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基于“Western Blot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒及其制备方法技术

技术编号:28833110 阅读:55 留言:0更新日期:2021-06-11 23:29
本发明专利技术涉及体外检测技术领域,特别涉及一种基于“Western Blot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒。其包括盒体,及盖体,在盒体内设有用于检测阿尔茨海默病的检测卡,酶,底物,缓冲液,检测卡包括卡体,在卡体上分别设置有对照区,以及用于检测该疾病的检测区,检测区上设置有用于检测人体口腔咽喉部分泌物的膜体,膜体上具有与阿尔茨海默抗原相结合的特异性抗体。还包括一种阿尔茨海默早期检测试剂盒的制备方法,本发明专利技术通过采用Western Blot法来制备阿尔茨海默早期检测试剂盒,能够快速得到检测结果,实现了真正意义上阿尔茨海默的早期检测,准确率高,使用更便捷,在使用时无需各种检测仪器,更易于推广,无创伤,安全,值得被广泛推广应用。

【技术实现步骤摘要】
基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及体外检测
,特别涉及一种基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是最为常见的痴呆病症。这种病症是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病,主要特征就是影响到记忆、思维与交流的大脑功能丧失,病因迄今未明。阿尔茨海默病通常影响超过65周岁的老年人,与神经细胞间β淀粉样蛋白的累积以及神经细胞中磷酸化的tau蛋白有关。这些蛋白质的聚集是会破坏神经细胞的功能。由于阿尔兹海默是一种发病进展缓慢,随着时间不断恶化且不可逆的中枢神经系统退行性疾病,患者通常会从早期的近期记忆减退发展到丧失身体机能,最终导致死亡。当人们被诊断出患有该病时,通常还能活5-10年,然而新的研究显示这种病的存活率正在不断下降,目前,患上该病之后大约还能存活3.3年。AD不但直接威胁生命,还造成生活质量严重下降,连带的劳动力丧失和护理成本更是不可计量。随着世界人口的老龄化,AD的发病率也在逐年上升,已成为继心脑血管疾病和肿瘤后第三大危及人类生命健康的疾病。我国有部分城市的流行病学调查显示,在55岁及以上的人群中,AD患病率为2.1%,由此带来的社会、经济、家庭和社会公共卫生问题也日益突出。目前,主要依靠出现痴呆症状及评估精神量表等来明确诊断。临床诊断的AD患者基本都处于中晚期,现有的治疗均难以取得满意的疗效。因此,近年来AD的研究方向逐渐转向了临床前期AD,科研人员希望通过在出现AD症状前找到能提示AD的生物标志物,从而开发早期预防和减缓AD的药物干预措施。目前,采用免疫结合反应的原理来检测阿尔茨海默病的方法有酶联免疫吸附测定法(enzymelinkedimmunosorbentassay,简写ELISA)、PCR法、免疫组化法等。其中,应用较多的为ELISA法,其是指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。上述方法主要是针对已有发病症状的被检测者进行检测,而不能针对未发病的被检测者进行检测。因为,上述方法均采用检测抗体的方式进行检测被检测者是否患有阿尔茨海默病。众所周知,当体内产生特异性抗体时,说明抗原已经在体内存在至少一个月的时间了,也就是说,该被检测者已经患有阿尔茨海默病,那么就表现出症状,所以说上述方法是针对已有发病症状的被检测者进行检测的。那么,也就是不属于早期诊断,而属于中晚期诊断,与早期诊断相比会耽误最佳干预时机。目前还没有研究然人员将WesternBlot法应用于阿尔兹海默病的检测中。如公开号为CN107238711A,名称为一种检测阿尔茨海默病外周血蛋白标志物的诊断试剂盒及其检测方法,该专利申请的方法及试剂盒具有高灵敏度、高通量性等优点,能够对多种阿尔茨海默病相关蛋白标志物同时进行定性和定量检测,检测方法更准确、方便快捷。如专利CN112162101A,其公开了一种检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒,其包括辣根过氧化物酶标记的生物标志物抗体溶液、抗生物标志物抗体包被的酶标板、浓缩洗液、发光底物液、校准品和质控品,并公开抗生物标志物抗体包被的酶标板的制备方法。虽然该专利在化学发光免疫分析基础上,引入具有抗生物标志物抗体包被的酶标板,改进抗生物标志物抗体包被工艺,提高反应的灵敏度,简化了试剂生产流程,缩短了生产时间,为市场提供质优价廉、稳定可靠、重复性好、批间差小、准确度高的检测试剂盒。但是上述专利中在进行检测时需要借助分析仪,检测过程较为复杂,对操作人员要求较高,环境要求也高,且仪器昂贵,检测时间较长,由于仪器不便于携带,且操作复杂,不利于推广应用。再如专利CN111175277A,公开了一种用于检测阿尔兹海默病生物标记物的检测试剂、试剂盒、制备方法和检测方法,其公开了检测试剂,其包括第一检测试剂和第二检测试剂中的至少一种;所述第一检测试剂包括同时负载有第一抗体和拉曼信号分子的纳米金属颗粒;所述第二检测试剂包括负载有第二抗体的SERS基底,所述SERS基底为磁性氧化石墨烯;其中,所述第一抗体和所述第二抗体均能够特异性结合所述阿尔兹海默病的生物标记物。虽然采用该专利提供的检测试剂、试剂盒或方法检测阿尔兹海默病的生物标记物,能够简便、准确、高效地对生物标志物定量检测,能够满足对灵敏性和特异性等方面的要求。其采用了免疫学三大工具之一免疫组化,对组织(细胞)内抗原进行定性、定位的研究,但是达不到早期诊断的目的,因其采用抗原-抗体-二抗酶的模式进行检测,众所周知,当体内产生特异性抗体时,说明抗原已经在体内存在至少一个月的时间了,所以其不属于早期诊断,而属于中晚期诊断,与早期诊断相比会耽误最佳干预时机。二是,由于检测时需要操作相关仪器,不仅推广上有难度,且检测过程较为复杂,检测时间较长,一般得到检测结果需要2-3小时,同时误差较大,检测准确率不高。还有就是检测结果样本不能保存,随用随弃,而不能对干预后的患者再次检测时提供参考,不能为后期医师提供诊断指导。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足,本专利技术所要解决的技术问题是,提供一种可实现早期检测,使用便捷,检测快速,检测准确率高,无创伤,易于推广的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒及其制备方法。本专利技术为实现上述目的采用的技术方案是:基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,包括盒体,以及设置于盒体上的盖体,在盒体内设置有用于检测阿尔茨海默病的检测卡,用于标记检测卡上载有的生物标志物的酶,用于与酶反应后显色的底物,以及用于分别对标记、滴加底物完成后的检测卡进行清洗的缓冲液,所述检测卡包括卡体,在卡体上分别设置有对照区,以及用于检测该疾病的检测区,所述检测区上设置有用于检测人体口腔咽喉部分泌物的膜体,所述膜体上具有与阿尔茨海默抗原相结合的特异性抗体。上述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,所述卡体设置于盒体的上端,并与盒体固定连接,在卡体上沿检测区外边缘设置有用于防止待测样本溶液滴加至检测区上时待测样本溶液流出的边框,所述对照区设置于边框内。上述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,所述检测区与对照区纵向固定连接成一体后固定于卡体上,所述卡体放置于盒体内。上述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,所述检测区与对照区分开设置。上述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,所述卡体的面积为盒体上顶面面积的一半设置。上述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,所述卡体为玻璃板。上述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,所述人体口腔咽喉部分泌物为含有口腔腮部上皮细胞的漱口水。上述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,在所述对照区内设置有阳性阴性对照卡,本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种基于“Western Blot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,包括盒体,以及设置于盒体上的盖体,在盒体内设置有用于检测阿尔茨海默病的检测卡,用于标记检测卡上载有的生物标志物的酶,用于与酶反应后显色的底物,以及用于分别对标记、滴加底物完成后的检测卡进行清洗的缓冲液,所述检测卡包括卡体,在卡体上分别设置有对照区,以及用于检测该疾病的检测区,其特征在于:所述检测区上设置有用于检测人体口腔咽喉部分泌物的膜体,所述膜体上具有与阿尔茨海默抗原相结合的特异性抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,包括盒体,以及设置于盒体上的盖体,在盒体内设置有用于检测阿尔茨海默病的检测卡,用于标记检测卡上载有的生物标志物的酶,用于与酶反应后显色的底物,以及用于分别对标记、滴加底物完成后的检测卡进行清洗的缓冲液,所述检测卡包括卡体,在卡体上分别设置有对照区,以及用于检测该疾病的检测区,其特征在于:所述检测区上设置有用于检测人体口腔咽喉部分泌物的膜体,所述膜体上具有与阿尔茨海默抗原相结合的特异性抗体。


2.根据权利要求1所述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,其特征是:所述卡体设置于盒体的上端,并与盒体固定连接,在卡体上沿检测区外边缘设置有用于防止待测样本溶液滴加至检测区上时待测样本溶液流出的边框,所述对照区设置于边框内。


3.根据权利要求1所述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,其特征是:所述检测区与对照区纵向固定连接成一体后固定于卡体上,所述卡体放置于盒体内。


4.根据权利要求3所述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,其特征是:所述检测区与对照区分开设置。


5.根据权利要求2所述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,其特征是:所述卡体的面积为盒体上顶面面积的一半设置。


6.根据权利要求1所述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,其特征是:所述卡体为玻璃板。


7.根据权利要求1所述的基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒,其特征是:在所述对照区内设置有阳性阴性对照卡,所述膜体、阳性阴性对照卡均通过粘接的方式与卡体固定连接。


8.一种基于“WesternBlot”法的阿尔茨海默病早期检测试剂盒的制备方法,其特征是:所述膜体的制备步骤如下:
(一)、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
(1).准备玻璃板,依次用水、10%SDS、H2O,乙醇,和水冲洗干净,备用;
(2).依次将40ml的分离胶、8ml的浓缩胶置入电泳装置中;其中,

【专利技术属性】
技术研发人员:苏冬梅
申请(专利权)人:苏冬梅
类型:发明
国别省市:山东;37

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