羊卵巢成熟相关的基因及其应用制造技术

本发明专利技术涉及羊卵巢成熟相关的基因及其应用，具体涉及lncRNA为LOC105610626及其靶基因IGFBP2在制备检测卵巢成熟的试剂中的应用。羊卵巢的成熟是影响羊养殖场繁殖的重要因素，本申请通过高通量测序技术研究卵巢成熟相关的基因，探索影响卵巢成熟的分子机制，为羊生物育种提供研究基础。

【技术实现步骤摘要】
羊卵巢成熟相关的基因及其应用
本专利技术属于细胞工程和基因工程
，具体涉及羊卵巢成熟相关的基因及其应用。
技术介绍
羊作为我国重要的经济动物，不仅提供了大量的肉制品，还是许多皮毛产品的重要来源。随着人们生活水平的提高，对羊的需求量和产品质量要求越来越高，但现有的生产水平不能满足日益增长的需求，供需差异越来愈大。因此在保证羊肉质量的同时，提高羊繁殖能力，增加羊肉及毛制品产量，能成功的缓解当下供需不足的紧张情况，具有较好的实际意义和发展前景。生育和繁殖能力是影响绵羊养殖场经济的重要因素，世界绵羊品种繁多，但具有高繁殖率的品种很少，绝大多数只生产单只羔羊，多胎品种少之又少。湖羊是我国重要的绵羊品种之一，品种特点是繁殖力高、性成熟较早，也是研究控制绵羊卵巢发育和产仔数的遗传机制的理想资源。已有研究发现lncRNA虽然不具有编码蛋白质的性质，但是能在转录和转录后水平影响基因发挥功能，其作为一类新的重要调节因子广泛参与各种生理和病理过程。对卵母细胞分化和成熟、卵巢内各种细胞发育、以及激素分泌和卵巢功能的发挥具有重要的调控作用。此外还与多囊卵巢综合征(PCOS)等卵巢发育相关疾病的产生和治疗有关，因此lncRNA表达失调常常导致多种疾病。本申请选取中国本土湖羊品种为实验对象，采用RNA-seq技术对卵巢组织中的lncRNA进行测序分析，比较3月龄、8月龄的湖羊卵巢组织中lncRNA的差异表达情况，利用生物信息学方法筛选出两个阶段差异表达的lncRNA及其调控基因，从而筛选出调控卵巢成熟的lncRNA及其靶基因，探索lncRNA影响卵巢成熟的调控机制，为增强繁殖能力和繁殖速度提供有力依据，为家畜的生物育种提供理论基础。
技术实现思路
一种与羊卵巢成熟相关的lncRNA，所述lncRNA为LOC105610626，序列与SEQIDNO.1具有90％以上序列同源性。优选的，LOC105610626序列与SEQIDNO.1具有95％以上序列同源性；更优选的，长链非编码RNA序列为SEQIDNO.1。LOC105610626用于制备检测卵巢成熟水平试剂中的应用。优选的，通过测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测LOC105610626基因的表达水平。优选的，核酸扩增技术采用一对特异性引物扩增LOC105610626基因；核酸杂交包括与IGFBP2基因的核酸序列杂交的探针。优选的，卵巢为羊卵巢。一种检测羊卵巢成熟的试剂，试剂包含用于核酸扩增的引物对，检测LOC105610626基因的表达水平。优选的，用于核酸扩增的引物对序列为SEQIDNO.2和SEQIDNO.3。优选的，试剂检测的样本为组织。本专利技术提供IGFBP2在制备检测卵巢发育水平试剂中的应用。优选的，通过测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测IGFBP2基因的表达水平。优选的，核酸扩增技术采用一对特异性引物扩增IGFBP2基因；核酸杂交包括与IGFBP2基因的核酸序列杂交的探针。优选的，通过免疫方法检测IGFBP2基因表达产物的表达水平。优选的，通过ELISA检测试剂盒和/或胶体金检测试剂盒检测IGFBP2基因达产物的表达水平。优选的，卵巢为羊卵巢。附图说明图1为总RNA琼脂糖凝胶电泳结果；图2为卵巢组织差异表达mRNAKEGGpathway富集分析(H3vsH8)图图3为3月龄VS8月龄卵巢组织差异表达lncRNA和mRNA共表达网络图，三角形节点代表lncRNA，圆形节点代表mRNA；图4为差异表达基因qRT-PCR验证结果图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本专利技术的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本专利技术的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。实施例1样品的采集剂RNA提取1.1样品的采集将3月龄和8月龄的羊屠宰后，将两侧的卵巢组织摘除，剪成小块组织样后迅速放入冻存管中并投入液氮中保存，组织样温度维持低温后放入-80℃冰箱中保存，整个过程保持无菌环境，所有器具消毒处理。试验设置为3组，采集3月龄、8月龄的湖羊卵巢组织，进行3月龄湖羊卵巢组织与8月龄湖羊卵巢组织(H3vsH8)差异的lncRNA和mRNA的鉴定，每个组安排3个生物学重复。1.2样本RNA的提取和质量检测每个样品分别取出等量的卵巢组织用来提取RNA，保证无菌环境，并将得到的所有RNA在-80℃低温保存。提取RNA后，用NanoDrop2000紫外分光光度计对所提RNA的纯度和浓度进行检测，在1.5％琼脂糖凝胶上监测RNA降解和污染，尤其是DNA污染，测定RNA的完整性。使用Bioanalyzer2100检测样品RNA的质量情况，测定RIN值。建库测序的要求是RNA总量不少于2ug，OD260nm和OD280nm两者比值在1.9-2.1的范围内、RIN>＝7且28S/18S>＝0.7，浓度≥100ng/μL，以确保使用合格的样品进行转录组测序，同时满足以上条件的样品可以进行下一步实验。结果如图1表示，可以看出28S和18S条带清晰可见，各个样品结果中RIN≥7、28S/18S≥1且OD260/280两者比值在1.9-2.1的范围内，表明RNA较完整，污染较少，样品合格，符合测序要求。实施例2测序及数据分析构建cDNA文库：建立cDNA文库，分别为H3O2、H3O3、H3O4(3月龄湖羊卵巢组织cDNA文库)，H8O1、H8O2、H8O3(8月龄湖羊卵巢组织cDNA文库)。文库质检合格后，可以进行上机测序。利用IlluminaHiSeq平台进行对检测合格的cDNA文库进行测序，对下机之后的原始数据(rawdata)进行分析。预测lncRNA首先需要完成基本筛选，再检测是否具有潜在编码能力，首先筛选包含intergeniclncRNA，introniclncRNA,sense-lncRNA和anti-senselncRNA等不同类型的转录本。表达水平分析及差异表达基因筛选：对样品中的MappedReads的数目和转录本长度进行归一化，采用FPKM法(FragmentsPerKilobaseoftranscriptperMillionfragmentsmapped)作为衡量mRNA和lncRNA表达水平的指标，即每一百万条序列中，每个基因以一千个碱基为单位，比对上的reads个数。本实验具有生物学重复，利用DESeq2进行差异表达分析，差异倍数(FC)表示某个基因在两个比较组之间的表达量关系，p值(p-value)是表示基因差异是否显著的另一个标准，对p值校正之后得到的FDR表示错误发现率。在差异基因筛选过程中(H3vsH8)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与羊卵巢成熟相关的lncRNA，所述lncRNA为LOC105610626，序列与SEQID NO.1具有90％以上序列同源性。/n

【技术特征摘要】
1.一种与羊卵巢成熟相关的lncRNA，所述lncRNA为LOC105610626，序列与SEQIDNO.1具有90％以上序列同源性。


2.根据权利要求1所述的lncRNA，其特征在于，LOC105610626序列与SEQIDNO.1具有95％以上序列同源性；优选的，长链非编码RNA序列为SEQIDNO.1。


3.LOC105610626用于制备检测卵巢成熟水平试剂中的应用。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，通过测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测LOC105610626基因的表达水平。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，核酸扩增技术采用一对特异性引物扩增LOC105610626基因；核酸杂交包括与IGFBP2基因的核酸序列杂...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗向阳，解领丽，冯卉，刘天义，黄万龙，李嫒，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11