缺血修饰白蛋白组合测定试剂及其使用方法技术

一种缺血修饰白蛋白组合测定试剂及其使用方法，该组合测定试剂采用如下原料和工艺制得。氯化钴试剂，其成分是：０．００１～１％的氯化钴，９９～９９．９９９％的盐酸三乙醇胺缓冲液。二硫苏糖醇试剂，其成分是：０．０１～２％的二硫苏糖醇，９８～９９．９９％的水。该组合测定试剂的使用方法是为下述步骤：１）仪器准备；２）试剂准备；３）测定进行：准确吸取蒸馏水、血清标本及标准品各５～５０μｌ，与２０～４００μｌ试剂１共聚。然后在设定范围波长下比色，读取光密度Ａ１，加入２０～４００μｌ试剂２反应，再比色，读取光密度Ａ２，依据读得数据计算测定结果。本产品需求大，高经济效益完全可期。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学领域一种用于缺血修饰白蛋白的测定试剂及其使用方法。
技术介绍
缺血修饰白蛋白(Ischemia-modified albumin，简称IMA)是指在临床缺血或再灌注医疗手段发生时，由于自由基等破坏了血清白蛋白的氨基酸序列而导致白蛋白与过渡金属的结合能力改变，这种因缺血而发生与过渡金属结合能力改变的白蛋白称为缺血修饰白蛋白。人血清白蛋白(Human serum albumin简称HSA)是一种循环蛋白，由585个氨基酸序列(66500Da)组成，其氨基末端(N-terminus)是人类所特有的一段序列。已有研究证实HSA的氨基末端即为过渡金属钴、铜和镍等离子的结合位点。HSA上这些金属的结合点、位点与其他动物的白蛋白相比容易被生物化学因素降解而破坏。当发生缺血时，细胞内及细胞外氧供给减少、酸性代谢产物增多、细胞膜能量依赖的钠泵破坏、钙泵失控，这些因素将导致HSA氨基末端结构改变，使HSA与金属的结合能力降低。短暂缺血后发生的再灌注会产生大量的自由基，同时游离铜离子和铁离子暴露，将进一步加重HSA这种改变，这是机体“牺牲”白蛋白以对抗缺氧、避免和尽量减少组织损伤的一种机制。现有技术主要通过测定白蛋白结合钴后，剩余钴的浓度的吸光度的变化，间接计算IMA的浓度，目前尚未确立一个公认的标准品，因此各生产厂家可有不同的方法来间接测定IMA。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，针对现有技术存在的缺陷，提出一种用于缺血修饰白蛋白的由两种以上的试剂组成的组合测定试剂及其使用方法，使用这种试剂测试效果好，成本低廉，使用这种方法测定缺血修饰白蛋白准确度、精确度高。本专利技术的技术解决方案是，所述缺血修饰白蛋白组合测定试剂，包括氯化钴试剂和二硫苏糖醇试剂，该组合测定试剂采用如下原料和工艺制得。试剂1、氯化钴试剂，其成分是 氯化钴 0.001～1％，盐酸三乙醇胺缓冲液(PH值8.0) 99～99.999％。将上述重量成分的氯化钴溶于上述重量成分的盐酸三乙醇胺缓冲液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白氯化钴试剂。试剂2、二硫苏糖醇试剂，其成分是二硫苏糖醇(DTT) 0.01～2％，水 98～99.99％。将上述重量成分的二硫苏糖醇溶于上述重量成分的水液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白二硫苏糖醇(DTT)试剂。上述由试剂1和试剂2组成的缺血修饰白蛋白组合测定试剂的使用方法是为下述步骤1)仪器准备取生化分析仪或分光光度计一台，波长取值范围是340～700nm，温度37℃，±0.5℃。2)试剂准备取上述试剂1和试剂2，分置。3)测定进行准确吸取蒸馏水、血清标本及标准品各5～50μl，与20～400μl试剂1共聚反应5分钟。然后在上述波长范围之波长下比色，读取光密度A1，加入20～400μl试剂2反应5分钟，然后再在上述波长范围之波长下比色，读取光密度A2，依据读得数据按下述计算式计算测定结果 上述标准品定义为1)、每毫升血清结合1μg的二价钴离子为1个单位。2)、标准品配制精确测定Co2+浓度，然后测定标准品的吸光度变化计算每毫升标准品中白蛋白消耗Co2+的μg数，从而获得标准品的值。上述血清标本应无沉淀、无纤维蛋白凝块及血细胞及溶血。其来源是静脉采血，将所采之血液标本盛于普通试管内，不使用任何抗凝剂、防腐剂及分离胶，待血液自然凝固后分离血清。上述缺血修饰白蛋白组合测定试剂的设计与使用方法依据下述原理 1)标准品定义每毫升血清结合1μg的二价钴离子为1个单位。标准品配制；2)精确测定Co2+浓度，然后测定标准品的吸光度变化计算每毫升标准品中白蛋白消耗Co2+的μg数，从而获得标准品的值。缺血修饰白蛋白对Co2+结合能力低于正常白蛋白，血清中白蛋白与Co2+结合后，剩余的游离Co2+与有机显色物反应生成红褐色产物，在470～510nm的波长下比色，其吸光度与Co2+浓度成正比，与标准品进行比较，即可计算出样本中ACB(白蛋白钴结合能力)的浓度。本专利技术必须符合产品技术标准(注册产品标准号YZB/湘0010-2006)，达到下列技术指标线形范围0～180U/ml批内精密度CV≤4.5％批间精密度CV≤5.0％空白吸光度≥1.0A准确度预期值±10％产品检验方法依据注册产品标准号YZB/湘0010-2006所示内容检验。本专利技术的有益效果是1.社会效益缺血修饰白蛋白的测定是临床生化中一个重要指标。缺血修饰白蛋白组合测定试剂预期用途为对急性心肌缺血的辅助诊断，排除急性冠脉综合症(ACS)以及ACS危险性分层。2.经济效益随着医疗诊断技术水平的提高和临床需要，产品需求大量增加。一个较高的经济效益是完全可以预期的。具体实施例方式实施例1本专利技术的一种实施例产品，包括氯化钴试剂和二硫苏糖醇试剂，该组合测定试剂采用以下原料和工艺制得试剂1氯化钴试剂，其成分是氯化钴 1kg盐酸三乙醇胺缓冲液(PH值8.0)99kg将上述重量成分的氯化钴溶于上述重量成分的盐酸三乙醇胺缓冲液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白氯化钴试剂。试剂2二硫苏糖醇试剂，其成分是二硫苏糖醇(DTT) 2kg，水98kg。将上述重量成分的二硫苏糖醇溶于上述重量成分的水液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白DTT试剂。该缺血修饰白蛋白组合测定试剂使用时可按下述步骤实施1)、仪器准备取生化分析仪一台，波长500nm，温度37℃。2)、试剂准备取上述试剂1和试剂2，分置。3)、测定进行准确吸取蒸馏水、血清标本及标准品各10μl，与200μl试剂1共聚反应5分钟。然后在上述波长范围之波长下比色，读取光密度A1，加入100μl试剂2反应5分钟，然后再在上述波长范围之波长下比色，读取光密度A2，依据读得数据按下述计算式计算测定结果 上述血液标本采集应是静脉采血，血盛于普通试管内。血清标本应无沉淀、无纤维蛋白凝块、血细胞及溶血。不能使用任何抗凝剂、防腐剂及分离胶，待血液自然凝固后分离血清。2～6h内测定完毕，如果不能及时测定，标本需-20℃温度下存放保存。上述标准品定义是每毫升白蛋白结合1μg的二价钴离子为1个单位。标准品配制为精确测定Co2+浓度，然后测定标准品的吸光度变化计算每毫升标准品中白蛋白消耗Co2+的μg数，从而获得标准品的值。实施例2本专利技术的另一种实施例产品，包括氯化钴试剂和二硫苏糖醇试剂，该组合测定试剂采用以下原料和工艺制得试剂1氯化钴试剂，其成分是氯化钴 1g，盐酸三乙醇胺缓冲液(PH值8.0) 99999g。将上述重量成分的氯化钴溶于上述重量成分的盐酸三乙醇胺缓冲液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白氯化钴试剂。试剂2二硫苏糖醇试剂，其成分是二硫苏糖醇(DTT)1g，水 9999g。将上述重量成分的二硫苏糖醇溶于上述重量成分的水液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白DTT试剂。该缺血修饰白蛋白组合测定试剂使用时可按下述步骤实施1)仪器准备取分光光度计一台，波长600nm，温度37℃。2)试剂准备取上述试剂1和试剂2，分置。3)测定进行准确吸取蒸馏水、血清标本及标准品各35μl，与240μl试剂1共聚反应5分钟。然后在上述波长范围之波长下比色，读取光密度A1，加入120μl试剂2反应5分钟，然后再在上述波长范围之本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种缺血修饰白蛋白组合测定试剂，包括氯化钴试剂和二硫苏糖醇试剂，该组合测定试剂采用如下原料和工艺制得，试剂１、氯化钴试剂，其成分是：氯化钴０．００１～１％，盐酸三乙醇胺缓冲液９９～９９．９９９％，将上 述重量成分的氯化钴溶于上述重量成分的盐酸三乙醇胺缓冲液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白氯化钴试剂，试剂２、二硫苏糖醇试剂，其成分是：二硫苏糖醇０．０１～２％，水９８～９９．９９％，将上述重量成 分的二硫苏糖醇溶于上述重量成分的水液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白二硫苏糖醇试剂。

【技术特征摘要】
1.一种缺血修饰白蛋白组合测定试剂，包括氯化钴试剂和二硫苏糖醇试剂，该组合测定试剂采用如下原料和工艺制得，试剂1、氯化钴试剂，其成分是氯化钴 0.001～1％，盐酸三乙醇胺缓冲液 99～99.999％，将上述重量成分的氯化钴溶于上述重量成分的盐酸三乙醇胺缓冲液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白氯化钴试剂，试剂2、二硫苏糖醇试剂，其成分是二硫苏糖醇0.01～2％，水98～99.99％，将上述重量成分的二硫苏糖醇溶于上述重量成分的水液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白二硫苏糖醇试剂。2.一种权利要求1所述的缺血修饰白蛋白组合测定试剂的使用方法，该方法为下述步骤1)仪器准备取生化...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋洪敏，吴白平，卿子驹，张卫华，邓君虎，
申请(专利权)人：长沙颐康科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：43[中国|湖南]