一种基于g-C制造技术

本发明专利技术涉及一种基于g‑C

【技术实现步骤摘要】
一种基于g-C3N4-Au和ZnO@PDA-CuO的电化学发光传感器的制备及应用
本专利技术涉及一种基于g-C3N4-AuNFs和ZnO@PDA-CuO之间的共振能量转移检测降钙素原的电化学发光传感器的制备及应用。本专利技术是采用花状Au纳米颗粒修饰的g-C3N4复合材料g-C3N4-AuNFs作为基底发光材料，聚多巴胺包裹的ZnO负载小尺寸CuO为猝灭剂，通过层层组装构建的电化学发光传感器，可以实现降钙素原的特异性检测，属于新型传感器构建

技术介绍
败血症是一种由细菌、真菌等感染引起的全身炎症反应，被看作全球性的威胁生命健康的疾病。研究表明，PCT反映了全身炎症反应的活跃程度，已被探索作为诊断败血症可靠的标志物指标。因此，对人体内降钙素原的灵敏检测对于早期预防和诊断败血症具有重要的意义。电化学发光作为电化学和发光两种技术结合的新兴产物，具有背景噪声低、动态范围宽、仪器设备简便和灵敏度高等优点，在生物分析、食品安全分析和环境污染监测等领域受到众多学者的青睐。本专利技术基于纳米功能材料构建了一种新型的电化学发光传感器，用于降钙素原的检测。利用花状Au纳米颗粒修饰的g-C3N4复合材料g-C3N4-AuNFs作为基底材料，聚多巴胺包裹的ZnO负载小尺寸CuO为猝灭剂，实现了对降钙素原的检测。测试结果显示该电化学发光传感器灵敏度高，检出限低，稳定性好。基于上述发现，专利技术人完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是基于花状Au纳米颗粒修饰的g-C3N4复合材料g-C3N4-AuNFs作为基底发光材料，聚多巴胺包裹的ZnO负载小尺寸CuO为猝灭剂，构建了一种新型的电化学发光传感器。本专利技术的目的之二是提供一种新型基于共振能量转移的电化学发光传感器的制备方法，该方法制备的传感器稳定性好、选择性好、灵敏度高和重现性好。本专利技术的目的之三是实现了所述电化学发光传感器的构建并且对降钙素原进行了有效的检测，达到了所述电化学发光传感器在测定降钙素原的用途。本专利技术的技术方案1.一种基于g-C3N4-AuNFs和ZnO@PDA-CuO之间的共振能量转移检测降钙素原的电化学发光传感器的制备及应用（1）用Al2O3抛光粉打磨直径为4mm的玻碳电极，超纯水清洗干净，将6µL、0.25~2.5mgmL-1的g-C3N4-AuNFs-Ab1标记物溶液滴加到电极表面，室温下晾干成膜；（2）滴加3µL、质量分数为0.1%的BSA溶液到电极表面，用超纯水洗净，室温下晾干；（3）滴加6µL、0.00005~50ngmL-1的一系列不同浓度的降钙素原抗原到电极表面，孵化2h，超纯水冲洗，室温下晾干；（4）滴加6µL的聚多巴胺包裹的ZnO负载小尺寸CuO的降钙素原识别抗体的二抗标记物ZnO@PDA-CuO-Ab2溶液，超纯水冲洗，室温下晾干，制得一种电化学发光传感器。2.花状Au纳米颗粒修饰的g-C3N4复合材料g-C3N4-AuNFs并结合降钙素原识别抗体的一抗标记物g-C3N4-AuNFs-Ab1溶液的制备（1）片状g-C3N4的制备将5g三聚氰胺放入带盖的陶瓷坩埚中，在550℃下煅烧4h，得到2g黄色粉末，然后溶解于100mL5moLL-1HNO3中超声2h，在125℃下回流24h，然后，将回流的产物8000rmin-1的转速离心并用超纯水洗涤直至pH接近7，将产物在55℃真空烘箱中干燥12h，将所得固体粉末分散于水中，超声剥离24h，保留上层液，旋蒸浓缩，得到片状g-C3N4；（2）聚吡咯包裹金纳米花修饰的g-C3N4复合材料g-C3N4-AuNFs的制备将0.4236g吡咯溶解于20mL乙醇/水(1:1)溶液中，加入200mL0.01%HAuCl4溶液，在30℃水浴中搅拌2小时，13000rmin-1转速下离心10min，用去离子水洗涤3次后，分散于20mL水溶液中，即得到AuNFs@ppy水溶液，取3gL-1的g-C3N4溶液5mL，超声分散1h，在搅拌均匀的情况下加入5mLAuNFs@ppy水溶液，并搅拌过夜使其充分反应，将反应液以8000rmin-1的转速离心，并用去离子水洗涤3次，将产物在55℃真空烘箱中干燥12h，即得到g-C3N4-AuNFs；（3）g-C3N4-AuNFs结合降钙素原识别抗体的一抗标记物g-C3N4-AuNFs-Ab1溶液的制备将1~5µgmL-1的降钙素原捕获抗体的一抗标记物在4℃下使用EDC、NHS进行活化，然后与g-C3N4-AuNFs共同孵化6h，得到g-C3N4-AuNFs-Ab1标记物溶液。3.聚多巴胺包裹的ZnO负载小尺寸CuO并结合降钙素原识别抗体的二抗标记物ZnO@PDA-CuO-Ab2溶液的制备（1）ZnO@PDA的制备将25mL去离子水加热至60℃，同时配制250mL的浓度12.5mgmL-1的PVP溶液和12mL0.1M的Zn(NO3)2*6H2O溶液，将配制好的溶液加入上述加热过的去离子水中，混合搅拌5min，再加入25mL0.5M的NaOH溶液，一滴一滴加入，在60℃下搅拌1h，将所得沉淀物离心，用乙醇和去离子水各洗涤3次，将得到的白色沉淀物干燥2小时，然后在马弗炉中以5℃min-1的升温速率550℃煅烧2h，得到花状ZnO，然后将60mg花状ZnO和12mg盐酸多巴胺溶解于60mLTris-Hcl溶液中，均匀搅拌12h，将所得的产物用超纯水离心洗涤4次，然后在50℃下真空干燥12h，得聚多巴胺包裹的花状ZnO即ZnO@PDA；（2）小尺寸CuO的制备将150mL0.02M的Cu(CH3COO)2·H2O水溶液与0.5mL冰醋酸混合，置于带有回流装置的圆底烧瓶中，剧烈搅拌下，把溶液加热到沸腾，然后迅速加入10mL0.04gmL-1的NaOH水溶液，立即形成大量黑色沉淀，将沉淀离心，用无水乙醇洗涤三次，真空烘箱中干燥12h，得到小尺寸CuO；（3）聚多巴胺包裹的ZnO负载小尺寸CuO并结合降钙素原识别抗体的二抗标记物ZnO@PDA-CuO-Ab2溶液的制备将50mgZnO@PDA和100mg小尺寸CuO加入到300mL的去离子水中，室温下充分搅拌12h，然后将溶液离心，用去离子水洗涤3次，50℃下真空干燥12h后得到ZnO@PDA-CuO；将100μL降钙素原识别抗体Ab2（10μgmL-1）加入1mLZnO@PDA-CuO水溶液（1.5mgmL-1）中，并在4℃下孵化12h，随后加入100μL1%BSA以阻断非特异性位点并离心以除去未结合的抗体，将得到的固体分散在1mLPBS（pH7.4）中，即得聚多巴胺包裹的ZnO负载小尺寸CuO并结合降钙素原识别抗体的二抗标记物ZnO@PDA-CuO-Ab2溶液。4.降钙素原的检测（1）将Ag/AgCl作为参比电极，铂丝作为对电极，所制备的电化学发光传感器作为工作电极正确连接在化学发光检测仪的暗盒中，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起，光电倍增管的高压设本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于g-C

【技术特征摘要】
1.一种基于g-C3N4-AuNFs和ZnO@PDA-CuO之间的共振能量转移检测降钙素原的电化学发光传感器的制备及应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）用Al2O3抛光粉打磨直径为4mm的玻碳电极，超纯水清洗干净，将6µL、0.25~2.5mgmL-1的g-C3N4-AuNFs-Ab1标记物溶液滴加到电极表面，室温下晾干成膜；
（2）滴加3µL、质量分数为0.1%的BSA溶液到电极表面，用超纯水洗净，室温下晾干；
（3）滴加6µL、0.00005~50ngmL-1的一系列不同浓度的降钙素原抗原到电极表面，孵化2h，超纯水冲洗，室温下晾干；
（4）滴加6µL的聚多巴胺包裹的ZnO负载小尺寸CuO的降钙素原识别抗体的二抗标记物ZnO@PDA-CuO-Ab2溶液，超纯水冲洗，室温下晾干，制得一种电化学发光传感器。


2.如权利要求1所述的一种基于g-C3N4-AuNFs和ZnO@PDA-CuO之间的共振能量转移检测降钙素原的电化学发光传感器的制备及应用，其特征在于，所述的花状Au纳米颗粒修饰的g-C3N4复合材料g-C3N4-AuNFs并结合降钙素原识别抗体的一抗标记物g-C3N4-AuNFs-Ab1溶液的制备步骤如下：
（1）片状g-C3N4的制备
将5g三聚氰胺放入带盖的陶瓷坩埚中，在550℃下煅烧4h，得到2g黄色粉末，然后溶解于100mL5moLL-1HNO3中超声2h，在125℃下回流24h，然后，将回流的产物8000rmin-1的转速离心并用超纯水洗涤直至pH接近7，将产物在55℃真空烘箱中干燥12h，将所得固体粉末分散于水中，超声剥离24h，保留上层液，旋蒸浓缩，得到片状g-C3N4；
（2）聚吡咯包裹金纳米花修饰的g-C3N4复合材料g-C3N4-AuNFs的制备
将0.4236g吡咯溶解于20mL乙醇/水(1:1)溶液中，加入200mL0.01%HAuCl4溶液，在30℃水浴中搅拌2小时，13000rmin-1转速下离心10min，用去离子水洗涤3次后，分散于20mL水溶液中，即得到AuNFs@ppy水溶液，取3gL-1的g-C3N4溶液5mL，超声分散1h，在搅拌均匀的情况下加入5mLAuNFs@ppy水溶液，并搅拌过夜使其充分反应，将反应液以8000rmin-1的转速离心，并用去离子水洗涤3次，将产物在55℃真空烘箱中干燥12h，即得到g-C3N4-AuNFs；
（3）g-C3N4-AuNFs结合降钙素原识别抗体的一抗标记物g-C3N4-AuNFs-Ab1溶液的制备
将1~5µgmL-1的降钙素原捕获抗体的一抗标记物在4℃下使用EDC、NHS进行活化，然后与g-C3N4-AuNFs共同孵化6h，得到g-C3N4-AuNFs-Ab1标记物溶液。


3.如权利要求1所述的一种基于g-C3N4-AuNFs和ZnO@PDA-CuO之间的共振能量转移检测降钙素原的电化学发光免疫传感器的制备及应用，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡丽华，师腾飞，宋翠，崔倩倩，张勇，吴丹，马洪敏，范大伟，魏琴，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东;37