一种新的食管癌唾液miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术通过联合检测食管癌患者唾液中miRNA

【技术实现步骤摘要】
一种新的食管癌唾液miRNA标志物及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程及肿瘤学领域，涉及一种新的食管癌唾液miRNA标志物组合及其应用。

技术介绍

[0002]早期食管癌因病变处于疾病的早期阶段，常常无明显症状，或症状很不典型，许多症状也缺乏特异性，因此，食管癌在早期癌阶段的发现中最有作用的是内镜技术，国外大部分发达国家将此作为普查的常规项目，这是我国目前医疗政策所不能比拟的。然而，在通常的内镜观察中也常常难以发现停留在粘膜面上的浅表癌。随着智能分光比色技术、窄带成像放大内镜、共聚焦激光显微内镜等较为先进内镜技术应用于临床，内镜成像包含越来越多的复杂信息。近年来国外发达国家利用深度学习等人工智能图像识别相关技术，结合内镜对食管癌和胃癌等黏膜浅表癌症的诊断取得多项突破，但是很多仍处于早期系统的开发或可行性研究阶段。
[0003]miRNAs系列家族作为生物基因标志物，其对人体内的很多细胞、组织、蛋白的表达具有特异性，并起着巨大的作用。从基因分子学来说，miRNAs(microRNAs)是人体内的小分子非编码基因，其对一些特异蛋白编码基因的翻译和表达起着重要的调节作用。其在肿瘤诊断中的作用近年国际上进行了一定的研究，取得了显著的成效。
[0004]大量研究证实，miRNAs可能参与了细胞间信号传递，并且在细胞信号转导方面发挥着重要的作用。加强对早期食道肿瘤的检测，可以使患者的生存率提高，这就使很多肿瘤在进展到晚期阶段前，可以进行有效的治疗。然而目前可用于诊断食管癌的稳定标志物较少，并且特异性和灵敏度均欠佳，因此筛选出更为有效的检测食管癌异常表达的miRNAs作为生物标志物，并开发出相应的诊断试剂盒，将会有力的推动我国食管癌的诊断。目前开发的用于食管癌的以miRNAs作为生物标志物的诊断试剂盒大多以被检测者血液作为样本，取样要求高，而唾液样本具有无创采集、样本稳定、方便运输、更为高效等优点，但尚未有能通过检测唾液样本中miRNAs即可诊断食管癌的试剂盒被报道。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的问题和不足，本专利技术提供一组与食管癌高度相关的高特异性和敏感性的miRNAs以及利用其制备的用于唾液样本的食管癌诊断试剂盒。
[0006]本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]本专利技术提供了一种用于食管癌辅助诊断的唾液miRNA标志物，所述唾液miRNA标志物为miRNA
‑
144和miRNA
‑
21的组合。
[0008]本专利技术还提供了一种上述唾液miRNA标志物在制备食管癌辅助诊断试剂盒或试剂中的应用。
[0009]根据上述的应用，优选地，所述试剂盒包含检测miRNA
‑
144和miRNA
‑
21的检测试剂。
[0010]本专利技术还提供了一种miRNA
‑
144和miRNA
‑
21的检测试剂在制备食管癌辅助诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0011]根据上述的应用，优选地，所述检测试剂包括RNA反转录引物和/或DNA扩增引物。
[0012]根据上述的应用，优选地，用于检测miRNA
‑
144的DNA扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，用于检测miRNA
‑
21的DNA扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
[0013]本专利技术还提供了一种用于食管癌辅助诊断的试剂盒，所述试剂盒用于检测唾液中的miRNA
‑
144和miRNA
‑
21。
[0014]根据上述的试剂盒，优选地，所述试剂盒包含检测miRNA
‑
144和miRNA
‑
21的检测试剂。
[0015]根据上述的试剂盒，优选地，所述检测试剂包括qRT
‑
PCR实验中使用的DNA扩增引物；其中，用于检测miRNA
‑
144的DNA扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，用于检测miRNA
‑
21的DNA扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
[0016]根据上述的试剂盒，优选地，所述试剂盒还包含检测内参基因的检测试剂。
[0017]根据上述的试剂盒，优选地，所述试剂盒还包含反转录反应试剂和PCR扩增试剂，如反转录酶、缓冲液、dNTPs，MgCl2，DEPC水和Taq酶等；还可以含有标准品和/或对照品。
[0018]与现有技术相比，本专利技术取得的积极有益效果为：
[0019]1、首创采用无创类标志物提取法检测唾液中与食管癌相关的miRNA
‑
144、miRNA
‑
21表达水平，相比临床其他检测手段如食管拉网脱落细胞检查技术及消化道内镜检查技术等，获材更加方便，不用损伤机体组织器官和增加患者痛苦，只需要提供要检测患者的唾液，就可以诊断食管癌，这可以提高患者舒适度，被普查对象接受，可以大面积推广应用，对早期食管癌的前期诊断有其重要的临床意义。
[0020]2、首次将miRNA
‑
144联合miRNA
‑
21应用于食管癌的早期检测，不仅能更加有效地提高食管癌的早期筛查的准确率，还具备灵敏度高、特异性强、操作简便、无需专业人员等优势，较传统检测方法更方便，更快速，节省样本，降低检测费用，有效提高患者就医诊断时效性。
[0021]3、miRNAs与肿瘤的发病过程有着密切的关系。唾液中miRNA检测已经较多应用于口腔癌的检测，近年来发现对于消化道肿瘤也有显著意义，而对于食管癌患者唾液中miRNA的检测仍处于起步阶段，同期研究较少。
[0022]4、本专利技术可实现产业化，产品具有快速、定量、稳定的特点，将为中小医院和社区医院、乡村诊所以及中大型医院的床旁检测等提供小型、便捷有效的恶性肿瘤筛查及病情监控的定量诊断产品。
附图说明
[0023]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0024]图1为食管癌患者唾液中miRNA
‑
144的ROC曲线；
[0025]图2为食管癌患者唾液中miRNA
‑
21的ROC曲线。
具体实施方式
[0026]以下结合附图对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0027]下列实施例中未注明具体条件的实验方法，均采用本
常规技术，或按照生产厂商所建议的条件；所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0028]实施例
[0029]1.引物设计：
[0030]根本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.唾液miRNA标志物在制备食管癌辅助诊断试剂盒或试剂中的应用，其特征在于，所述唾液miRNA标志物为miRNA
‑
144和miRNA
‑
21的组合。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包含检测miRNA
‑
144和miRNA
‑
21的检测试剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测试剂包括用于检测miRNA
‑
144的DNA扩增引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，以及用于检测miRNA
‑
21的DNA扩增引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴伟东，古佳升，刘清峰，桃卓嫣，
申请(专利权)人：广州小蛮腰医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：