一种羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测方法技术

本发明专利技术一种羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测方法，先用QuEChERS前处理方法得到提取液，再在超高效液相色谱‑四极杆静电场轨道离子阱质谱进行测定11种氯化烟碱类药物及其代谢产物的色谱峰、全扫描质荷比和二级特征断裂片段，同时获得对应标准物的色谱峰、全扫描质荷比、二级特征断裂片段和断裂途径，将呈正态分布的色谱峰与色谱峰对比，再得到每个色谱峰对应物质的分子式，用每个待检测物的色谱峰峰面积与相应物质的色谱峰峰面积比值乘相应物质的标准溶液浓度，得到提取液中每个氯化烟碱类药物或其代谢产物的浓度，最后得到羊肉中每个氯化烟碱类药物或其代谢产物的浓度，完成对羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测方法
本专利技术涉及药物及其代谢产物检测
，具体为一种羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测方法。
技术介绍
随着人们饮食中肉制品的增加，羊肉因具有高蛋白、低脂肪、维生素及微量元素含量丰富的特点，在市场上深受广大消费者的喜爱。肉制品工业链各个环节间联系密切，包含饲料培养、羊的养殖、肉制品加工、终端销售的多个环节，农药残留污染是影响肉制品品质的重要因素。氯化烟碱类药物及其代谢产物均含有硝基亚甲基杂环结构，具有显著的杀虫活性，选择性强等特点，被广泛用于动物饲料的培养种植中，氯化烟碱类药物及其代谢产物最终通过食物链传递及生态富集作用传递到羊肉中。用于动物源性食品中氯化烟碱类药物的检测方法主要有液相色谱(LC)法、液相色谱－串联质谱(LC-MS)法、气相色谱－串联质谱(GC-MS)法等。目前应用液相色谱－串联质谱技术可以实现动物源性食品中氯化烟碱类药物的准确定量，但无法实现其代谢物的高通量定性定量分析。
技术实现思路
针对现有技术中存在的不足，本专利技术提供了一种羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测方法，高选择性、高通量定性定量分析、扫描速度快、检测灵敏度高、简便，为氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测提供了新的方法。本专利技术具体技术方案如下：一种羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测方法，包括如下步骤：步骤1，将羊肉形成的匀浆后用乙腈的乙酸溶液进行涡旋，得到混合体系A，在混合体系A中加入无水硫酸镁、乙酸钠涡旋后振荡提取，得到提取液，将提取液离心后得到混合体系B；步骤2，在混合体系B中加入乙二胺-N-丙基硅胶、十八烷基三氯硅烷和MgSO4，得到混合体系C，将混合体系C涡旋后进行离心，提取上清液得到提取液；步骤3，将提取液用乙酸铵溶液稀释后过滤，过滤后的溶液在超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱中进行测定，得到羊肉中11种氯化烟碱类药物及其代谢产物的色谱峰、全扫描质荷比和二级特征断裂片段，11种氯化烟碱类药物及其代谢产物分别为吡虫啉、吡虫啉尿素、五羟基吡虫啉、烟碱吡虫啉、啶虫脒、啶虫脒-代谢物-IM-1-4、啶虫脒-代谢物-IM-1-2、啶虫脒-代谢物-6-氟烟酸、啶虫脒-代谢物-IM-2-1、呋虫胺和呋虫胺-代谢物-UF；将11种氯化烟碱类药物及其代谢产物的标准溶液用乙酸铵溶液稀释后，得到对应的稀释液，所有的稀释液分别在超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱中进行测定，获得对应物质的色谱峰、全扫描质荷比、二级特征断裂片段和断裂途径，所有物质的色谱峰、全扫描质荷比、二级特征断裂片段形成标准物质数据库；步骤4，将步骤3得到的色谱峰一一进行提取，得到对应的呈正态分布的色谱峰，将每个呈正态分布的色谱峰与标准物质数据库中的色谱峰进行对比，得到每个所述色谱峰对应的物质的类别，再通过步骤3得到的色谱峰的保留时间、全扫描质荷比、二级特征断裂片段与标准物质数据库中色谱峰的保留时间、全扫描质荷比、二级特征断裂片段，以及断裂途径进行比对，得到每个所述色谱峰对应的物质的分子式，完成对步骤3中色谱峰与对应氯化烟碱类药物及其代谢产物的一一对应；步骤5，用每个待检测物质对应的色谱峰的峰面积与相应物质的色谱峰的峰面积比值乘以相应物质的标准溶液浓度，得到提取液中每个氯化烟碱类药物或其代谢产物的浓度，最后用如下公式得到羊肉中每个氯化烟碱类药物或其代谢产物的浓度，完成对羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测；ci＝(c0v)/m，其中ci为羊肉中每个氯化烟碱类药物或其代谢产物的浓度，单位为μg/kg，c0为提取液中每个氯化烟碱类药物或其代谢产物的浓度，单位为μg/L，v为步骤3中所述提取液的体积，单位为L，m为步骤1中所述羊肉的质量，单位为kg。优选的，步骤1中羊肉、无水硫酸镁和乙酸钠的质量比为(5～10):(5～6):(2～3)；步骤2中乙二胺-N-丙基硅胶、十八烷基三氯硅烷、MgSO4和羊肉的质量比为(0.3～0.4):(0.2～0.4):(0.6～0.8):(5～10)。优选的，步骤1中所述的乙腈的乙酸溶液中乙腈与乙酸的体积比为1％，乙腈的乙酸溶液与羊肉的比例为(5～20)mL:(5～10)g。优选的，步骤3中超高效液相色谱选取AccucoreaQ，具体条件如下所示，超高效液相色谱的柱温为50～55℃，喷雾电压为4～5kV，离子源温度为60～65℃，毛细管温度为325～375℃；四极杆静电场轨道离子阱质谱采用两级扫描方式，二级扫描方式为可变的数据非依赖采集，扫描时间为0～20min；分辨率采用95000FWHM，分为两个质量扫描片段：m/z＝150-550设定为第一个扫描，隔离窗口范围设为54Da，相应循环计数设定为9个，m/z＝600-900设为第二个扫描，隔离窗口范围设为104Da，相应循环计数设定为4个。进一步，超高效液相色谱条件中，流动相A为甲酸、甲酸铵和水组成的混合溶液，其中甲酸占混合溶液总体积的0.1％，甲酸铵的浓度为4mM，流动相B为甲酸、甲醇和甲酸铵组成的混合溶液，其中甲酸占混合溶液总体积的0.1％，甲酸铵的浓度为4mM；梯度洗脱程序为0～1min内，流动相A的体积比例为80％；1～10min内，流动相A的体积比例由80％线性减小至0；10～14min内，流动相A的体积比例为0；14～16min内，流动相A的体积比例由0线性增加至80％；16～20min内，流动相A的体积比例为80％，流速为0.3～0.5mL/min。再进一步，超高效液相色谱条件中，鞘气流速为55～60arb，辅助气流速为40～45arb，气帘气流速为5～8arb，加热温度为325～375℃。再进一步，四极杆静电场轨道离子阱质谱中，碰撞能量分别为20.0eV，35.0eV和50.0eV。优选的，步骤3将对应的稀释液在数据依赖扫描模式下进行二级扫描，其他的测定条件与提取液相同。优选的，步骤3在获得11种氯化烟碱类药物及其代谢产物各自对应的二级特征断裂片段时，选择离子碎片间信号强度比大于15％来区分同类药物的二级特征断裂碎片。优选的，步骤4标准物质数据库中所述的二级特征断裂片段为二级特征断裂片段丰度比和二级特征断裂片段质荷比。相对于现有技术，本专利技术具有以下优点：本专利技术一种羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测方法，先利用QuEChERS前处理方法对羊肉匀浆中的固体样品经过乙腈萃取，通过分散基质萃取去除乙腈中存在的大部分干扰物，萃取液就能直接进行质谱分析，之后利用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱对11种氯化烟碱类药物及其代谢产物标准物质化合物的色谱峰、全扫描质荷比和二级特征断裂片段进行采集，并建立11种氯化烟碱类药物及其代谢产物的标准数据库，再利用色谱峰、全扫描质荷比和二级特征断裂片段，和标准物质数据库完成色谱峰与对应氯化烟碱类药物及其代谢产物的一一对应，用每个待检测物质对应的色谱峰的峰面积与相应物质的色谱峰的峰面积比值乘以相应物质的标准溶液浓度，得到提取本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤1，将羊肉形成的匀浆后用乙腈的乙酸溶液进行涡旋，得到混合体系A，在混合体系A中加入无水硫酸镁、乙酸钠涡旋后振荡提取，得到提取液，将提取液离心后得到混合体系B；/n步骤2，在混合体系B中加入乙二胺-N-丙基硅胶、十八烷基三氯硅烷和MgSO

【技术特征摘要】
1.一种羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，将羊肉形成的匀浆后用乙腈的乙酸溶液进行涡旋，得到混合体系A，在混合体系A中加入无水硫酸镁、乙酸钠涡旋后振荡提取，得到提取液，将提取液离心后得到混合体系B；
步骤2，在混合体系B中加入乙二胺-N-丙基硅胶、十八烷基三氯硅烷和MgSO4，得到混合体系C，将混合体系C涡旋后进行离心，提取上清液得到提取液；
步骤3，将提取液用乙酸铵溶液稀释后过滤，过滤后的溶液在超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱中进行测定，得到羊肉中11种氯化烟碱类药物及其代谢产物的色谱峰、全扫描质荷比和二级特征断裂片段，11种氯化烟碱类药物及其代谢产物分别为吡虫啉、吡虫啉尿素、五羟基吡虫啉、烟碱吡虫啉、啶虫脒、啶虫脒-代谢物-IM-1-4、啶虫脒-代谢物-IM-1-2、啶虫脒-代谢物-6-氟烟酸、啶虫脒-代谢物-IM-2-1、呋虫胺和呋虫胺-代谢物-UF；
将11种氯化烟碱类药物及其代谢产物的标准溶液用乙酸铵溶液稀释后，得到对应的稀释液，所有的稀释液分别在超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱中进行测定，获得对应物质的色谱峰、全扫描质荷比、二级特征断裂片段和断裂途径，所有物质的色谱峰、全扫描质荷比、二级特征断裂片段形成标准物质数据库；
步骤4，将步骤3得到的色谱峰一一进行提取，得到对应的呈正态分布的色谱峰，将每个呈正态分布的色谱峰与标准物质数据库中的色谱峰进行对比，得到每个所述色谱峰对应的物质的类别，再通过步骤3得到的色谱峰的保留时间、全扫描质荷比、二级特征断裂片段与标准物质数据库中色谱峰的保留时间、全扫描质荷比、二级特征断裂片段，以及断裂途径进行比对，得到每个所述色谱峰对应的物质的分子式，完成对步骤3中色谱峰与对应氯化烟碱类药物及其代谢产物的一一对应；
步骤5，用每个待检测物质对应的色谱峰的峰面积与相应物质的色谱峰的峰面积比值乘以相应物质的标准溶液浓度，得到提取液中每个氯化烟碱类药物或其代谢产物的浓度，最后用如下公式得到羊肉中每个氯化烟碱类药物或其代谢产物的浓度，完成对羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测；
ci＝(c0v)/m，其中ci为羊肉中每个氯化烟碱类药物或其代谢产物的浓度，单位为μg/kg，c0为提取液中每个氯化烟碱类药物或其代谢产物的浓度，单位为μg/L，v为步骤3中所述提取液的体积，单位为L，m为步骤1中所述羊肉的质量，单位为kg。


2.根据权利要求1所述的羊肉中氯化烟碱类药物及其代谢产物的检测方法，其特征在于，步骤1中羊肉、无水硫酸镁和乙酸钠的质量比为(5～10):(5～6):(2～3)；步骤2中乙二胺-N-丙基硅胶、十八烷基三氯硅烷、MgSO4和羊肉的质量比为(0.3～0.4):(0.2～0.4):(0.6～0.8):(5～10)。


3.根据权利要求1所述的羊肉中氯化烟碱类药...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾玮，王新，石青云，石琳，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61