一种透明质酸的纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种透明质酸钠的纯化方法，包括以下步骤：在低于45℃的温度下，调节透明质酸钠溶液的pH至碱性并保持，搅拌处理至微生物和内毒素含量达标，获得透明质酸钠溶液本发明专利技术的纯化方法通过在低温和碱性条件下，保持HA分子量的稳定、不降解，还去除细菌内毒素，杀灭和抑制微生物增长，无有毒有害抑制剂残留。采用的透明质酸的浓度较高，能够与现有浓缩工艺配套，不需要额外浓缩，节省成本。该方法能够有效降低微生物和内毒素含量，操作简便、成本低，适于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种透明质酸的纯化方法
本专利技术属于生物高分子制备领域，涉及一种不降低分子量的透明质酸纯化方法。
技术介绍
商品透明质酸为其钠盐形式，即透明质酸钠(简称SH或HA)。它为白色纤维状或粉末状固体，有很强的吸湿性，溶于水，不溶于醇、酮、乙醚等有机溶剂。它的水溶液带负电，高浓度时有很高的粘弹性和渗透压。此外HA水溶液是一种非牛顿型流体，有着良好的粘弹性和流变形。基于HA特殊的性能，HA可以广泛的应用于医药、化妆品和保健食品当中。HA主要应用于临床治疗、诊断、化妆品基质以及营养保健品等方面。商品HA一般为其钠盐形式，其他金属盐如锌盐很少应用。透明质酸钠具有多方面的药用价值，在制药产业中可以被用作有效成分和赋形剂。药用透明质酸钠的质量标准要求较高，对微生物、细菌内毒素含量有明确的要求。现有技术中，控制微生物和细菌内毒素的方法有的加入抑菌剂（如甲醛等），但是后期去除效果不佳，仍然有残留，对使用者会造成一定的影响；有的采用树脂吸附，但是由于透明质酸钠高浓度时的粘性，需要采用较稀的溶液才能进行吸附，后续浓缩繁琐、成本高，不适用于大规模生产，而且也容易进一步引入杂质。因此，需要开发一种简便的更安全的提纯HA的方法供大规模生产。
技术实现思路
针对目前透明质酸钠去除微生物、内毒素不彻底、成本高的问题，本专利技术提供一种透明质酸的纯化方法，通过控制温度采用碱处理，降低微生物和内毒素含量，方法简便、成本低，适于工业化生产。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。一种透明质酸钠的纯化方法，包括以下步骤：在低于45℃的温度下，调节透明质酸钠溶液的pH至碱性并保持，搅拌处理至微生物和内毒素含量达标，获得透明质酸钠溶液。所述pH为9.0-12.0。所述调节pH的试剂选自10%-30%NaOH溶液。所述透明质酸钠溶液可以通过产业上常用的分离纯化、浓缩方法获得液体透明质酸钠产品。所述透明质酸钠溶液还可以通过常规的分离纯化、干燥方法获得透明质酸钠粉末。所述透明质酸钠溶液的浓度为0.3-1.0%（w/w）。所述微生物和内毒素含量达标的标准为：微生物含量不大于10cfu/mL，内毒素含量不大于0.005IU/mL。本专利技术具有以下优点：透明质酸中的糖苷键很容易因为酸、碱或加热处理而断裂，导致较高分子量的HA在酸、碱、加热等条件下，可低分子化。本专利技术的纯化方法通过在低温和碱性条件下，保持HA分子量的稳定、不降解，还去除细菌内毒素，杀灭和抑制微生物增长，无有毒有害抑制剂残留，而且处理时间短。采用的透明质酸的浓度较高，能够与现有浓缩工艺配套，不需要额外浓缩，节省成本。该方法能够有效降低微生物和内毒素含量，操作简便、成本低，适于工业化生产。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不受下述实施例的限制。实施例1不同分子量透明质酸钠的纯化（1）分别称取高分子量透明质酸钠（平均分子量215万Da）、中分子量透明质酸钠（平均分子量155万Da）和低分子量透明质酸钠（平均分子量65万Da）分别投入三个反应釜，加水溶解，配制成浓度为0.5%的透明质酸钠溶液，水循环降温、控制料液温度35±1℃；取样检测微生物、细菌内毒素含量；（2）搅拌条件下流加浓度20%的氢氧化钠溶液调节并保持透明质酸钠溶液为pH10.7-10.8；持续搅拌7h；每小时检测一次料液中HA分子量和微生物、细菌内毒素含量，结果如表1所示；在搅拌过程中，HA的平均分子量几乎没有变化，说明在该条件下并没有发生分解；随着反应的进行微生物在2h后的含量不再发生明显变化，达到小于10cfu/mL；而内毒素的含量在0-3h内持续降低，当反应3h后含量不再明显变化，达到小于0.005IU/mL；（4）搅拌结束后，使用活性炭脱色除杂，经过数次过滤后，酒精沉淀、洗涤、脱水，干燥，各步骤均在密闭空间内操作，使用呼吸器保持罐体内外压力平衡，物料转移采用固定管道，以减少后续操作对产品的污染，产品收集、取样、包装在A、B级层流罩下进行，获得透明质酸钠固体产品。表1不同分子量的透明质酸钠随反应时间平均分子量、微生物数量、内毒素含量的变化。实施例2不同分子量透明质酸钠的纯化（1）分别称取高分子量透明质酸钠（平均分子量223万Da）、中分子量透明质酸钠（平均分子量148万Da）和低分子量透明质酸钠（平均分子量65万Da）分别投入三个反应釜，加水溶解，配制成浓度为0.5%的透明质酸钠溶液，水循环降温、控制料液温度20±1℃；取样检测微生物、细菌内毒素含量；（2）搅拌条件下流加浓度20%的氢氧化钠溶液调节并保持透明质酸钠溶液为pH10.7-10.8左右；继续搅拌7h；每小时检测一次料液中HA分子量和微生物、细菌内毒素含量，结果如表2所示；在搅拌过程中，HA的平均分子量几乎没有变化，说明在该条件下并没有发生分解；随着反应的进行微生物在2h后的含量不再发生明显变化，达到小于10cfu/g；而内毒素的含量在0-3h内持续降低，当反应3h后含量不再明显变化，达到小于0.005IU/mL；（4）搅拌结束后，经过数次过滤后，使用酒精沉淀、洗涤、脱水，干燥，得到最终产品。表2不同分子量的透明质酸钠随反应时间平均分子量、微生物数量、内毒素含量的变化。对比例1高温下高分子量透明质酸钠的纯化（1）称取高分子量透明质酸钠（平均分子量255万Da）投入反应釜，加水溶解，配制成浓度为0.5%的透明质酸钠溶液，水循环降温、控制料液温度45℃、50℃、60℃；取检测微生物、细菌内毒素含量；（2）搅拌条件下流加浓度20%的氢氧化钠溶液调节并保持透明质酸钠溶液为pH10.7左右；继续搅拌7h；每小时检测一次料液中HA分子量，结果如表3所示；当温度超过45℃后，分子量下降明显；且随着温度升高，分子量下降幅度更大。这说明，高温下透明质酸钠在碱性环境中降解明显，采用碱性条件去除微生物和内毒素的温度不宜超过45℃。表3高温下透明质酸钠随反应时间平均分子量、微生物数量、内毒素含量的变化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种透明质酸钠的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：在低于45℃的温度下，调节透明质酸钠溶液的pH至碱性并保持，搅拌处理至微生物和内毒素含量达标，获得透明质酸钠溶液。/n

【技术特征摘要】
1.一种透明质酸钠的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：在低于45℃的温度下，调节透明质酸钠溶液的pH至碱性并保持，搅拌处理至微生物和内毒素含量达标，获得透明质酸钠溶液。


2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述pH为9.0-12.0。


3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘守垒，赵鹏，王海泉，李昊，张朋，孙运兴，王新志，秦会利，郑成红，卢滢滢，郭玲，冯展谱，解增朋，何斌，惠吉阳，苗为超，万华伟，
申请(专利权)人：山东众山生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37