达与T-ALL的耐药直接相关，通过MAEL基因敲降，可逆转T-ALL的多药耐药。附图说明图1为本专利技术一实施例的PBMC细胞重编程为iPSC过程的显微拍摄图(40×)；图2为本专利技术一实施例的iPSC克隆传代10次后的显微拍摄图(40×)；图3为本专利技术一实施例的iPSC克隆的碱性磷酸酶染色结果(40×)；图4为本专利技术一实施例的iPSC四种多能性标志蛋白的免疫荧光染色图；图5为本专利技术一实施例的畸胎瘤的三胚层HE染色图；图6为本专利技术一实施例的Notch1突变的基因组测序图，其中，H-iPS为健康人PBMC来源的iPS细胞，W10-iPS为T-ALL来源的iPS细胞；图7为本专利技术一实施例的LY411575药物处理W10-iPS的IC50曲线图；图8为本专利技术一实施例的非耐药W10-iPS与耐药W10-R的耐药性流式检测图；图9为本专利技术一实施例的非耐药iPS和耐药iPS生信分析结果图；图10为本专利技术一实施例的6种基因敲降W10-R的耐药性流式检测图；图11为本专利技术一实施例的MAEL基因敲降W10-R的耐药性流式检测图；图12为本专利技术一实施例的各组细胞内MAEL、MRP、LRP基因的相对表达量统计图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本专利技术首次发现MAEL基因的高表达与T-ALL的耐药直接相关，通过MAEL基因敲降，可逆转T-ALL的多药耐药。本专利技术实施例提供一种MAEL基因的特异性敲降试剂在制备逆转T-ALL耐药性症状的药物中的应用。实现基因敲降的方法有很多。基因敲降并不局限于将整个基因完整缺失或去除，而只要使基因丧失其原有功能即可。例如，可通过在基因中插入外源DNA片段，使得该基因无法表达功能性蛋白，或可通过在基因中插入或缺失一个或数个碱基，使得该基因发生移码突变，来实现对该基因的敲除。在一些实施方式中，所述特异性敲降试剂用以执行以下任意一种方法：CRISPR/Cas9、锌指核酸酶、TALEN、MegaTAL、大范围核酸酶、Cpf1、同源重组、RNAi。优选的，通过RNA干扰(RNAi)实现MAEL基因敲降。RNA干扰技术是近年来常用的一种抑制靶基因表达的方法，采用19-23个碱基或发卡状不同长度的双链RNA可使不同类型细胞的靶基因表达明显降低。RNA干扰技术可以作为基因下调的一项有效技术手段来弥补敲除技术的不足，从而鉴定未知功能的基因转录本。在发育生物学领域，哺乳动物由卵母细胞到受精卵再到后代个体的整个发育过程具有极大的复杂性。因此，将RNA干扰技术应用于胚胎发育领域的研究将有助于深入地揭示调节胚胎发育过程中关键分子生物学的发生机理。在哺乳动物卵母细胞及胚胎中RNA干扰已经得到了广泛应用。RNA干扰技术可以将目的基因特异、高效地下调，这一过程可以通过小干扰RNA(siRNA)以及短发夹RNA(shRNA)这两种类型小分子得以实现，siRNA是体外化学合成的双链小干扰RNA，shRNA是基于质粒的短发夹RNA。在胞内滞留时间方面，转染后48小时内，仅有部分siRNA滞留于胞内，大部分则被降解，而shRNA则可以被宿主细胞持续的合成，所以其作用更为持久，但siRNA发挥作用的速度则相对较快，因为shRNA需要一定的时间来进行转录。在一些实施方式中，所述特异性敲降试剂包括引物或探针。在一些实施方式中，所述特异性敲降试剂选自以下siRNA对中的至少一种：(SEQIDNO:25，SEQIDNO:26)；(SEQIDNO:27，SEQIDNO:28)；(SEQIDNO:29，SEQIDNO:30)。本专利技术实施例还提供一种细胞，所述细胞源自T-ALL生物体，所述细胞在编码MAEL的靶DNA序列中包含破坏，所述破坏使得MAEL基因的表达量下降。短语″基因的破坏″或任何类似的短语是指天然DNA序列的位点特异性打断，从而与基因的野生型拷贝相比阻止该基因在细胞中的表达。在一些实施方式中，所述破坏是插入突变、错义突变、移码突变或缺失突变或其任意组合造成。在一些实施方式中，所述破坏使得所述细胞的MRP基因的表达量下降。在一些实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.MAEL基因的特异性敲降试剂在制备逆转T-ALL耐药性症状的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.MAEL基因的特异性敲降试剂在制备逆转T-ALL耐药性症状的药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述特异性敲降试剂用以下任意一种方法：CRISPR/Cas9、锌指核酸酶、TALEN、MegaTAL、大范围核酸酶、Cpf1、同源重组、RNAi。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述特异性敲降试剂包括引物或探针。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述特异性敲降试剂选自以下siRNA对中的至少一种：(SEQIDNO:25，SEQIDNO:26)；(SEQIDNO:27，SEQIDNO:28)；(SEQIDNO:29，SEQIDNO:30)。


5.根据权利要求1～4任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘韬，陈雪梅，
申请(专利权)人：深圳市罗湖区人民医院，
类型：发明
国别省市：广东;44