一种SLE相关的环状RNA hsa_circ_0025843及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种环状RNA circ‑FGD4及其用途，所述环状RNA circ‑FGD4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；另外，本发明专利技术提供了一种药物组合物、一种系统性红斑狼疮诊断试剂盒及circ‑FGD4基因作为靶基因在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的用途。circ‑FGD4基因及其表达产物作为诊断系统性红斑狼疮的标志物，使系统性红斑狼疮诊断更加准确、快速，作为制备治疗系统性红斑狼疮药物的靶基因为治疗系统性红斑狼疮提供了新的治疗靶点和治疗途径。

【技术实现步骤摘要】
一种SLE相关的环状RNAhsa_circ_0025843及其应用
本专利技术涉及分子生物学和免疫
，具体涉及一种SLE相关的环状RNAhsa_circ_0025843及其应用。
技术介绍
系统性红斑狼疮(Systemiclupuserthematosus，SLE)多年来一直被认为是一种典型的超敏状态，这种状态是由器官特异性沉积免疫复合物后的炎症过程介导的，伴随着包括补体系统在内的炎症途径的激活。在SLE患者中，存在着免疫细胞功能障碍，特别是异常活化的T/B淋巴细胞，导致大量自身抗体的产生，攻击自身组织器官造成损伤。在系统性红斑狼疮发病过程中，T和B淋巴细胞起着至关重要的作用，特别是T淋巴细胞的再循环广泛的接触体内抗原物质，加强免疫应答，进一步的发挥发挥细胞免疫和免疫调节功能，加强自身免疫性并促进了机体本身的免疫排斥，加重了系统性红斑性狼疮的病情。虽然有大量研究已表明遗传学、表观遗传学、环境因素及免疫学机制参与了系统性红斑狼疮的发生发展,但其确定的关键机制仍然是未知数。故深入研究SLE发生和发展中的分子机制、开发新的诊断标志物和治疗靶点成为当前SLE研究的热点和重点领域。环状RNA(circRNA)是一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴、并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子，其广泛表达于不同物种中的RNA分子，通常由前体mRNA(precursormessengerRNA,Pre-mRNA)经剪接环化产生的共价闭合环状的非编码RNA。与传统的线性RNA(mRNA)不同的是环状RNA分子具有闭合环状结构，比线性RNA结构稳定，表达更加稳定，丰度更高，也更不易被降解，这些特点都使得环状RNA在疾病诊断与治疗方法上都更具开发应用前景。通过过表达疾病过程中下调的环状RNA或抑制上调的环状RNA，将有极大的可能缓解疾病的发生和发展。Circ-FGD4(CircBaseID：hsa_circ_0025843)，其在基因组上的定位为：chr12:32751430-32764217strand:+，相应的线性基因为FGD4，环化序列有738个碱基。申请人研究发现PBMC(外周血单个核细胞)中FGD4基因的RNA存在环化现象，且环状RNAcirc-FGD4在SLE病人PBMC及CD3+T细胞中表达量显著上调，并抑制SLE病人T细胞的增殖，敲降circ-FGD4可逆转该过程，提示circ-FGD4可能成为SLE诊断和治疗的新途径。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种SLE相关的环状RNAhsa_circ_0025843及其应用，，对环状RNAcirc-FGD4在SLE病人中的表达及其对CD3+T细胞生物学功能的研究。提供基于circ-FGD4基因及其表达产物在SLE的诊断和治疗方面的用途。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种环状RNAcirc-FGD4，所述环状RNAcirc-FGD4的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。所述环状RNAcirc-FGD4的结构是由如SEQIDNO:1所示的核苷酸序列转录后经剪接形成的首尾相连的环状RNA结构。本专利技术还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含上述环状RNAcirc-FGD4。本专利技术还提供了一种SLE诊断试剂盒，所述试剂盒包含能够扩增如上所述的环状RNAcirc-FGD4的引物。优选地，所述扩增引物为由如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的DNA序列组成的引物对。本专利技术还提供了上述所述的环状RNAcirc-FGD4在制备治疗SLE的药物中的用途。本专利技术还提供了circ-FGD4基因作为靶基因在制备治疗SLE的药物中的用途，所述circ-FGD4基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术首先通过设计特异的环状RNA引物进行RT-PCR、Sanger测序、RNaseR降解实验证实circ-FGD4基因的客观存在；(2)本专利技术通过检测SLE病人中PBMC及CD3+T细胞circ-FGD4基因表达情况，发现其相较于正常人表达明显上调，因此，可作为SLE的诊断标志；(3)本专利技术对circ-FGD4基因进行了体外细胞功能学的研究，通过慢病毒感染shRNA-circ-FGD4构建了敲降circ-FGD4基因的稳定CD3+T细胞系。敲降组T细胞增殖明显高于负对照组和空白对照组，circ-FGD4抑制SLE病人T细胞的增殖。敲降组IL-2水平显著升高，circ-FGD4对SLET细胞IL-2分泌具有负性调节作用。circ-FGD4基因及其表达产物可以应用在制备治疗SLE的药物中。综上，沉默circ-FGD4后促进了CD3+T淋巴细胞的增殖及IL-2的分泌，对SLE的治疗提供了帮助。circ-FGD4基因及其表达产物可以应用在制备治疗SLE的药物中。circ-FGD4基因及其表达产物作为诊断SLE的标志物，使SLE诊断更加准确、快速，作为制备治疗SLE药物的靶基因为治疗SLE提供了新的治疗靶点和治疗途径。下面结合说明书附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明。附图说明图1为本专利技术实施例一的circRNA表达聚类热图；图2为本专利技术实施例一的circ-FGD4结构示意图；图3为本专利技术实施例一的生物信息分析流程示意图；图4为本专利技术实施例二的circ_FGD4RnaseR消化实验电泳示意图；图5为本专利技术实施例二的RnaseR消化实验qPCR验证示意图；图6为本专利技术实施例三的FISH细胞定位示意图；图7为本专利技术实施例四的人PBMC中circ_FGD4差异表达的qRT-PCR结果示意图；图8为本专利技术实施例四的人CD3+T细胞中circ_FGD4差异表达的qRT-PCR结果示意图；图9为本专利技术实施例四的正常人与SLE病人PBMC-ROC曲线示意图；图10为本专利技术实施例五的circ_FGD4-shRNA慢病毒感染CD3+T淋巴细胞的效率检测结果示意图；图11为本专利技术实施例六的has_circ_FGD4抑制SLE病人T细胞的增殖示意图；图12为本专利技术实施例七的circ_FGD4-shRNA侵染T细胞后分泌IL-2的表达水平示意图。具体实施方式本专利技术首先通过设计能扩增环状RNA的特异性引物，PCR扩增出来FGD4基因的环状RNA，接着进行RNaseR降解实验，确定了FGD4基因表达一种由738个核苷酸组成的，具有闭合环状结构的环状RNA分子。同时，采用荧光原位杂交的方法对环状RNAcirc-FGD4进行细胞内定位实验。进一步，本专利技术通过采用荧光定量PCR的方法检测circ-FGD4基因在SLE样本中的表达差异，结果显示circ-FGD4基因在SLE的PBMC中的表达水平明显高于正常人中的表达水平，并分析了circ-FGD4对SLE诊断的工作特征曲线，故可制作检测该基因表达变化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种SLE相关的环状RNA hsa_circ_0025843及其应用，其特征在于：包括系统性红斑狼疮诊断试剂盒，所述系统性红斑狼疮诊断试剂盒包含能够扩增cDNA序列如SEQ ID NO:1所示的环状RNA-circ-FGD4的引物。/n

【技术特征摘要】
1.一种SLE相关的环状RNAhsa_circ_0025843及其应用，其特征在于：包括系统性红斑狼疮诊断试剂盒，所述系统性红斑狼疮诊断试剂盒包含能够扩增cDNA序列如SEQIDNO:1所示的环状RNA-circ-FGD4的引物。


2.一种抑制系统性红斑狼疮细胞增殖的药物，其特征在于：包含cDNA序列如SEQIDNO:1所示的环状RNA-circ-FGD4，促进系统性红斑狼疮病人CD3+T细胞增殖并影响T细胞分泌细胞因子。

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【专利技术属性】
技术研发人员：叶辉，万乐予，向敏，王雪，汪子晗，褚晓颖，胡煊煊，李美琪，杜邦，张玉，桑侃如，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33