多价蛋白质复合物制造技术

本公开涉及制备和使用多蛋白复合物的方法。该复合物可以为溶液中或表面上的多个靶标建立多价结合机制。该复合物具有多种应用，并可用于例如T细胞的活化和/或扩增。可用于例如T细胞的活化和/或扩增。可用于例如T细胞的活化和/或扩增。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多价蛋白质复合物


[0001]本
技术实现思路
涉及制备和使用多价蛋白复合物的方法。
[0002]背景
[0003]创建具有一个或多个靶标多个结合位点的分子通常很困难。一种方法是将许多配体用化学方法缀合到聚合物上。例如，多糖，聚(乙二醇)(PEG)，N
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羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)或合成的树枝状聚合物通常用于结合蛋白的化学缀合。然而，制备这样的共轭分子通常具有高成本和低产率，并且难以大规模制造。另一种方法是将结合配体与反应性交联剂共价交联，例如，将蛋白质与戊二醛交联。这种交联通常会产生随机定向和成簇的蛋白质复合物，这些复合物通常会损害其功能。
[0004]由于多价蛋白质复合物具有多种应用，因此需要开发一种更有效的方法来产生多价蛋白质复合物。
[0005]概要
[0006]本公开内容涉及制备和使用多价蛋白复合物的方法。
[0007]本公开内容提供了包含多蛋白复合物的组合物，所述多蛋白复合物包含具有两个或更多个Fc结合结构域的多肽，以及两个或更多个各自包含Fc区的含有Fc的蛋白，其中每个含有Fc的蛋白结合至多肽中的Fc结合结构域。
[0008]在一些实施方案中，含Fc的蛋白是抗体，重链抗体，双特异性抗体或Fc融合蛋白。
[0009]在一些实施方案中，多蛋白复合物可以结合溶液或固体表面上的两个或更多个靶分子。
[0010]在一些实施方案中，Fc结合结构域是以下的lgG结合结构域：
[0011]葡萄球菌蛋白A或其任何功能变体，lgG的结合结构域
[0012]链球菌蛋白G或其任何功能变体，或天然或工程改造的Fc结合蛋白的Fc结合结构域。
[0013]在一些实施方案中，多肽中的两个或更多个Fc结合结构域通过接头序列连接。
[0014]在一些实施方案中，Fc结合结构域具有至少为
[0015]与SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8或9具有90％的相同性。
[0016]在一些实施方案中，含Fc的蛋白是与一个或多个选自CD2，CD3，CD7，CD11a，CD19，CD26，CD27，CD28，CD30，CD30L，CD40，CD43，CD44，CD45RA，CD46，CD49d，CD62L，CD69，CD81，CD95，CD196，CD127，
[0017]CD137，CD226，BTLA，0X40，ICOS，GITR，PD1，PDL1，CTLA4，HLA
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DR和KLRG
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1。
[0018]在一些实施方案中，可以通过共价键或非共价相互作用将两种或更多种多蛋白复合物进一步组装成超复合物。
[0019]在一些实施方案中，多蛋白复合物中的两个或更多个含Fc的蛋白是相同的。
[0020]在一些实施方案中，含Fc的蛋白是抗CD3抗体。在一些实施方案中，含Fc的蛋白是抗CD28抗体。在一些实施方案中，含Fc的蛋白是与T细胞表面抗原(例如，CD2，CD27，CD28，CD46或CD137)特异性结合的抗体。
[0021]在一些实施方案中，组合物包含多种包含两个或更多个不同的含Fc蛋白的多蛋白复合物。
[0022]在一些实施方案中，组合物包含多种多蛋白复合物，每种多蛋白复合物包含一种或多种抗CD3抗体和一种或多种抗CD28抗体。
[0023]在本公开中还提供了用于调节细胞功能的方法。该方法包括使细胞与本文所述的组合物接触。
[0024]此外，本公开描述了激活或扩增T细胞的方法。所述方法包括使T细胞与多蛋白复合物接触，所述多蛋白复合物包含具有两个或更多个Fc结合结构域的多肽，以及两个或更多个各自包含Fc区的含有Fc的蛋白，其中每个含有Fc的蛋白与Fc结合。多肽中的
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结合结构域。
[0025]在一些实施方案中，多蛋白复合物包含抗CD3抗体和抗CD28抗体。
[0026]在一些实施方案中，复合物进一步包含抗CD2抗体，抗CD27抗体，抗CD28抗体，抗CD46抗体或抗CD137抗体或其组合。
[0027]另外，本文描述了激活或扩增T细胞的方法。该方法包括使T细胞与包含以下成分的第一多蛋白复合物接触：
[0028]包含两个或更多个Fc结合结构域和两个或更多个抗CD3抗体的第一多肽，其中所述抗CD3抗体与所述第一多肽中的Fc结合结构域结合，并且第二多蛋白复合物包含第二多肽，其包含两个或更多个Fc结合结构域和两个或更多个抗CD28抗体，其中所述抗CD28抗体结合第二多肽中的Fc结合结构域。
[0029]在一些实施方案中，该方法进一步包括使T细胞与第三多蛋白复合物接触，该复合物包含第三多肽，该第三多肽包含两个或更多个Fc结合结构域，以及两个或更多个分别包含Fc区的Fc，其中每个含Fc的蛋白与第三多肽中的Fc结合域结合，其中所述含Fc的蛋白是抗CD2抗体，抗CD27抗体，抗CD28抗体，抗CD46抗体或抗CD 137抗体。
[0030]在一些实施方案中，细胞是CD8+细胞或细胞是CD8+细胞。
[0031]本公开还提供了一种试剂盒，其包含本文所述的组合物。在一些实施方案中，试剂盒包含第一容器，该第一容器包含
[0032]组合物，其包含包含两个或更多个Fc结合结构域的多肽，和第二容器，其包含包含第一含Fc的蛋白质的组合物。
[0033]在一些实施方案中，试剂盒进一步包括第三容器，其包含包含第二含Fc的蛋白质的组合物。
[0034]本公开还提供了包含蛋白质的多蛋白复合物，所述蛋白质包含两个或更多个Fc结合结构域和两个或更多个含Fc的蛋白质(例如抗体或Fc融合蛋白)。在一些实施方案中，含Fc的蛋白紧密结合至Fc结合结构域。复合物可以是稳定且可溶于普通缓冲液和细胞培养基，为在溶液中，细胞表面或固体表面上交联分子提供了有用的工具。
[0035]例如，复合体可以同时与多个目标交互。因此，复合物是一种或多种的多价结合剂。
[0036]抗体/Fc融合蛋白可以识别的抗原/靶分子，从而提高了复合物与靶标之间的结合亲和力。
[0037]在一些实施方案中，由于Fc结合蛋白的固有柔性，复合物具有高度的柔性。Fc结合
蛋白中的Fc结合结构域之间的接头区可以为Fc结合结构域提供高度自由度，从而将运动自由度传递给结合的含Fc的蛋白。复合物的柔性对于其适应细胞表面的形状或起伏的能力可能很重要，从而为识别和捕获细胞表面目标提供了更高的效率。
[0038]在一些实施方案中，复合物可溶于缓冲液和/或培养基(例如细胞培养基)。在一些实施方案中，复合物在塑料，玻璃或金属容器的表面上不粘附(例如，不结合)(例如，在细胞培养条件下)。
[0039]在一些实施方案中，复合物可以相互作用和交联多个拷贝的靶标。靶标可以是在表面上(例如细胞表面)或在溶液中。
[0040]在一些实施方案中，当复合物包含分别识别两个细胞上的特异性细胞表面分子本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含多蛋白复合物的组合物，所述组合物包含含有两个或多个Fc结合结构域的多肽，和两个或多个含Fc的蛋白，其中每个含FC的蛋白都包含一个Fc区，其中每个含Fc的蛋白结合到含Fc结合结构域的多肽。2.权利要求1的组合物，其中所述含Fc的蛋白是抗体，重链抗体，双特异性抗体或Fc融合蛋白。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述多蛋白复合物可以结合至溶液或固体表面上的两个或更多个靶分子。4.权利要求1
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3中任一项的组合物，其中所述Fc结合结构域是葡萄球菌蛋白A的IgG结合结构域或其任何功能变体，链球菌蛋白G的IgG结合结构域或其任何功能变体，或天然或工程改造的Fc结合蛋白的Fc结合结构域。5.权利要求1
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4中任一项的组合物，其中所述两种或更多种Fc结合多肽中的结构域通过接头序列连接。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的组合物，其中所述Fc结合结构域具有与SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8至少90％相同的序列。或9。7.权利要求1
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5中任一项的组合物，其中所述含Fc的蛋白是特异性结合一种或多种靶的抗体，所述靶选自CD2，CD3，CD7，CD11a，CD19。CD26，CD27，CD28，CD30，CD30L，CD40，CD43，CD44，CD45RA，CD46，CD49d，CD62L，CD69，CD81，CD95，CD196，CD127，CD137，CD226，BTLA，0X40，ICOS，GITR，PD1，PDL1，CTLA4，HLA
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DR和KLRG
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1。8.权利要求1
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7中任一项的组合物，其中可以通过共价键或非共价相互作用将两种或更多种多蛋白复合物进一步组装成超复合物。9.权利要求1
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8中任一项的组合物，其中所述多蛋白复合物中的两种或更多种含Fc的蛋白是相同的。10.权利要求9的组合物，其中所述含Fc的蛋白是抗CD3抗体。11.权利要求9的组合物，其中所述含Fc的蛋白是抗CD28抗体。12.权利要求9的组合物，其中所述含Fc的蛋白是与T细胞表面抗原(例如，CD2，CD27，CD28，CD46或CD137)特异性结合的抗体。13.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：宗益农，刘阳，
申请(专利权)人：拜奥普罗塞亚科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：