R1R6基因型苹果作为受体材料在制备红肉转基因苹果中的应用制造技术

本发明专利技术公开了R1R6基因型苹果作为受体材料在制备红肉转基因苹果中的应用。本发明专利技术提供了R1R6基因型苹果作为受体材料在制备转基因苹果中的应用。本发明专利技术还提供了苹果(Malus sp.)BCF2作为受体材料在制备转基因苹果中的应用。本发明专利技术还提供了一种制备转基因苹果的方法，包括如下步骤：苹果(Malus sp.)BCF2作为受体材料进行遗传转化，得到转基因苹果。本发明专利技术的发明专利技术人发现，以“紫红一号”苹果和“嘎啦”苹果为亲本得到的F2代中，基因型为R1R6的株系更容易得到组培苗，且作为遗传转化受体具有更高的转化效率，其中G2株系的转化率最高。本发明专利技术对于转基因红肉苹果的创制具有重大的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
R1R6基因型苹果作为受体材料在制备红肉转基因苹果中的应用
本专利技术涉及R1R6基因型苹果作为受体材料在制备红肉转基因苹果中的应用。
技术介绍
苹果是我国落叶果树的第一大树种，据2016年统计数据显示，我国苹果栽培面积和产量分别达到246.69万hm2和4388.23万t，居世界首位，是世界上最大的苹果资源、生产和消费国。苹果耐贮性好，供应周期长，其果实含有较高比例的、人体比较容易吸收的游离多酚，具有很好的抗氧化、抗肿瘤、预防心脑血管疾病及保肝等作用，营养保健价值高。近几年，随着苹果全基因组测序的完成，国内外有关苹果的基础研究取得了长足的进步，越来越多的与苹果产量、抗性、品质、发育等相关的功能基因被克隆、鉴定。但是，受限于转基因苹果材料极难获得，很多基因的功能无法得到全面的验证。目前，国内外用于转基因功能验证的苹果材料仅有一个‘嘎啦’的组培苗‘GL3’，其转化效率较低。此外，‘嘎啦’的组培苗‘GL3’属于普通白肉苹果，果肉中的类黄酮、花青苷等营养保健成分极低，不适于开展相关研究。国内外仍未有可用于基因编辑的红肉苹果组培苗。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供R1R6基因型苹果作为受体材料在制备红肉转基因苹果中的应用。本专利技术提供了R1R6基因型苹果作为受体材料在制备转基因苹果中的应用。本专利技术还提供了R1R6基因型苹果作为转基因受体材料在苹果育种中的应用。本专利技术还提供了一种制备转基因苹果的方法，包括如下步骤：将R1R6基因型苹果作为受体材料进行遗传转化，得到转基因苹果。所述R1R6基因型苹果为从F2代苹果中筛选得到的；所述F2代苹果为F1代苹果的后代；所述F1代苹果为“紫红一号”苹果和“嘎啦”苹果的杂交后代；筛选R1R6基因型苹果的方法如下：以苹果的基因组DNA为模板，采用序列表的序列1所示的引物R6F和序列表的序列2所示的引物R6R组成的引物对进行PCR扩增，如果得到大小分别为483-503bp和382-402bp的两种扩增产物，待测苹果为R1R6基因型苹果。所述F2代苹果为F1代苹果的直接后代，即第一代后代。所述F2代苹果为F1代苹果自然授粉得到的后代。所述F1代苹果为“紫红一号”苹果和“嘎啦”苹果的直接杂交后代，即第一代后代。“紫红一号”苹果作为父本，“嘎啦”苹果作为母本。所述苹果的基因组DNA具体可为苹果的叶片的基因组DNA。所述转基因苹果为红肉转基因苹果。红肉转基因苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的转基因苹果。所述转基因苹果为高类黄酮含量的转基因苹果。高类黄酮含量的转基因苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的转基因苹果。所述苹果育种为红肉苹果育种。红肉苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的苹果。所述苹果育种为高类黄酮含量苹果育种。高类黄酮含量苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的苹果。本专利技术还提供了苹果(Malussp.)BCF2作为受体材料在制备转基因苹果中的应用。本专利技术还提供了苹果(Malussp.)BCF2作为转基因受体材料在苹果育种中的应用。本专利技术还提供了一种制备转基因苹果的方法，包括如下步骤：将苹果(Malussp.)BCF2作为受体材料进行遗传转化，得到转基因苹果。苹果(Malussp.)BCF2，即G2株系，已于2020年12月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCCNo.20162。所述转基因苹果为红肉转基因苹果。红肉转基因苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的转基因苹果。所述转基因苹果为高类黄酮含量的转基因苹果。高类黄酮含量的转基因苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的转基因苹果。所述苹果育种为红肉苹果育种。红肉苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的苹果。所述苹果育种为高类黄酮含量苹果育种。高类黄酮含量苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的苹果。示例性的，以上任一所述遗传转化为导入促进类黄酮积累相关基因的遗传转化。示例性的，以上任一所述遗传转化为导入MdMYB10基因或者导入PpMYB15基因的遗传转化。MdMYB10基因具体如序列表的序列5所示。PpMYB15基因具体如序列表的序列6所示。现有技术中，转基因苹果材料极难获得，很多基因的功能无法得到全面的验证。目前，国内外用于转基因功能验证的苹果材料仅有一个‘嘎啦’的组培苗‘GL3’，其转化效率较低。此外，‘嘎啦’的组培苗‘GL3’属于普通白肉苹果。国内外仍未有可用于基因编辑的红肉苹果组培苗。本专利技术的专利技术人发现，以“紫红一号”苹果和“嘎啦”苹果为亲本得到的F2代中，基因型为R1R6的株系更容易得到组培苗，且作为遗传转化受体具有更高的转化效率，其中G2株系的转化率最高。本专利技术对于转基因红肉苹果的创制具有重大的应用价值。附图说明图1为实施例2中乳白色的种胚的照片。图2为实施例2中制备组培苗的步骤1的照片。图3为实施例2中制备组培苗的步骤2的照片。图4为实施例2中制备组培苗的步骤3的照片(可以正常分化并继代)。图5为实施例2中制备组培苗的步骤3的照片(不能正常分化并继代)。图6为实施例2中幼苗照片和基因型检测的电泳图。图7为实施例2中生根培养的照片。图8为实施例2中温室培养的照片。图9为实施例3中制备转基因株系过程中的照片和可以正常生长的植株的照片。图10为实施例3中死亡植株的示例性照片。图11为实施例3中不能正常分化形成丛生芽的组织的照片。图12为实施例3中G2株系为受体材料得到的部分转基因株系的PCR鉴定结果。图13为实施例3中MdMYB10基因表达量鉴定的结果。图14为实施例3中在筛选培养基上正常生长10-15天的照片。图15位实施例4中G2株系为受体材料得到的部分转基因株系的PCR鉴定结果。图16为实施例4中PpMYB15基因表达量鉴定的结果。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。如无特殊说明，以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。“紫红一号”苹果，又称为“紫红1号'”红肉苹果，记载于如下文献：王燕等，‘紫红1号'红肉苹果果肉抗氧化性及花色苷分析。...

【技术保护点】
1.R1R6基因型苹果作为受体材料在制备转基因苹果中的应用；/n所述R1R6基因型苹果为从F2代苹果中筛选得到的；/n所述F2代苹果为F1代苹果的后代；/n所述F1代苹果为“紫红一号”苹果和“嘎啦”苹果的杂交后代；/n筛选R1R6基因型苹果的方法如下：以苹果的基因组DNA为模板，采用序列表的序列1所示的引物R6F和序列表的序列2所示的引物R6R组成的引物对进行PCR扩增，如果得到大小分别为483-503bp和382-402bp的两种扩增产物，待测苹果为R1R6基因型苹果。/n

【技术特征摘要】
1.R1R6基因型苹果作为受体材料在制备转基因苹果中的应用；
所述R1R6基因型苹果为从F2代苹果中筛选得到的；
所述F2代苹果为F1代苹果的后代；
所述F1代苹果为“紫红一号”苹果和“嘎啦”苹果的杂交后代；
筛选R1R6基因型苹果的方法如下：以苹果的基因组DNA为模板，采用序列表的序列1所示的引物R6F和序列表的序列2所示的引物R6R组成的引物对进行PCR扩增，如果得到大小分别为483-503bp和382-402bp的两种扩增产物，待测苹果为R1R6基因型苹果。


2.R1R6基因型苹果作为转基因受体材料在苹果育种中的应用；
所述R1R6基因型苹果为从F2代苹果中筛选得到的；
所述F2代苹果为F1代苹果的后代；
所述F1代苹果为“紫红一号”苹果和“嘎啦”苹果的杂交后代；
筛选R1R6基因型苹果的方法如下：以苹果的基因组DNA为模板，采用序列表的序列1所示的引物R6F和序列表的序列2所示的引物R6R组成的引物对进行PCR扩增，如果得到大小分别为483-503bp和382-402bp的两种扩增产物，待测苹果为R1R6基因型苹果。


3.一种制备转基因苹果的方法，包括如...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘文军，王楠，陈学森，房鸿成，于蕾，李志强，毛志泉，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37