比色法快速测定大豆低聚糖--棉子糖的方法技术

本发明专利技术提供的是一种比色法快速测定大豆低聚糖－棉子糖的方法。首先配制测定用试剂，分别制备出１％大豆低聚糖－棉子糖标准液母液；用母液制备出不同浓度的溶液，向这些不同浓度的溶液中添加测定用试剂，在１００℃温度下反应１０分钟；之后利用分光光度计在波长５４０ｎｍ下测定出消光值，制作出浓度和消光值之间的标准曲线，得到标准曲线的计算公式；其次配制未知样品溶液，按照制作标准曲线的方法进行测定，通过标准曲线或计算公式计算出未知样品中大豆低聚糖－棉子糖的浓度。本发明专利技术的方法可以用来测定大豆低聚糖（棉子糖）。应用领域广泛，可以应用于工业、农业、原料收购及相关终端产品等的质量测定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种检测方法，具体地说是一种大豆低聚糖-棉子糖含量的快速检测方法。
技术介绍
大豆低聚糖-棉子糖广泛存在于植物中，以豆科植物为多。甜度为蔗糖的22％，低能量。对热(140℃下不分解)和酸稳定。促进双歧杆菌的增值，从而减少肠内腐败细菌数。因此，广泛地应用于保健食品、化妆品、饲料添加剂等行业。随着应用范围不断地扩大，快速检测手段也越来越受重视。目前分析检测方法有高压液相色谱法和气相色谱法(黄雨三2003)。色谱法仪器比较贵，同时要有该专业技术人员，一般加工厂不易实现。此外色谱法等仪器不方便携带，在农业育种和栽培生产中的随时监控等实际应用比较困难。该方法适合于大学及研究所对大豆低聚糖-棉子糖的研究；相比之下，分光光度计比色法操作简单，检测成本低，容易克服上述不足，做常规性测定易于被生产厂家所应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用分光光度计比色法快速测定大豆低聚糖-棉子糖的法。本专利技术的目的是这样实现的首先配制测定用试剂，分别制备出1％大豆低聚糖-棉子糖标准液母液；用母液制备出不同浓度的溶液，向这些不同浓度的溶液中添加测定用试剂，在100℃温度下反应10分钟；之后利用分光光度计在波长540nm下测定出消光值，制作出浓度和消光值之间的标准曲线，得到标准曲线的计算公式；其次配制未知样品溶液，按照制作标准曲线的方法进行测定，通过标准曲线或计算公式计算出未知样品中大豆低聚糖-棉子糖的浓度。本专利技术的方法还可以包括1、所述的测定用试剂为将200g酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·5H2O)，10～30g氢氧化钠(NaOH)溶于0.8L蒸馏水中；搅拌加热下，将3，5-二硝基水杨酸(DNS)3～9g、结晶酚(苯酚)3～9g、亚硫酸钠(Na2SO3)3～9g，先后于酒石酸钾钠和氢氧化钠溶液中溶解；最后再加入铁氰化钾[K3Fe(CN)6]0.1～0.5g使其溶解，冷却后加蒸馏水定容至1L所得到的溶液。2、所述的其测定过程为棉子糖标准样品和测定专用试剂在体积为5ml的离心管中摇匀，100℃水浴加热10分钟，取出后立即放入4℃冰箱中冷却，之后各管在天平上以蒸馏水定重量至4.0g，加盖后混匀；在540nm波长下，测定消光值；以浓度为横坐标，消光值为纵坐标，分别绘制出大豆低聚糖-棉子糖的标准曲线，求得直线方程。同时用相同的方法做出70℃下恒温1小时的葡萄糖标准曲线，求得直线方程；未知样品用同样方法进行。3、根据70℃下葡萄糖标准曲线方程求得70℃下还原糖量的计算公式为70℃下还原糖量A(％)＝(C70)·V0(1000V1·W)-1式中C7070℃下标准曲线方程求得的还原糖量(mg)；V0提取液的体积(ml)V1显色时吸取样品液体积(ml)；W样品重(g)。(2)、根据100℃下葡萄糖标准曲线方程求出C70的消光值为B；(3)、100℃下葡萄糖和棉子糖共存下的消光值为C；(4)、100℃下棉子糖消光值C-B＝D；(5)、根据100℃下棉子糖标准曲线方程求出棉子糖百分含量的计算公式为棉子糖(％)＝(C100)·V0(1000V1·W)-1式中C100根据消光值D，100℃下标准曲线方程求得的棉子糖(mg)；V0提取液的体积(ml)V1显色时吸取样品液体积(ml)；W样品重(g)。专利技术方法的原理在煮沸的碱性溶液中，还原糖(具有醛基或酮基)使3，5-二硝基水杨酸成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的含量和棕红色物质的颜色深浅的程度成一定比例关系。540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查标准曲线，可求出样品中还原糖的含量。这是许多生物化学实验指导书中还原糖的分光光度计比色测定方法(郝再彬等2004；入村达郎等2004)。植物体内的还原糖主要是单糖(葡萄糖和果糖)、双糖(麦芽糖、异麦芽糖、纤维二糖)。葡萄糖有6个碳原子、一个醛基；果糖有6个碳原子、一个酮基；麦芽糖由两个葡萄糖分子以α-1，4-键相结合、含一个醛基；异麦芽糖由两个葡萄糖分子以α-1，6-键相结合、含一个醛基；纤维二糖由两个葡萄糖分子以β-1，4-键相结合、含一个醛基。蔗糖是非还原糖，由葡萄糖(图1中的B)和果糖(图1中的C)分子以α-1，2-键结合而成，与3，5-二硝基水杨酸没有呈色反应。低聚糖的棉子糖(图1)是葡萄糖(图1中的A)和蔗糖分子中的葡萄糖(图1中的B)以α-1，6-键结合；低聚糖的水苏糖是葡萄糖和棉子糖分子中的葡萄糖(图1中的A)以α-1，6-键结合。因此，棉子糖和水苏糖都没有还原糖的醛基，它们不能与还原糖(具有醛基或酮基)测定用的3，5-二硝基水杨酸试剂发生反应。根据上述理论，我们认为相同摩尔浓度的葡萄糖和麦芽糖所含的醛基数量相同时，540nm波长下3，5-二硝基水杨酸方法测定它们的消光值应该相等，葡萄糖和麦芽糖两条标准曲线斜率也应该相同；然而，我们发现它们不相等，麦芽糖的消光值大于葡萄糖的消光值。即在麦芽糖分子中除醛基之外还有其他基团与测定试剂发生了反应，从而导致消光值大于葡萄糖。由此，我们利用该原理专利技术了3，5-二硝基水杨酸和铁氰化钾组成专用试剂，可以测定大豆低聚糖-棉子糖。本专利技术的专用试剂可以用来测定大豆低聚糖-棉子糖。本专利技术的方法应用领域广泛，可以应用于1)工业大豆低聚糖-棉子糖的提取、纯化等工业化生产的随时监控；2)农业与大豆低聚糖-棉子糖相关的作物栽培和育种的种植中，大豆低聚糖-棉子糖含量质量监控；3)原料收购收购与大豆低聚糖-棉子糖相关的作物时，大豆低聚糖-棉子糖含量测定；4)相关终端产品在食品、保健品、药品、化妆品、添加大豆低聚糖—棉子糖的产品中，浓缩之后用该方法测定等。附图说明图1是大豆低聚糖-棉子糖的结构式。(五)具体实施方案下面对本专利技术做更详细的描述1.材料含低聚糖-棉子糖植物的叶片或低聚糖-棉子糖粉。2.仪器设备分光光度计；分析天平；离心机；水浴锅；5ml离心管；容量瓶；研钵。3.试剂和标准液(1)测定用试剂200g酒石酸钾钠(KNaC4H4O65H2O)与10～30gNaOH溶于0.8L蒸馏水中。搅拌加热下，将3，5-二硝基水杨酸(DNS)3～9g，结晶酚(苯酚)1～10g，亚硫酸钠(Na2SO3)1～10g，先后于溶液中溶解。最后再加入铁氰化钾(K3Fe(CN)6)0.1～0.5g使其溶解，冷却后加蒸馏水定容至1L，贮于棕色瓶中备用；备用试剂出现混浊时要过滤。(2)标准液80℃下烘至恒重的葡萄糖、大豆低聚糖(棉子糖)。分别制备出10mg.ml-1和300mg.ml-1，摇匀后置冰箱中保存备用。4.标准曲线制备葡萄糖和大豆低聚糖(棉子糖)标准曲线制备将7支5ml离心管编号，按表1精确加入浓度为10mg mL-1的葡萄糖标准液和测定试剂；按表2精确加入浓度为300mg mL-1的大豆低聚糖(棉子糖)标准液和测定试剂。将各管摇匀，在100□加热10分钟，取出后立即放入4□冰箱中冷却，之后各管在天平上以蒸馏水定重量至4g，加盖后颠倒混匀。在540nm波长下，用0号管调零，分别读取1～6号管的消光值。以消光值为纵坐标，浓度为横坐标，分别绘制出葡萄糖、大豆低聚糖(棉子糖)的标准曲线，求得直线方程。同样的方法做出70℃下恒温1小时的葡萄糖标准曲线，求得直线方程。表1 各试管加葡萄糖标准溶液的量 注意表中各量是根本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种比色法快速测定大豆低聚糖－棉子糖的方法，其特征是：首先配制测定用试剂，分别制备出１％大豆低聚糖－棉子糖标准液母液；用母液制备出不同浓度的溶液，向这些不同浓度的溶液中添加测定用试剂，在１００℃温度下反应１０分钟；之后利用分光光度计在波长５４０ｎｍ下测定出消光值，制作出浓度和消光值之间的标准曲线，得到标准曲线的计算公式；其次配制未知样品溶液，按照制作标准曲线的方法进行测定，通过标准曲线或计算公式计算出未知样品中大豆低聚糖－棉子糖的浓度；具体所述的其测定过程为：大豆低聚 糖－棉子糖标准样品和测定专用试剂在体积为５ｍｌ的离心管中摇匀，１００℃水浴加热１０分钟，取出后立即放入４℃冰箱中冷却，之后各管在天平上以蒸馏水定重量至４．０ｇ，加盖后混匀；在５４０ｎｍ波长下，测定消光值；以浓度为横坐标，消光值为纵坐标，分别绘制出大豆低聚糖－棉子糖的标准曲线，求得直线方程；同时用相同的方法做出７０℃下恒温１小时的葡萄糖标准曲线，求得直线方程；未知样品用同样方法进行。

【技术特征摘要】
1.一种比色法快速测定大豆低聚糖—棉子糖的方法，其特征是首先配制测定用试剂，分别制备出1％大豆低聚糖—棉子糖标准液母液；用母液制备出不同浓度的溶液，向这些不同浓度的溶液中添加测定用试剂，在100℃温度下反应10分钟；之后利用分光光度计在波长540nm下测定出消光值，制作出浓度和消光值之间的标准曲线，得到标准曲线的计算公式；其次配制未知样品溶液，按照制作标准曲线的方法进行测定，通过标准曲线或计算公式计算出未知样品中大豆低聚糖—棉子糖的浓度；具体所述的其测定过程为大豆低聚糖—棉子糖标准样品和测定专用试剂在体积为5ml的离心管中摇匀，100℃水浴加热10分钟，取出后立即放入4℃冰箱中冷却，之后各管在天平上以蒸馏水定重量至4.0g，加盖后混匀；在540nm波长下，测定消光值；以浓度为横坐标，消光值为纵坐标，分别绘制出大豆低聚糖—棉子糖的标准曲线，求得直线方程；同时用相同的方法做出70℃下恒温1小时的葡萄糖标准曲线，求得直线方程；未知样品用同样方法进行。2.根据权利要求1所述的比色法快速测定大豆低聚糖—棉子糖的专用试剂特征组成是将200g酒石酸钾钠(KNaC4H4O65H2O)，10～30g氢氧化钠(NaOH)溶于0....

【专利技术属性】
技术研发人员：郝再彬，杨丹，一井真比古，
申请(专利权)人：郝再彬，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]