一种建立食管癌PDX小鼠模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种建立食管癌PDX小鼠模型的方法，通过临床食管癌患者病例筛选，于手术室采集食管肿瘤标本和病人血液样本，将病人血液标本进行离心，在经紫外消毒后的超净工作台内用移液枪吸取血清至多个EP管内，每个EP管内放置1ml，并将放置标本的EP管放置冰上，供移植时所用，剩余的冻存于负80度冰箱供传代时所用；血清预处理是用与肿瘤标本相同来源的患者血清对待接种的肿瘤标本进行37

【技术实现步骤摘要】
一种建立食管癌PDX小鼠模型的方法


[0001]本专利技术涉及医学领域，具体涉及一种建立食管癌PDX小鼠模型的方法。

技术介绍

[0002]食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一，中国是世界上食管癌发病率最高的国家。多年以来，众多从事食管癌防治工作者锐意创新，在食管癌的流行病学、早期诊断、综合治疗及预防等方面取得了举世瞩目的成绩，但是食管癌的防治工作仍举步维艰，总体还未达到令人满意的程度，特别是在药物筛选，开发新药方面尚未取得巨大突破。
[0003]为研究开发新药，找到药物的特异性靶点和准确预测疗效，肿瘤动物模型的研究不可或缺。常见的肿瘤动物模型为人源肿瘤细胞系异种移植(cell
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derived xenograft, CDX)和人源肿瘤组织来源移植瘤模型（patientl derived xenograft, PDX),二者的主要区别在于用于建立CDX动物模型的“原材料”为肿瘤细胞，而用于建立PDX动物模型的则是从患者体内采集的肿瘤标本。CDX作为纯肿瘤细胞衍生的肿瘤动物模型，其成功率和传代率自然比PDX高出许多，但其与患者的亲源性则大大降低，因此在肿瘤药物研究过程中无法对该药物疗效做出准确预测；而PDX则刚好可以弥补这一缺陷，其可以完全或部分在免疫缺陷小鼠体内模拟肿瘤在人体内生存的环境,大大增加了肿瘤动物模型与人体的亲源性，同时也可在小鼠体内维持肿瘤的生物学、组织病理学的特性，从而为肿瘤药物药效研究提供更加精确可靠的预测依据。
[0004]在现有PDX小鼠建模技术中，从患者体内采集到的肿瘤标本在移植于免疫缺陷型小鼠后，尽管基于小鼠的免疫缺陷性这一特征可以成功附着于小鼠皮下并生长，但由于该肿瘤标本仍带有一定的患者自身的免疫力，所以在肿瘤与小鼠之间仍存在一定程度的免疫排斥反应，导致移植的肿瘤短期内无法完全定植附着于小鼠皮下达到肿瘤正常的生长状态，同时尚未完全定植的肿瘤还容易由于供血不足等原因而发生坏死，最终影响建模及传代的成功率、延长了建模周期。
[0005]基于现有技术的食管癌PDX小鼠模型成功率低、传代不稳定、周期长等缺陷，导致PDX动物模型目前无法得到大规模、常规化应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种建立食管癌PDX小鼠模型的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题，本专利技术成功率高、能够稳定传代，周期短。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种建立食管癌PDX小鼠模型的方法，具体步骤如下：一、标本采集：通过临床食管癌患者病例筛选，于手术室采集食管肿瘤标本和病人血液样本；二、标本运输：标本离体后用盐水适当冲洗，接着转入含有细胞培养基RPMI
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1640 /DMEM的50ml离心管中，并与病人血液样本一同置于冰上运送至动物中心；
三、血液标本预处理：将病人血液标本进行离心，在经紫外消毒后的超净工作台内用移液枪吸取血清至多个EP管内，每个EP管内放置1ml，并将放置标本的EP管放置冰上，供移植时所用，剩余的冻存于负80度冰箱供传代时所用；四、肿瘤标本预处理：在经紫外消毒后的超净工作台内剔除肿瘤的部分坏死组织，经生理盐水冲洗后将肿瘤切成米粒大小，将待接种的肿瘤分为两组放入含有生理盐水的100mm培养皿中加盖置于冰上；五、小鼠接种：选取偶数只4
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6周龄的BALB/c
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nu/nu 小鼠，均分为2组，一组作为实验组，一组作为对照组；实验组接种经患者血清预处理后的肿瘤，对照组接种用生理盐水处理后的肿瘤，接种过程均在经紫外消毒后的超净工作台内进行，接种部位于小鼠皮下左侧近腋窝处，接种前后均需对接种部位创口进消毒处理；六、令小鼠自然生长，每周观察检测两组小鼠的各项指标，8周后对比两组的成瘤情况；七、 8周后将两组小鼠的肿瘤剥离进行传代，仍将新的偶数只同为4
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6周龄的BALB/c
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nu/nu 小鼠分为两组，一组作为传代实验组，一组作为传代对照组；按照传代实验组接种经患者血清预处理后的肿瘤，传代对照组接种用生理盐水处理后的肿瘤的分组进行，方法同上述步骤四、五；八、令小鼠自然生长，每周观察检测两组小鼠的各项指标，8周后对比传代两组的成瘤情况。
[0008]所述步骤一中，采集没有注入麻药的患者血液标本。
[0009]所述步骤五中，所述的血清预处理是用与肿瘤标本相同来源的患者血清对待接种的肿瘤标本进行37
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恒温孵育5分钟后再移植入小鼠体内。
[0010]所述步骤四中，所述米粒大小优选尺寸为0.2x0.2x0.2cm。
[0011]所述步骤五中，所用的穿刺植入针为25号套管针。
[0012]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术所述的建立食管癌PDX小鼠模型的方法，在成瘤率、成瘤体积、成瘤速度和成瘤质量、成瘤重量方面得到了优化提升；同时在传代过程中，用此方法建立的PDX模型在传代的成瘤率、成瘤体积、成瘤速度和成瘤质量、成瘤重量方面也都得到了不同程度的优化提升，成功率高、能够稳定传代，周期短。
附图说明
[0013]图1是小鼠成瘤体积变化曲线图。
[0014]图2是小鼠体重变化曲线图。
[0015]图3是肿瘤重量比较图。
[0016]图4是小鼠成瘤率比较图。
具体实施方式
[0017]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他
实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0018]根据图1
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4，本专利技术提供一种技术方案：一种建立食管癌PDX小鼠模型的方法，具体步骤如下：（1）标本采集：通过临床食管癌患者病例筛选，于手术室采集食管肿瘤标本和病人血液样本；为避免手术中麻醉药的影响，应在术前采集患者血液标本；（2）标本运输：标本离体后用盐水适当冲洗，接着转入含有细胞培养基RPMI
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1640 /DMEM的50ml离心管中，转入组织培养基的作用是使得组织在体外也能维持一定的营养保持组织活性，并与病人血液样本一同置于冰上运送至动物中心，其中病人血液样本单独用的抗凝管放置，血液离体后也是放在冰上为了防止血液中蛋白成分降解，在冰上运输可以更好的保鲜；（3）血液标本预处理：将病人血液标本进行离心，在经紫外消毒后的超净工作台内用移液枪吸取血清至多个EP管内，每个EP管内放置1ml，并将放置标本的EP管放置冰上，供移植时所用，剩余的冻存于负80度冰箱供传代时所用；（4）肿瘤标本预处理：在经紫外消毒后的超净工作台内剔除肿瘤的部分坏死组织，经生理盐水冲洗后将肿瘤切成米粒大小，将待接种的肿瘤分为两组放入含有生理盐水的100mm培养皿中加盖置于冰上；（5）小鼠接种：选取10只4
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6周龄的BALB/c
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种建立食管癌PDX小鼠模型的方法，其特征在于：具体步骤如下：一、标本采集：通过临床食管癌患者病例筛选，于手术室采集食管肿瘤标本和病人血液样本；二、标本运输：标本离体后用盐水适当冲洗，接着转入含有细胞培养基RPMI
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1640 /DMEM的50ml离心管中，并与病人血液样本一同置于冰上运送至动物中心；三、血液标本预处理：将病人血液标本进行离心，在经紫外消毒后的超净工作台内用移液枪吸取血清至多个EP管内，每个EP管内放置1ml，并将放置标本的EP管放置冰上，供移植时所用，剩余的冻存于负80度冰箱供传代时所用；四、肿瘤标本预处理：在经紫外消毒后的超净工作台内剔除肿瘤的部分坏死组织，经生理盐水冲洗后将肿瘤切成米粒大小，将待接种的肿瘤分为两组放入含有生理盐水的100mm培养皿中加盖置于冰上；五、小鼠接种：选取偶数只4
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6周龄的BALB/c
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nu/nu 小鼠，均分为2组，一组作为实验组，一组作为对照组；实验组接种经患者血清预处理后的肿瘤，对照组接种用生理盐水处理后的肿瘤，接种过程均在经紫外消毒后的超净工作台内进行，接种部位于小鼠皮下左侧近腋窝处，接种前后均需对接种部位创口进消毒处理；...

【专利技术属性】
技术研发人员：高社干，郭艺博，孙蔚，刘怡文，孔金玉，米优嘉，张顶彧，张宁，梁梦夏，原翔，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：