一种人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株及其构建方法和应用。人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株命名为人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤ZYXY‑T1，于2021年1月20日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉大学，中国武汉)，保藏编号为CCTCC NO:C202143。本发明专利技术通过从临床人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤患者外周血提取分离得到单个核细胞，体外培养连续自然传代而得到。该白血病细胞株具有ETP‑ALL的典型表面抗原表达特点，即不表达CD1α，CD5,CD8，高表达干系标志CD34，良好的体外增殖能力及体内成瘤能力，可作为研究ETP‑ALL发生发展机制研究及个体化治疗体外研究的细胞材料，同时可用于体内外研究ETP‑ALL药物筛选、评估，指导临床用药。

【技术实现步骤摘要】
一种人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株及其应用
本专利技术涉及生物学和肿瘤学领域，涉及一种人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株及其构建方法和应用
技术介绍
急性淋巴细胞白血病(ALL)是一种未成熟的淋巴细胞恶性克隆性增生的血液系统恶性肿瘤，好发于儿童，成人的发病率低于儿童，ALL分为B细胞性ALL(B-ALL)，约占发病人数的85％，T细胞性(T-ALL)约占发病人数的15％。T-ALL在ALL中属于高危的类型，虽然经过联合化疗可使患者取得90％～95％的缓解率，但是接近三分之一的患者复发，五年总体生存率50％左右。对于初发难治及复发的患者，目前治疗手段十分有限，患者预后极差。T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤也称早前体T细胞白血病/淋巴瘤(ETP-ALL)是近年刚确定的T-ALL的特殊亚型。具有特有的表面抗原表达特点，即缺乏淋系表面抗原的CD1α，CD8表达，不表达或弱表达CD5表面抗原，表达一种干系或髓系抗原。ETP-ALL占T-ALL发病人数的15％左右，其预后更差。研究表明ETP-ALL患者的完全缓解率及总体生存期远低于非ETP-ALL患者，复发率高于非ETP-ALL患者。目前对ETP-ALL治疗除了常规的联合化疗外并没有更好更有效的治疗手段。细胞株是肿瘤研究的重要工具，不仅保留了肿瘤的生物学特征，而且可以在体外连续传代培养，可以完成许多体内无法进行的实验。细胞株是肿瘤病因学，肿瘤新药研发或肿瘤新的联合方案研究的基础。ETP-ALL的研究也离不开细胞株，但是目前国内外并没有从ETP-ALL患者标本建立起ETP-ALL的细胞株。这对ETP-ALL的基础研究及相关临床研究带来了极大的制约。建立ETP-ALL的细胞株是当前ETP-ALL研究亟待解决的问题。ETP-ALL细胞株的建立对研究ETP-ALL这一特定类型预后极差的T-ALL的发病机理，分子特点，新药筛选，化疗方案更新等具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供国际上第一株人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤永生化细胞株及其构建方法及应用本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株，该细胞株命名为人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株ZYXY-T1，于2021年1月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C202143。本专利技术还提供如上所述的T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株的子代细胞。本专利技术还提供如上所述的T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤具有ETP-ALL的典型表面抗原表达特点，高表达干系标志CD34，悬浮细胞。本专利技术还提供如上所述人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株的用途，选自以下任一项或多项：a.用于ETP-ALL的分子特点及治病机理的研究；b.制备肿瘤细胞模型或制备肿瘤动物模型；其中，通过本细胞株建立起来的子代细胞或在本细胞株建立起来的子代细胞通过转染带荧光标记的基因建立起来的细胞。制备动物肿瘤模型，通过皮下荷瘤或尾静脉注射建模的方法，建立的ETP-ALL动物模型。c.筛选和/或评价/制备肿瘤治疗药物；其中，筛选制备肿瘤治疗药物的方法可以为：通过想所述人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株培养基中添加不同肿瘤治疗药物，观察细胞形态变化，获得初步有效的候选药物。然后，将候选药物施药于上述肿瘤动物模型，观察与未施药组动物的存活期、肿瘤大小、转移情况等，筛选获得潜在的治疗T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤的药物。d.开发肿瘤药物靶点；e.制备肿瘤诊断产品；f.筛选肿瘤生物治疗药物；所述的肿瘤生物治疗药物/试剂为肿瘤疫苗。g.开发检测肿瘤相关生物工程产品。所述的肿瘤相关生物工程产品可以为ETP-ALL特异性的分子诊断PCR试剂盒，荧光原位杂交试剂盒.本专利技术还提供所述人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤的构建方法，包括如下步骤：获得新鲜的初发T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤患者外周血。取6ml外周血滴加入预先加6ml淋巴细胞分离液的15ml无菌离心管中，离心2000转，20分钟。离心结束后取单个核细胞层白色细胞沉淀至新的15ml无菌离心管中，加入5ml无菌1xPBS重悬细胞，离心2000转，5分钟。弃上清液后，加入无菌的红细胞裂解液常温下裂解细胞5分钟后离心，2000转，5分钟。弃上清，加入5mlIMDM完全培养基(IMDM90％+胎牛血清10％)重悬细胞，离心，1500转，5分钟。弃上清，加入5mlIMDM完全培养基，重悬细胞。细胞计数板计数细胞，取1*108细胞加入25cm培养瓶后加IMDM培养基至6ml混匀细胞，放入37摄氏度，恒温恒湿培养箱培养细胞。1周后更换新的IMDM培养基，直至细胞开始增殖。本专利技术的有益效果是：本专利技术的人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株可无限传代，细胞体外形状稳定，并符合临床肿瘤生物学特性。所述的人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株起源于ETP-ALL患者，表面抗原符合典型ETP-ALL国际定义，高表达干系标志CD34。所述人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株均能用于ETP-ALL及ALL的发生发展的机理研究。还可以利用所述细胞分析抗白血病新药及联合方案的疗效，进行白血病的药物筛选和评估，可用于指导临床用药。对于揭示ETP-ALL这一高危预后不良的ALL具有重要的意义。附图说明下面结合实例和附图对本专利技术进行进一步说明；图1为所述人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株显微镜下观察及瑞氏-吉姆萨染色后的结果；图2为所述人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株不同细胞密度下的细胞生长曲线；图3为所述人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株的表面抗原表达结果。图4为所述人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株的体内成瘤能力结果，其中，a为小鼠外周血CD45表达，b为小鼠骨髓CD45表达，c为小鼠生存时间。具体实施方式下面用实施例来进一步说明本专利技术，但本专利技术并不受其限制。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。实例1ZYXY-T1细胞株制备原代细胞培养：取浙江大学医学院附属第一医院获得的诊断ETP-ALL明确的ETP-ALL患者的外周血标本6ml(男性，)立即分离白血病单个核细胞。在生物安全柜中，取6ml外周血标本滴加入预先加6ml淋巴细胞分离液的15ml无菌离心管中，离心2000转，20分钟。离心结束后取单个核细胞层至新的15ml无菌离心管中，加入5ml无菌1xPBS重悬细胞，离心2000转，5分钟。弃上清液后，加入无菌的红细胞裂解液常温下裂解细胞5分钟后离心，2000转，5分钟。弃上清，加入5mlIMDM完全培养基(IMDM90％+胎牛血清10％)重悬细胞，离心，1500转，5分钟。弃上清，加入5mlIMDM完全培养基，重悬细胞。细胞计数板技术细胞，取1*108细胞加入25cm培养瓶后加IMDM培养基至6ml混匀细胞，放入37摄氏度，恒温恒湿培养箱培养细胞。1周后更换新的IMDM培养基去除细胞碎片，继续培养。以后每周更换培养基一次。细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株，其特征是，该细胞株命名为人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞ZYXY-T1，于2021年1月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏标号为CCTCC NO：202143。/n

【技术特征摘要】
1.一种人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株，其特征是，该细胞株命名为人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞ZYXY-T1，于2021年1月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏标号为CCTCCNO：202143。


2.根据权利要求1所述的人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞株，其特征是，细胞株为悬浮细胞，符合典型的ETP-ALL表面抗原表达特点：CD1α，CD8，CD5不表达，干系标志CD34表达。


3.如权利要求1所述的人T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤细胞ZYXY-T1的子代细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：金洁，李枫林，王华锋，主鸿鹄，黄昕，张仪，胡超，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33