一种用于诊断或防治金黄色葡萄球菌感染的α溶血素抗原表位肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了本发明专利技术提供了一种用于诊断或防治金黄色葡萄球菌感染的抗原表位肽，包含氨基酸序列为SEQ ID NO:1的多肽，本发明专利技术还提供了该抗原表位肽在制备用于诊断、预防或治疗金黄色葡萄球菌感染中的应用。本发明专利技术通过筛选确定了金黄色葡萄球菌溶血素α的抗体优势表位肽，具有较强的免疫原性，同时该优势表位肽的氨基酸序列在多种S.aureus菌株中序列保守，因此，也可用于制备金黄色葡萄球菌感染的诊断试剂，或用于其他S.aureus感染的预防或治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种用于诊断或防治金黄色葡萄球菌感染的α溶血素抗原表位肽及其应用
本专利技术涉及医疗诊断
，具体涉一种用于诊断或防治金黄色葡萄球菌感染的抗原表位肽及其应用。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)作为革兰氏阳性菌的代表，是一类在自然界广泛存在的致病性球菌，也是引起医院感染和社区感染的一种重要致病菌。调查研究表明，在美国，社区皮肤及软组织感染最常见的病原菌为S.aureus(约占75％)；在日本，脓疱病中S.aureus引发的大疱性脓疱病占的92％；在非洲，热带脓性肌炎病原体中S.aureus占55-72％；在中国，感染性心内膜炎的头号致病菌为S.aureus(占31-34％)。此外，S.aureus感染以急性、化脓性为特征，局部可引起皮肤和软组织等的化脓性感染，经久不愈；全身可导致骨髓炎、脓毒性关节炎、心内膜炎、肺炎、脓毒血症等严重感染及并发症，死亡率高达20％。同时，金黄色葡萄球菌的外毒素还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征和中毒性休克综合征等全身致死性感染。对于金黄色葡萄球菌感染的治疗，通常选用红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素VI等抗生素。但是由于多重耐药金黄色葡萄球菌的出现，目前用单一抗生素治疗金黄色葡萄球菌感染已经越来越困难。临床数据显示，具有多重抗生素耐药性的金黄色葡萄球菌在社区金黄色葡萄球菌感染中占到60％，而在医院这一比例占到80％。其中特别突出的是甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌菌株(methicillin-resistantS.aureus,MRSA)，2009年欧洲9个国家MRSA占到临床金黄色葡萄球菌株的25-50％。MRSA导致的感染用抗生素疗法难以治愈并且有很高的致死率。2018年中国MRSA全国平均检出率为35.0％，居革兰阳性耐药菌首位。MRSA侵袭性感染所致菌血症，90天内死亡率超过50％。目前临床主要的抗生素治疗已无力控制MRSA感染，疫苗研制迫在眉睫。MRSA致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭酶的能力，其中溶血素α(alpha-Hemolysin，Hla)也是金葡菌感染致病的重要外毒素，通常由致病性金葡菌特别是MRSA产生，Hla可通过促使中性粒细胞裂解、损害上皮细胞，引起菌血症等临床症状，Hla免疫可缓解MRSA流行株所致的皮肤、软组织坏死及肺炎。通过Blast比对分析，Hla基因序列在已公布的致病性金黄色葡萄球菌中具有高度的保守性，其基因同源性大于90％，因此是理想的疫苗候选抗原。但由于Hla溶血活性强，直接作为疫苗组分可能存在安全性问题。研究证实，第35位的组氨酸(His)在穿孔复合物形成中具有重要作用，对该氨基酸进行定点突变为亮氨酸(Leu)后，可大大降低Hla的溶血活性。因此，本品中的Hla组分为经突变获得的突变子HlaH35L，除了降低溶血活性外未发现其他生物学功能改变。在MRSA的疫苗应答中，抗体应答起主要保护作用。研究证实，不能产生抗毒素中和抗体的人更易发生葡萄球菌感染相关的毒性休克综合征。由于蛋白抗原发挥其功能主要通过表位来体现特异性。因此，Hla抗原中免疫优势应答的保护性表位的鉴定，是提升和优化基于Hla抗原的金黄色葡萄球菌疫苗设计的重要前提。筛选Hla的免疫优势表位，是激发更有效的Hla免疫应答的前提。目前的已知的Hla的B细胞表位，或通过生物信息学软件推测，或通过单克隆抗体鉴定，或使用人或动物免疫模型中鉴定，该方法均无法鉴定临床MRSA感染状态下的人群免疫优势表位。尚未有全面筛选临床MRSA感染状态，参与免疫应答的Hla的优势表位的报道。因此，建立一种准确有效的筛选及鉴定临床MRSA感染状态下，参与免疫应答的Hla的B细胞优势表位的方法显得尤为重要。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术存在的上述问题，提供了一种金黄色葡萄球菌溶血素α的抗体优势表位肽，以及该表位肽在制备用于诊断、预防和/或治疗金黄色葡萄球菌感染的药物中的应用。本专利技术提供了一种用于诊断或防治金黄色葡萄球菌感染的α溶血素抗原表位肽，包含氨基酸序列为SEQIDNO：1(KVIFNNMVNQNW)的多肽。在根据本专利技术的一个实施方案中，所述α溶血素抗原表位肽为氨基酸序列为SEQIDNO：29或SEQIDNO：30的多肽。在根据本专利技术的一个实施方案中，还包含偶联在所述多肽N端或C端的多肽标记。在根据本专利技术的一个实施方案中，所述多肽标记为生物素标记或荧光标记。本专利技术还提供了一种用于制备抗金黄色葡萄球菌的抗体的融合蛋白，所述融合蛋白包含载体蛋白和上述的α溶血素抗原表位肽；所述载体蛋白选自匙孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋(BSA)、甲状腺球蛋白、纤维蛋白原、明胶、多聚抗原肽中的一种；优选地，所述多聚抗原肽为多聚赖氨酸(PLL)。本专利技术还提供了上述α溶血素抗原表位肽在制备用于诊断、预防或治疗金黄色葡萄球菌感染的药物中的应用。所述金黄色葡萄球菌可以为任意的能够引起感染的金黄色葡萄球菌，特别是耐药性极强的甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌菌株，所述甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌菌株可以为MRSA252标准株。本专利技术进一步提供了一种用于金黄色葡萄球菌感染的诊断试剂，包含上述的抗原表位肽。在根据本专利技术的一个实施方案中所述α溶血素抗原表位肽，包被于检测载体上，所述检测载体选自聚苯乙烯微量反应板、胶体金试剂条、磁珠和微流控芯片中的任一种。在根据本专利技术的一个实施方案中，还包含特异性识别人IgG抗体的第二抗体；例如，用免疫优势表位肽—KLH(钥孔血蓝蛋白)偶联物融合蛋白免疫动物，分析该优势表位肽的免疫原性与免疫反应性。优选地，所述第二抗体选自兔抗人单克隆抗体、兔抗人多克隆抗体、鼠抗人单克隆抗体、鼠抗人多克隆抗体、羊抗人多克隆抗体或羊抗人多克隆抗体中的一种；优选地，所述第二抗体偶联有激活或猝灭所述特异性荧光基团的配合基团。本专利技术的另一方面提供了上述的抗原表位肽在制备用于预防和/或治疗金黄色葡萄球菌感染的药物中的应用。所述药物可以被制备成不同的剂型而通过不同的途径进行给药，优选的，为了避免所述疫苗中抗原成分的降解，所述疫苗被制备成用于静脉给药的剂型，例如，可以为针剂。本专利技术进一步提供了一种用于预防或治疗金黄色葡萄球菌感染的药物，其包含上述的α溶血素抗原表位肽。在根据本专利技术的一个实施方案中，所述佐剂选自Quil-A佐剂(购自InvivoGen公司)本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的金黄色葡萄球菌溶血素α的抗体优势表位肽均能在动物体内诱发高水平优势表位抗血清，可以用于制备预防金黄色葡萄球菌感染的高效、低毒、高安全性的基于Hla的药物，如预防型疫苗。本专利技术提供的金黄色葡萄球菌溶血素α的抗体优势表位肽具有较强的免疫原性，用该优势表位免疫动物，免疫制剂无无关成分或有害成分，以该优势表位肽制备的特异性单克隆抗体可以较好地的预防金黄色葡萄球菌感染。经序列比对分析，本专利技术提供的金黄色葡萄球菌溶血素α的抗体优势表位肽在多种S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于诊断或防治金黄色葡萄球菌感染的α溶血素抗原表位肽，其特征在于，包含氨基酸序列为SEQ ID NO:1的多肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断或防治金黄色葡萄球菌感染的α溶血素抗原表位肽，其特征在于，包含氨基酸序列为SEQIDNO:1的多肽。


2.如权利要求1所述的α溶血素抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽为氨基酸序列为SEQIDNO:29或SEQIDNO:30的多肽。


3.如权利要求1或2所述的α溶血素抗原表位肽，其特征在于，还包含偶联在所述多肽N端或C端的多肽标记；优选地，所述多肽标记为生物素标记或荧光标记。


4.一种用于制备抗金黄色葡萄球菌的抗体的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含如权利要求1或2所述的α溶血素抗原表位肽和载体蛋白；所述载体蛋白选自匙孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋(BSA)、甲状腺球蛋白、纤维蛋白原、明胶或多聚抗原肽中的一种。


5.如权利要求1-3中任一项所述的α溶血素抗原表位肽在制备用于诊断、预防或治疗金黄色葡萄球菌感染的药物中的应用。


6.一种用于金黄色葡萄球菌感染的诊断试剂，其特征在于，包含如权利要求1-4中任一项所述的α溶血素抗原表位肽。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵卓，章金勇，曾浩，邹全明，刘智勇，宋旭，陈致富，段连礼，苟强，熊青山，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50