新型控制开关制造技术

本发明专利技术涉及适合用于治疗人受试者的嵌合抗原受体(CAR)，其包含：(i)包含跨膜结构域和信号传导结构域的信号传导链；(ii)包含靶标结合结构域和跨膜结构域的非信号传导链；其中，所述链之一进一步包含HIV整合酶催化核心结构域(CCD)或其功能片段或变体，且另一链进一步包含LEDGF/p75整合酶结合结构域(IBD)或其功能片段或变体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型控制开关专利
本专利技术涉及提供对CAR信号传导活性的控制的嵌合抗原受体(CAR)。专利技术背景嵌合抗原受体(CAR)是人工T-细胞受体，其处于现代个性化疗法的最前沿(Lee等人(2012)Clin.CancerRes.,18(10):2780-90)。它们正开发以治疗对传统可用的疗法有抗性的患者中的癌症，并使用患者自身的免疫细胞来抗击该疾病。对免疫细胞进行离体基因工程改造，以表达对于肿瘤抗原特异性的CAR，且随后将细胞转移回患者。CAR位于T细胞的表面上，并且由通过跨膜结构域分开的胞外结构域和胞内结构域组成。胞外结构域具有靶标结合区域(例如单链可变片段)，其针对仅在患病细胞上表达的抗原。抗原结合至细胞的表面上的靶标结合区之后，胞内结构域(通常包含CD3ζ-CD28或CD3ζ-41BB)面对胞质溶胶并向T细胞传递活化信号。第一代CAR包含与衍生自CD3ζ或Fc受体γ链的细胞质区域的信号传导结构域附接的靶标结合结构域。显示第一代CAR成功地将T细胞重新引导至选择的靶标，然而，它们无法在体内提供T-细胞的延长扩增和抗肿瘤活性。因此，第二代和第三代CAR已聚焦于通过包括共刺激分子(诸如CD28、OX-40(CD134)和4-1BB(CD137))而增强修饰的T细胞存活和增加增殖。然而，通过与至关重要的器官(诸如肺)的潜在交叉反应，已经出现这种有前途的疗法的安全性担忧。在临床试验中，在用CAR-T细胞治疗的患者中已观察到中靶以及脱靶的肿瘤外毒性两者，并且已经报道了涉及CAR研究的两例死亡(Morgan等人(2010)Mol.Ther.,18(4):843-51)。这些毒性难以在动物模型模型中预测，并且与小分子和生物制剂相反，CAR-T细胞是具有独特药代动力学(PK)概况的活药物。因此，正开发安全开关以关闭或降低CAR-T细胞杀伤活性，并实现更受控和更安全的疗法。一种类型的安全开关是自杀开关，其中CAR-T细胞被进一步工程改造以表达“自杀基因”或“消除基因”，其允许在施用外部药物后选择性破坏CAR-T细胞。例如，并入单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)意味着通过将GCV-三磷酸酯并入复制中的DNA中，前药更昔洛韦的施用导致细胞死亡。另一种方法是使用诱导型胱天蛋白酶9(iCasp9)，一种嵌合蛋白，其结合小分子AP1903，导致胱天蛋白酶9二聚化并最终导致CAR-T细胞的凋亡。然而，自杀开关的主要缺点是它是不可逆的，并且疗法被破坏。其他缺点是外用药剂的施用可能作用不够快(开关元件经常是免疫原性的(例如HSV-TK))，或者开关可能无法达到100%效力(或者因为自杀剂不够均一或稳健)。调节CAR活性的另一种策略是通过控制体内CAR的胞内和胞外结构域的组装(ON-型)或分解(OFF-型)。这通过如下实现：将所述CAR的信号传导结构域和靶标结合结构域分离为信号传导链和非信号传导链，然后通过添加或除去可以充当两个不同链的二聚化的诱导剂或抑制剂的小分子来调节信号传导活性。这种类型的开关策略的优点是该开关是可逆的，并且可以通过改变所述小分子的浓度来调节信号传导。然而，已经使用的小分子的药理学特性并不总是最佳的，不能保证通过小分子的剂量可直接控制受体关闭动力学。能够直接控制受体关闭动力学将意味着可以将CAR活性微调至可以有效治疗疾病/病况的水平，同时将任何副作用降低至最小。可逆的ON-型组装开关的一个实例是雷帕霉素-FKPB12-mTOR复合物，其中雷帕霉素诱导所述CAR的信号传导链和非信号传导链的二聚化(Wu等人(2015)Science,350(6258):aab4077)。在雷帕霉素CAR中，主要通过改变化合物的浓度来控制活化。相反，通过雷帕霉素撤回使雷帕霉素CAR失活不仅取决于化合物浓度，而且还受复合物解离的速率和化合物清除率(其为难以通过化合物剂量控制的参数)的影响。该策略的另一个缺点是雷帕霉素必须在整个治疗期间连续施用。WO2016/030691描述了一种可逆的OFF-型分解开关，其使用Tet阻遏物(TetR)和TetR相互作用蛋白(TiP)之间的相互作用来控制CAR的活化。该机制以与ON-型组装开关相反的方式起作用，因为小分子的添加破坏TetR-TiP结构域的二聚化，因此通过分离组成链来使CAR失活。这意味着仅在CAR需要关闭或其活性下调时才需要使用破坏分子。然而，WO2016/030691使用源自细菌的四环素结合蛋白/肽，其在人受试者中是潜在免疫原性的。因此，在本领域中仍需要开发可逆的OFF-型分解开关以控制人类中的CART-细胞疗法。专利技术概述根据本专利技术的第一个方面，提供了适合用于治疗人受试者的嵌合抗原受体(CAR)，其包含：(i)包含跨膜结构域和信号传导结构域的信号传导链；(ii)包含靶标结合结构域和跨膜结构域的非信号传导链；其中，所述链之一进一步包含HIV整合酶催化核心结构域(CCD)或其功能片段或变体，且另一链进一步包含LEDGF/p75整合酶结合结构域(IBD)或其功能片段或变体。根据本专利技术的另一个方面，提供了编码如本文所定义的CAR的信号传导链的多核苷酸，编码如本文所定义的CAR的非信号传导链的多核苷酸以及编码如本文所定义的CAR的信号传导链和非信号传导链的多核苷酸。根据本专利技术的另一个方面，提供了包含如本文所定义的多核苷酸的表达载体。根据本专利技术的另一个方面，提供了包含如本文所定义的CAR的免疫调节性细胞。根据本专利技术的另一个方面，提供了如本文所定义的免疫调节性细胞，其用于疗法中。根据本专利技术的另一个方面，提供了包含如本文所定义的免疫调节性细胞的药物组合物。根据本专利技术的另一个方面，提供了治疗和/或预防疾病的方法，其包括将如本文所定义的药物组合物施用于人受试者。根据本专利技术的另一个方面，提供了制备表达如本文所定义的CAR的免疫调节性细胞的方法，其包括：(a)将如本文所定义的多核苷酸或表达载体转导或转染至所述免疫调节性细胞中；和(b)在所述免疫调节性细胞中表达所述多核苷酸或所述表达载体。根据本专利技术的另一个方面，提供了通过如本文所定义的方法获得的免疫调节性细胞。根据本专利技术的另一个方面，提供了在人受试者中控制如本文所定义的CAR的活性的方法，其包括向经历用所述CAR治疗的人受试者施用抑制LEDGF/p75-HIV整合酶相互作用的药剂。附图简述图1.并入HIV整合酶和人LEDGF/p75蛋白的片段的OFF-开关嵌合抗原受体(构建体1至5)的示意性组织。为了清楚起见，从示意图省略诸如HIV整合酶结构域或CD8α铰链的组分的二聚化。scFv是抗人BCMA单链可变区片段，CD8α是人CD8α的铰链和跨膜结构域，p75是包含人LEDGF/p75蛋白的IBD的片段，IN是包含HIV整合酶的CCD的片段，41BB是人4-1BB蛋白的细胞内结构域，且CD3ζ是人CD3ζ的信号传导结构域。组分与实施例1中所述的接头集成在一起。图2.通过与BCMA抗原呈递细胞AR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.适合用于治疗人受试者的嵌合抗原受体(CAR)，其包含：/n(i) 包含跨膜结构域和信号传导结构域的信号传导链；/n(ii) 包含靶标结合结构域和跨膜结构域的非信号传导链；/n其中，所述链之一进一步包含HIV整合酶催化核心结构域(CCD)或其功能片段或变体，且另一链进一步包含LEDGF/p75整合酶结合结构域(IBD)或其功能片段或变体。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181016 GB 1816839.31.适合用于治疗人受试者的嵌合抗原受体(CAR)，其包含：
(i)包含跨膜结构域和信号传导结构域的信号传导链；
(ii)包含靶标结合结构域和跨膜结构域的非信号传导链；
其中，所述链之一进一步包含HIV整合酶催化核心结构域(CCD)或其功能片段或变体，且另一链进一步包含LEDGF/p75整合酶结合结构域(IBD)或其功能片段或变体。


2.根据权利要求1所述的CAR，其中所述信号传导链进一步包含共刺激结构域。


3.根据权利要求1或2所述的CAR，其中所述非信号传导链进一步包含共刺激结构域。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的CAR，其中所述非信号传导链以如下顺序包含结构域：靶标结合结构域；跨膜结构域；共刺激结构域；和HIV整合酶CCD或LEDGF/p75IBD(排列A)，且，所述信号传导链以如下顺序包含结构域：跨膜结构域；共刺激结构域；HIV整合酶CCD或LEDGF/p75IBD；和信号传导结构域(排列I)。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的CAR，其中所述非信号传导链包含LEDGF/p75IBD。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的CAR，其中所述LEDGF/p75IBD功能变体在残基428和429处具有降低的疏水性。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的CAR，其中所述LEDGF/p75IBD包含来自所述IBD的C-末端的LEDGF/p75蛋白序列的另外的氨基酸残基。


8.根据权利要求7所述的CAR，其中所述LEDGF/p75IBD包含来自所述IBD的C-末端的LEDGF/p75蛋白序列的另外的1-45个氨基酸残基。


9.权利要求1至8中任一项的CAR，其中所述靶标结合结构域包含抗体、抗原结合片段或配体。


10.权利要求1至9中任一项的CAR，其中所述靶标结合结构域结合肿瘤相关抗原。


11.权利要求10的CAR，其中所述肿瘤相关抗原选自：BCMA、癌胚抗原(CEA)、癌抗原-125、CA19-9、CD5、CD13、CD19、CD20、CD22、CD27、CD30、CD33、CD34、CD45、CD52、CD70、CD117、CD138、CD160、表皮生长因子受体(EGFR)、叶酸结合蛋白、神经节苷脂G2(GD2)、HER2、间皮素、MUC-1、神经细胞粘附分子(NCAM)、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、前列腺酸磷酸酶(PAP)、蛋白黑素-A、突触素、前列腺的六跨膜上皮抗原I(STEAP1)、TARP、Trp-p8、酪氨酸酶或波形蛋白。


12.权利要求1至11中任一项的CAR，其中所述跨膜结构域包含CD8或CD4的跨膜结构域。


13.权利要求1至12中任一项的CAR，其中所述信号传导结构域包含CD3ζ信号传导结构域。


14.权利要求1至1...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·L·布雷肖，N·克里斯特，C·马丁内斯弗莱特斯，
申请(专利权)人：葛兰素史克知识产权开发有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB