柴达木双层环伞菌胞内酚酸在制备抗缺氧药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了柴达木双层环伞菌(Agaricus bitorquis)ZJU

【技术实现步骤摘要】
柴达木双层环伞菌胞内酚酸在制备抗缺氧药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及柴达木双层环伞菌(Agaricusbitorquis)ZJU
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CDMA
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12胞内酚酸在制备抗缺氧药物或功能食品中的应用。

技术介绍

[0002]酚酸是一种常见的生物活性物质，研究发现酚酸具有抗增殖、抗氧化、降血脂、抗炎等多种生理功能。食用菌是多种生物活性化合物的重要来源，它们产生的一些次级代谢物(比如酚酸、多糖、三萜类物质等)使其具有抗氧化、抗增殖、抗菌、抗炎、抗致突变和保护心脏等多种生物活性。
[0003]柴达木双层环伞菌(Agaricus bitorquis(Qu
é
l.)Sacc.Qaidam)，是柴达木盆地特有的野生大型真菌，因其营养丰富，被作为一种传统的食用菌和药用菌在当地广泛食用。目前许多研究证明，药用蘑菇提取物(比如灵芝、樟脑香菇、印度竹荪等)富含多种生物活性物质，比如研究发现从灵芝中提取的灵芝酸具有抑制高转移性肺癌细胞株增殖的作用。也有研究报道食用蘑菇(如双孢蘑菇、Flammulina velutipes、Lentinula edodes和巴西香菇) 的总酚类物质在体外具有抗氧化和抗菌活性，其中巴西香菇提取物具有更强的抗氧化活性。而杏鲍菇子实体的乙醇提取物可以下调脂多糖刺激的 RAW264.7巨噬细胞中的一氧化氮、前列腺素E2、诱导型一氧化氮合酶和环氧合酶
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2的表达，从而具有抗炎作用。
[0004]缺氧是指输送到身体组织中有效氧的减少。在缺氧状态下，导致氧供给和/或氧利用障碍，可能导致一些应激反应，比如呼吸速率加快、心跳加快、血压升高，从而为身体组织输送更多的氧气。外界环境中氧气缺乏、因为疾病导致外界氧气不能充分到达机体内、机体活动所需要的耗氧量超过了生理动员能力等都会引起缺氧，而因为缺氧引起的机体功能损害与很多疾病比如急性高原病、心血管疾病、中风、神经性疾病甚至死亡密切相关。长期暴露于缺氧环境会导致缺陷血管形成，限制氧气的有效利用率，并诱导神经系统疾病。长期慢性缺氧是威胁人体健康的一个危险因素，通过从天然产物中筛选具有抗缺氧活性的提取物或单体化合物来研发抗缺氧药物食品和保健品具有重大意义。
[0005]申请号为201811579408.3的专利文献公开了从柴达木双层环伞菌 ZJU
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12中分离出的多糖具有抗疲劳和抗缺氧活性，并且在其次生代谢产物中也检测到丰富的酚酸物质，提示柴达木双层环伞菌 ZJU
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12可能是一种富含天然抗缺氧成分的资源。我们前期研究了柴达木双层环伞菌ZJU
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12的胞内多糖的结构和抗缺氧活性及其相关机制，但是对柴达木双层环伞菌ZJU
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12胞内酚酸的结构和生物活性的研究还很少，其生物活性尚未得到充分发掘。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于挖掘柴达木双层环伞菌ZJU
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12胞内酚酸提取物在抗缺氧活性方面的功能，促进该特殊蘑菇的应用及提高其商业价值。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]柴达木双层环伞菌(Agaricus bitorquis)ZJU
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12胞内酚酸在制备抗缺氧药物或保健品中的应用，所述柴达木双层环伞菌(Agaricusbitorquis)ZJU
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12的保藏号为CCTCC NO:M 2018250。
[0009]本专利技术研究表明，从柴达木双层环伞菌(Agaricusbitorquis)ZJU
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12菌丝体中分离得到的酚酸提取物对缺氧损伤的肺动脉平滑肌细胞具有保护作用，显著降低缺氧损伤PC12细胞的凋亡率，表现出抗缺氧活性。
[0010]所述抗缺氧药物或保健品为预防或缓解缺氧损伤的药物或保健品。进一步地，所述抗缺氧药物为治疗肺缺氧性损伤疾病的药物。所述酚酸提取物也可用于调理低氧损伤的身体修复功能因子。
[0011]所述胞内酚酸分离自柴达木双层环伞菌(Agaricusbitorquis)ZJU
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12菌丝体。
[0012]进一步地，所述酚酸的制备方法包括：
[0013](1)将活化的柴达木双层环伞菌(Agaricus bitorquis)ZJU
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12接种于液体种子培养基中，16
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28℃避光培养，得到种子液；
[0014](2)将种子液接入液体发酵培养基中，16
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28℃避光振荡培养，培养结束后，收集固形菌丝体，清洗后冻干，得到冻干菌丝体；其中液体发酵培养基含有如下组分：20～25g/L麦芽糖、20～25g/L果糖、5～7.5g/L蛋白胨、 0.14～0.21g/L CaCl2、0.6～0.9g/L 7H2O
·
MgSO4、1.0g/L复合B族维生素，余量为水，pH值为5
±
0.5；
[0015](3)将冻干菌丝体研磨成粉末，加入乙醇水溶液进行醇提，收集上清液，经减压浓缩、醇沉后取上清液，再减压浓缩得到胞内酚酸。
[0016]步骤(1)中，菌株的活化包括：将柴达木双层环伞菌ZJU
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CDMA
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12斜面菌种接种于PDA斜面试管中，于20℃避光培养20天，得到活化后的斜面菌种。
[0017]进一步地，种子液的培养条件为活化后的斜面菌种挖块(长
×
宽： 2.5cm
×
1.5cm)接种于液体种子培养基中，23℃下避光恒温振荡培养14天，转速120rpm。
[0018]液体种子培养基含有如下质量百分比的组分：200g/L土豆提取物、 20g/L葡萄糖、5g/L蛋白胨、0.05g/L CaCl2，pH5.0。
[0019]步骤(2)中，发酵培养条件为接种量为10％，23℃下避光恒温振荡培养 12天，转速120rpm。
[0020]液体发酵培养基含有如下质量百分比的组分：20g/L麦芽糖、20g/L 果糖、5g/L蛋白胨、0.14g/L CaCl2、0.6g/L 7H2O
·
MgSO4、1.0g/L复合B 族维生素，余量为水，pH值＝5；该发酵培养基有利于酚酸物质的产生。
[0021]步骤(3)中，利用醇提法对菌丝体中的酚酸物质进行提取。所述乙醇水溶液为体积百分比70％的乙醇水溶液，液料比为60～65mL:1g。
[0022]进一步地，醇提的条件为45～48℃条件下超声提取2
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4h。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.柴达木双层环伞菌(Agaricus bitorquis)ZJU
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12胞内酚酸在制备抗缺氧药物或保健品中的应用，其特征在于，所述柴达木双层环伞菌(Agaricus bitorquis)ZJU
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12的保藏号为CCTCC NO:M 2018250。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗缺氧药物为治疗肺缺氧性损伤疾病的药物。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胞内酚酸分离自柴达木双层环伞菌(Agaricus bitorquis)ZJU
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12菌丝体。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述胞内酚酸包括：arabelline、表儿茶素没食子酸酯、2'
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O
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羟基苯甲酰基
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6'
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O
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反
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卡非麦苷、云南酸D、4'
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O
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甲基倍儿茶素
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(4
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>8)
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4'
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O
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没食子酸甲酯。5.如权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述胞内酚酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈启和，芦红云，焦迎春，魏天予，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：