一种稳定性好且能快速消除药物干扰的肌酐试剂盒制造技术

本发明专利技术的一种稳定性好且能快速消除药物干扰的肌酐试剂盒，其技术方案要点是：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1中包含缓冲液、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶或过氧化氢酶、血清白蛋白、非离子表面活性剂、防腐剂、Trinder’s反应剂A、漆酶或金属酸盐；所述试剂R2包含缓冲液、血清白蛋白、肌酐酶、防腐剂、及Trinder’s反应剂B。本发明专利技术克服现在各医院临床检验测定肌酐时，由于血清标本中含羟苯磺酸钙、酚磺乙胺造成的负偏差，使肌酐测定时不准确的缺陷，适用于全自动生化分析仪血清肌酐的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种稳定性好且能快速消除药物干扰的肌酐试剂盒本案为分案申请，具体为申请号：2020108215100，名称为：一种可消除羟苯磺酸钙，酚磺乙胺的肌酐试剂盒及其制备方法，申请日为：2020.08.15的分案申请。
本专利技术属于医学检验
，本专利技术涉及一种稳定性好且能快速消除药物干扰的肌酐试剂盒。
技术介绍
肌酐为临床检验上肾功能的主要指标及检测项目，测定血清肌酐的方法主要有两种：一种是碱性苦味酸速率法(Jaffe法)，一种是肌氨酸氧化酶法；Jaffe法由于线性范围窄，特异性差，易受样本中其他物质(如酮体、抗坏血酸、胆红素、头孢、多巴胺等)干扰，出现检测偏差，已逐渐退出市场。目前市场使用较多的为肌氨酸氧化酶法，此法已被各医院逐渐淘汰弃用改由肌氨酸氧化酶法检测，其检测原理如下：现行市售检测试剂盒均为双试剂，试剂R1内含肌酸酶，肌氨酸氧化酶先将血清中之肌酸分解产生H2O2，再以过氧化物酶及Trinder’s试剂与形成的H2O2反应生产无色化合物，或以过氧化氢酶用来消除血清肌酸产生的H2O2，将生成的H2O2分解成水和氧，然后加入R2试剂，R2试剂里含肌酐酶及另一种Trinder’s试剂，及叠氮钠，肌酐酶将肌酐水解成肌酸再由R1里的肌酸酶，肌氨酸氧化酶，过氧化物酶及Trinder’s试剂之4-AAP及另一种Trinder’s试剂苯酚类化合物共同存在下呈色进行测定，试剂R1里如含过氧化氢酶则被试剂R2内之叠氮钠反应掉，此反应过程均利用了酶的专一性，但生成的H2O2为强氧化剂，极易被血清中的还原性药物消耗而产生负干扰。肌酐作为肾功能最重要的指标，在肾病造成的微血管病变治疗及保护上常用的羟苯磺酸钙常用药具极强的还原性可与H2O2直接反应，消耗掉H2O2；另在常用于预防及治疗外科手术出血过多的常用药酚磺乙胺，亦具有强的还原性，此两种药物均会消耗现今医院常用的肌酐酶法测定时产生的H2O2，造成肌酐值会有严重的负偏差，造成医师诊断治疗时的误判。羟苯磺酸钙和酚磺乙胺对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰对被施用这两种药物的患者造成很大的不便。例如，对于糖尿病患者而言，常伴发肾功能不全，而所施用的羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰可能造成糖尿病患者肾功能不正确评估，掩盖并延误病情。而对于手术患者，所施用的酚磺乙胺对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰可能使得不能正确评估其肾功能，造成术后并发症，影响患者的术后恢复。
技术实现思路
本专利技术公开一种可消除血清中羟苯磺酸钙、酚磺乙胺药物引起肌酐测定负偏差干扰的肌酐试剂盒，克服现在各医院临床检验测定肌酐时，由于血清标本中含羟苯磺酸钙、酚磺乙胺造成的负偏差，使肌酐测定时不准确，导致医师治疗过程中的误判的缺陷，试剂盒稳定性好，操作简单迅速，使测定准确，适用于全自动生化分析仪血清肌酐的检测。本专利技术还公开一种可消除血清中羟苯磺酸钙、酚磺乙胺药物引起肌酐测定负偏差干扰的肌酐试剂盒的制备方法。本专利技术的可消除血清中羟苯磺酸钙、酚磺乙胺药物引起肌酐测定负偏差干扰的肌酐试剂盒，包括独立的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1中包含缓冲液、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶或过氧化氢酶、血清白蛋白、非离子表面活性剂、防腐剂、Trinder’s反应剂A、漆酶或金属酸盐；所述试剂R2包含缓冲液、血清白蛋白、肌酐酶、防腐剂、可含亦可不含非离子表面活性剂，及Trinder’s反应剂B。漆酶可利用氧(O2)将羟苯磺酸钙及酚磺乙胺氧化成苯醌类化合物；上述金属酸盐或五氧化二钒或三氯氧钒作为氧化剂可将羟苯磺酸钙，酚磺乙胺氧化，避免消耗掉在肌酐测定时产生的H2O2。上述R1试剂中，漆酶或氧化态金属酸盐或五氧化二钒或三氯氧钒组分亦可由试剂R1中剥离出来，单独一并使用前再加入成为试剂R1。优选的，试剂R1中有时也会包含抗坏血酸氧化酶，抗坏血酸氧化酶的量在5-10KU/L，优选5.5-10KU/L的范围内，抗坏血酸氧化酶的量在上述范围内时可以有效地降低抗坏血酸对肌酐测定所造成的干扰，在一些具体实施方式中，所述抗坏血酸氧化酶的量可以为5.5KU/L、6.4KU/L、7.5KU/L、8.8KU/L、8.6KU/L、6KU/L、7.2KU/L、9.2KU/L、9.5KU/L或10KU/L。优选的，所述漆酶是Sigma-Alderich公司产品号SAE0050之漆酶。所述漆酶是一种含铜的多酚氧化还原酶，可利用水中的氧分子氧化多种苯酚类化合物生成醌类化合物，氧分子本身被还原成水，为污水处理中常用于环境友好酶用来消除污水中的酚类化合物。羟苯磺酸钙及酚磺乙胺均为含苯酚环结构之还原剂，漆酶可以将其氧化消除；但漆酶一般在PH2～4时活力最高，稳定性较好，而肌酐酶法试剂之PH值须在7～9，本专利试验不同来源之漆酶后，最终筛选出Sigma-Alderich公司产品号SAE0050之漆酶，其在PH7.0～9.0时有很好之活性及稳定性，可加入肌酐酶R1试剂中用以消除羟苯磺酸钙及酚磺乙胺之干扰。优选的，所述金属酸盐包括氧化态镍酸盐、铁酸盐、钴酸盐、铬酸盐、锰酸盐、钒酸盐，所述钒酸盐包括多聚钒酸盐、偏钒酸盐、五氧化二钒或三氯氧钒一种或一种以上混合。本专利技术采用元素周期表中23、24、25、26、27、28位各金属元素酸盐，具体选择氧化还原电位高的氧化态镍酸盐、钴酸盐、铬酸盐、锰酸盐、钒酸盐，所述钒酸盐包括偏钒酸盐、多聚钒酸盐、五氧化二钒或三氯氧钒均可做为氧化剂来消除肌酐测定时血清中羟苯磺酸钙及酚磺乙胺的干扰造成的负偏差，同时不影响试剂R1及试剂R2中各组分的稳定性。优选的，所述R1中缓冲液浓度为5～200mM，PH7.0～9.0；肌酸酶含量5～50ku/升，肌氨酸氧化酶含量5～50ku/升，抗坏血酸氧化酶1～10ku/升，过氧化物酶含量1～10ku/升，或含过氧化氢酶100～500ku/升，血清蛋白1～2克/升，Trinder’s反应剂A0.5～5mM/升[所述的Trinder’s反应剂A为4－氨基安替比林(4-Aminoantipyrine,简称4－AAP)]；防腐剂重量比含量0.005％-0.2％，如采用漆酶消除羟苯磺酸钙及酚磺乙胺之负干扰时，漆酶含量0.1～10ku/升；如采用上述金属酸盐氧化剂或五氧化二钒或三氯氧钒氧化剂时则单一种或混合二种及以上时其含量在0.01～10mM；所述的高氧化还原电位金属酸盐、包含所述含金属酸的钠、钾、铵盐。优选的，所述R1的缓冲液为BES、BICINE、DIPSO、EPPS、PIPES、HEPES、MOPS、TAPS、TAPSO、TES、Tricine、Tris、双甘肽、磷酸盐中的一种或一种以上混合；试剂R2所述的缓冲液为BES、BICINE、DIPSO、EPPS、PIPES、HEPES、MOPS、TAPS、TAPSO、TES、TRICINE、TRTS、双甘肽、磷酸盐中的一种或一种以上混合。优选的，所述试剂R1及试剂R2中还含有表面活性剂，其重量比含量为0.01％～0.3％，所述表面活性剂为非本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种稳定性好且能快速消除药物干扰的肌酐试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1中包含缓冲液、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、血清白蛋白、非离子表面活性剂、防腐剂、Trinder’s反应剂A、漆酶或铬酸盐或铁酸盐或五氧化二钒；所述试剂R2包含缓冲液、血清白蛋白、肌酐酶、防腐剂、Trinder’s反应剂B；所述的Trinder’s反应剂A为4－氨基安替比林，所述Trinder’s反应剂B为TOOS、DHBS、DAOS、HDAOS、TBHBA、TOPS、TODB、4－氯酚的一种或两种以上混合；所述防腐剂为Proclin、硫酸庆大霉素、PARABEN、氯霉素、叠氮钠之一种或两种。/n

【技术特征摘要】
1.一种稳定性好且能快速消除药物干扰的肌酐试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1中包含缓冲液、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、血清白蛋白、非离子表面活性剂、防腐剂、Trinder’s反应剂A、漆酶或铬酸盐或铁酸盐或五氧化二钒；所述试剂R2包含缓冲液、血清白蛋白、肌酐酶、防腐剂、Trinder’s反应剂B；所述的Trinder’s反应剂A为4－氨基安替比林，所述Trinder’s反应剂B为TOOS、DHBS、DAOS、HDAOS、TBHBA、TOPS、TODB、4－氯酚的一种或两种以上混合；所述防腐剂为Proclin、硫酸庆大霉素、PARABEN、氯霉素、叠氮钠之一种或两种。


2.根据权利要求1所述的一种稳定性好且能快速消除药物干扰的肌酐试剂盒，其特征在于：所述漆酶是Sigma-Alderich公司产品号SAE0050之漆酶。


3.根据权利要求1所述的一种稳定性好且能快速消除药物干扰的肌酐试剂盒，其特征在于：
所述R1中，缓冲液浓度为5～200mM，PH7.0～9.0；
肌酸酶含量5～50ku/升；
肌氨酸氧化酶含量5～50ku/升；
过氧化物酶含量1～10ku/升；
抗坏血酸氧化酶1～10ku/升；
血清蛋白1～2克/升；
Trinder’s反应剂A0.5～5mM/升；
防腐剂重量比为0.005％-0.2％时，漆酶含量0.1～10ku/升，或...

【专利技术属性】
技术研发人员：俞永标，
申请(专利权)人：中山标佳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44