SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用，属于肿瘤生育保护技术领域。具体的是采用基因治疗手段对受试哺乳动物体的卵巢原位注射一定剂量的AdV‑SIRT1，并检测SIRT1的过表达水平。通过对损伤部位进行修复以实现对卵巢功能重建的目的。因此，AdV‑SIRT1重组载体及其药物制剂可以在不影响抗癌效果情况下保护卵巢功能，其作为新型药物在修复卵巢损伤和/或对抗延缓卵巢衰老和/或改善卵巢储备功能和/或重建卵巢功能等方面发挥重要作用。

【技术实现步骤摘要】
SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用
本专利技术涉及SIRT1在卵巢功能保护药物方面的应用，属于肿瘤生育保护
，具体地涉及一种SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用。
技术介绍
卵巢功能和生育能力是影响女性生存质量的重要因素。现有影响女性卵巢功能的因素有：年龄、遗传、免疫、医源性、感染性、环境、行为学、社会心理等多种因素。其中化疗导致的医源性卵巢损伤在临床常见且急需得到改善。化疗可导致卵巢功能受损，其引起的生殖内分泌紊乱可表现为闭经、不孕、围绝经期症状及心理障碍等，且化疗对卵泡损耗和卵巢功能的损伤是不可逆的，研究发现化疗或者全身放疗所致的女性卵巢早衰和不可逆转的不孕发生率高达80～100％，严重影响患者的身心健康。因此，探寻化疗同时保护卵巢功能、减少卵巢损伤以及后期补救治疗的措施显得尤为重要。针对化疗引起的卵泡损伤、卵泡池耗竭加速、卵巢储备下降等问题，各地学者已开展多项研究。目前主要的生育功能保护措施如下。1、胚胎冷冻保存，其优点是技术较完善成熟、成功率较高；缺点是卵母细胞刺激和成熟需要4～6周，会导致化疗延迟，故可能不适合需要紧急化疗的患者，且需要男性伴侣或精子捐赠者，卵巢激素刺激不适合雌激素受体阳性的女性乳腺癌患者。2、成熟卵母细胞冷冻保存，其优点是不需要精子供体；缺点是目前成功率低于胚胎使用，同样会延迟化疗可能不适合浸润性癌，激素刺激可能不适合乳腺癌。3、卵巢组织冷冻保存和再植入，成功率尚不明确，优点是化疗时间无需延迟，可用于卵母细胞刺激延迟不恰当的患者；缺点是目前尚处试验阶段，可能导致继发恶性肿瘤。SIRT1是Frye等于1999年在人体内首次发现，其定位于人染色体10q21.3，基因长约为33.72kb，结构具备很高的保守性。SIRT1的cDNA开放阅读框长约2，4kb，包含9个外显子和8个内含子，可以编码747个氨基酸约81.7kDa相对分子量的蛋白质。SIRT1的基本组成结构：主要由Rossmann折叠构成的一个保守性较高的大结构域：由一个锌带和一个螺旋结构组成的保守性较低的小结构域。底物结合在大小结构域之间形成的一个空隙中发生催化反应。SIRT1的特殊结构决定了它的生物学功能，包括参与基因转录、DNA复制、DNA损伤修复和代谢调控等一系列的细胞活动。文献“SIRT1在卵巢衰老方面的研究进展”中记载了合成的特异性烟酰胺腺甘酸二核苷酸-依赖性去乙酰化酶-1(SIRT1)激活剂SRT1720可通过激活SIRT1抑制MTOR信号通路，从而抑制始基卵泡募集、卵泡成熟和闭锁，改善高脂饮食诱导肥胖小鼠的卵泡储备，从而延长小鼠卵巢寿命。这是申请人团队写的SIRT1在卵巢功能保护方面的综述，为探究干预该基因进而保护卵巢储备和功能提供理论支持。文献“感染过表达Sirtuin1腺病毒对卵巢颗粒细胞的影响”中记载了外培养人卵巢原代颗粒细胞及KGN细胞系，感染过表达长寿蛋白-1(Sirtuin1)的腺病毒(Sirtuinl过表达重组腺病毒Sirtuinl-Adv购自生工生物工程有限公司)后，使用real-timePCR比较Foxo1、AMPK、AKT1、Pi3k、Caspase9相对表达水平，及自噬相关基因Atg5、mfn2、LC3B的相对表达水平。发现人卵巢颗粒细胞及传代KGN细胞系感染腺病毒过表达Sirtuin1后，Sirtuin1表达水平升高，Foxo1、AMPK、AKT1、Pi3k、Caspase9mRNA表达水平均同向降低。虽然上述2篇文献涉及构建AdV-SIRT1重组载体及探究了其对小鼠卵巢及人卵巢的影响，但均是体外实验，未进行体内研究。且未对化疗药物诱导的小鼠卵巢损伤模型进行卵巢原位注射以探究其对卵巢的保护作用。文献“SIRT1与化疗性卵巢功能早衰的相关性及研究进展”中描述了卵巢功能老化或衰竭涉及内在细胞自身衰老和外在环境应激诱发的衰老。化疗性卵巢损伤与年龄有关，随着年龄增加，卵巢功能损伤发生率逐渐增加。随着慢性炎症和衰老时氧化应激的发生，SIRT1水平和活性降低，SIRT1通过NAD+依赖的NDA修复酶PARP-1调节，氧化应激通过清除NAD+可能引起炎症、应激反应和细胞损伤。在卵巢，氧化应激损伤的增加导致卵母细胞破坏和卵巢功能下降。卵泡是卵巢的基本单元，颗粒细胞是维持卵巢功能的必要条件，研究发现Sirtuin在维持卵巢功能中起重要作用。DiEmidioG等研究发现，SIRT1可能通过调节氧化还原状态参与卵母细胞的成熟，同时MaR等发现老化的猪卵母细胞内SIRT1表达量明显减少，SIRT1可以抵抗猪卵母细胞衰老引起的氧化应激。王娜等发现饮食能量限制可抑制mTOR，激活SIRT1信号，从而抑制原始卵泡的激活，以及卵泡的发育与消耗，增加卵巢卵泡的储备量，以此延长卵巢寿命。故推测SIRT1信号通路可以调节卵泡生长发育。SIRT1转基因小鼠其性成熟延迟，而SIRT1基因缺陷小鼠不能生育，另有研究发现，SIRT1基因缺陷老鼠卵泡发育正常，仍不能有发情周期和排卵，可能与SIRT1缺陷导致激素内分泌缺陷所致，说明SIRT1能调控哺乳动物生殖系统的生殖和内分泌功能，进一步提示了SIRT1可能在延缓卵巢衰老中起关键作用，故我们推测SIRT1亦可在改善化疗性卵巢功能损伤中起重要作用。然而上述文献只是推测SIRT1可能在改善化疗性卵巢功能损伤中起重要作用，并未做实质性探索，SIRT1在卵巢保护中的作用仍然未知。基因治疗是一种针对基因缺陷或基因表达异常疾病的新型治疗，且通过将外源性基因导入细胞，纠正或补偿基因缺陷或基因表达异常引起疾病的新型治疗手段。现如今基因治疗不仅在癌症领域中有了长足的发展，也在罕见病方向尤其是单基因病与罕见性遗传病开展了较为广泛的临床研究，但在非单基因缺失非肿瘤性疾病领域的研究中尚且局限，且无针对化疗所致卵巢损伤的报道。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术公开了一种SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用。具体是将腺病毒载体通过卵巢原位注射实现卵巢中基因上调，通过对损伤部位进行修复以实现对卵巢功能重建的目的。因此，AdV-SIRT1重组载体及其药物制剂可以在不影响抗癌效果情况下保护卵巢功能，其作为新型药物在修复卵巢损伤和/或对抗延缓卵巢衰老和/或改善卵巢储备功能和/或重建卵巢功能等方面发挥重要作用。为实现上述目的，本专利技术公开了SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用，所述卵巢功能保护包括修复卵巢损伤和/或对抗延缓卵巢衰老和/或改善卵巢储备功能和/或重建卵巢功能。进一步地，所述卵巢功能保护为修复卵巢损伤。进一步地，所述卵巢损伤包括年龄增长带来的卵巢损伤、因遗传或免疫功能缺陷或环境造成的卵巢损伤、医源性卵巢损伤或病理性卵巢损伤中的任意一种。进一步地，所述药物是表达SIRT1蛋白质的重组核酸构建体，所述重组核酸构建体的表达载体是任何适用于基因治疗的表达载体，所述表达载体包括病毒载体或非病毒载体。进一步地，所述病毒载体为腺病毒载体。进一步地，所述药物的剂型为注射型。进一步地，具本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用，其特征在于，所述卵巢功能保护包括修复卵巢损伤和/或对抗延缓卵巢衰老和/或改善卵巢储备功能和/或重建卵巢功能。/n

【技术特征摘要】
1.SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用，其特征在于，所述卵巢功能保护包括修复卵巢损伤和/或对抗延缓卵巢衰老和/或改善卵巢储备功能和/或重建卵巢功能。


2.根据权利要求1所述SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用，其特征在于，所述卵巢功能保护为修复卵巢损伤。


3.根据权利要求2所述SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用，其特征在于，所述卵巢损伤包括年龄增长带来的卵巢损伤、因遗传或免疫功能缺陷或环境造成的卵巢损伤、医源性卵巢损伤或病理性卵巢损伤中的任意一种。


4.根据权利要求1～3中任意一项所述SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用，其特征在于，所述药物是表达SIRT1蛋白质的重组核酸构建体，所述重组核酸构建体的表达载体是任何适用于基因治疗的表达载体，所述表达载体包括病毒载体或非病毒载体。


5.根据权利要求4所述SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用，其特征在于，所述病毒载体为腺病毒载体。


6.根据权利要求1～3中任意一项所述SIRT1在制备卵巢功能保护药物方面中的应用，其特征在于，所述药物的剂型为注射型。


7.根据权利要求1～3中任意一项所述SIRT1在制备卵巢功能...

【专利技术属性】
技术研发人员：王世宣，张金金，马菱蔚，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属同济医院，
类型：发明
国别省市：湖北;42