一种丹酚酸A相关物质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种用高效液相色谱法检测丹酚酸A有关物质的方法，对流动相进行了优化选择，采用梯度洗脱方法检测相关物质，操作简单、专属性强、分离度好，有利于对丹酚酸A产品的质量控制和安全应用。

【技术实现步骤摘要】
一种丹酚酸A相关物质的检测方法
本专利技术涉及药物检测分析领域，具体一种高效液相色谱法测定丹酚酸A相关物质的方法。
技术介绍
丹酚酸A(SalvianicacidA)是由唇形科植物丹参药材中提取得到的丹酚酸B转化而来。经过大孔树脂、正相硅胶纯化后得到高纯度丹酚酸A。丹酚酸A为淡黄色粉末，易溶于水、乙醇、甲醇、乙腈、叔丁基甲基醚、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜；在环己烷中几乎不溶，对光和热不稳定，其结构式如下：在制备药物过程中，杂质与有效成分的分离技术对于保证药品质量尤为重要。杂质的结构、理化性质和毒性情况复杂，因此有关物质的检测和检查研究是药品研发中的重点和难点。为了保证药品的质量和临床的安全用药，必须严格检测和控制药品中的杂质。在现有技术中，关于丹酚酸A含量测定的方法在很多专利和公开文献都有记载，使用高效液相色谱测定的方法使用的流动相有乙腈、甲酸、乙腈-水、甲酸-水等或者其组合，一般采用梯度洗脱控制流动相中酸性物质比例的变化，保持丹酚酸A在检测分析过程中保持稳定，并且能保证丹酚酸A的纯度，可以确定测定方法的准确度。专利CN109633009A公开了一种丹参及其提取物含有丹酚酸A的质量控制方法，流动相为乙腈、甲酸、甲醇、乙腈-水或甲酸-水中的二者组合，在0-45分钟内梯度脱，流动相A在10％-60％范围内变化，流动相B在40％-90％范围内变化。通过控制流动相在一定范围内的变化，进行梯度洗脱，可以让丹酚酸A与其他杂质达到分离的效果，可以进行质量控制和鉴定。现有技术公开的技术方案，对丹酚酸A的各有关物质分离度差，分离时间较长，方法专属性不强。因此本专利技术致力于提供一种能够使各有关物质分离度好，方法专属性强，有利于产品质量控制的分析检测方法。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种专属性强、分离度好、分离时间短的丹酚酸A有关物质分析检测方法，为丹酚酸A的质量控制提供保障。本专利技术提供一种高效液相色谱分析丹酚酸A相关物质的方法，色谱柱为C18色谱柱，流动相包括流动相A、流动相B以及流动相C，所述的流动相A为甲醇溶液，流动相B为乙腈溶液，流动相C为0.1％磷酸溶液，其特征在于，采用梯度洗脱程序如下：时间(min)0-3535-4040-41A(％)9-141414-9B(％)18-282828-18C(％)73-585858-73表中以所述流动相的总体积为100％计。作为优选，色谱柱选用T3，规格为长度×内径＝4.6×150mm，2.7μm。作为优选，所述流动相流速为0.3～0.7mL/min，更优选为0.5mL/min。作为优选，所述色谱柱的柱温设定为30～40℃，更优选为35℃。作为优选，检测波长为285～289nm，更优选为检测波长为286nm。作为优选，进样量5～20ul，优选10ul。作为优选，色谱柱选用T3色谱柱，规格为长度×内径＝4.6×150mm，2.7μm；流动相包括流动相A、流动相B以及流动相C，所述的流动相A为甲醇溶液，流动相B为乙腈溶液，流动相C为0.1％磷酸溶液，采用梯度洗脱程序如下：时间(min)0354041A(％)914149B(％)18282818C(％)73585873表中以所述流动相的总体积为100％计，所述流动相流速为0.5mL/min，色谱柱的柱温35℃，检测波长286nm。本专利技术适用于检测含丹酚酸A的样品，包括但不限于，丹酚酸A原料药及丹酚酸A制剂成品。本专利技术的有益效果如下：(1)本专利技术采用了甲醇-乙腈-0.1％磷酸三元流动相洗脱梯度，是一种非常高效的洗脱模式，这种方法不仅可以缩短梯度洗脱的分析时间，还能够有效达到调节分离选择性的目的，最终将丹酚酸A与其他性质相近的杂质有效地分离开。(2)本专利技术提供的方法具有专属性高、分析速度快、准确度好，重现性高的特点，便于对丹酚酸A相关产品的质量检测及安全保障。附图说明图1：丹酚酸A有关物质色谱图。具体实施方式为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的的技术方案，下面通过具体实施例对本专利技术作进一步的描述，但这些实施例不会限制本专利技术的保护范围。实施例1：丹酚酸A的制备取丹参药材，粉碎成6目颗粒，每次加7倍量92℃水，温浸提取3次，同时以25转/分速度搅拌，每次温浸提取3小时；提取液减压浓缩至相对密度1.20(60℃)，加入乙醇使含醇量在70％，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味；加水稀释至每1ml含丹酚酸B20mg，水溶液用10％氢氧化钠调pH至4.0，加入0.5％ZnCl2作为催化剂，120℃温度加热转化4小时，转化液用20％磷酸调pH值至2.5，离心，上清液减压浓缩至每1ml含丹酚酸A3mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为1:50，树脂柱径高比为1:10，分别用3倍柱体积水、5倍柱体积25％乙醇洗脱，除去杂质，再用4倍柱体积40％乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的40％乙醇洗脱部分，减压回收乙醇并浓缩至无醇味；水溶液浓缩至每ml含5mg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A上样量与聚酰胺比为1:10，树脂柱径高比为1:8，分别用3倍柱体积水、12倍柱体积40％乙醇溶液洗脱除杂，再用8倍柱体积60％乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的60％乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至每1ml含丹酚酸A15mg水溶液；水溶液用20％磷酸调pH至2.5，用水溶液3倍量的叔丁基甲基醚，分3次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚，制成每1ml含丹酚酸A0.5g的萃取液，加入1～3倍量硅胶，搅拌，挥干；把搅拌样硅胶加到已装好的15倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为1:10，以正戊烷-叔丁基甲基醚为洗脱剂，梯度洗脱，分别用正戊烷∶叔丁基甲基醚(4:6)洗脱10倍柱体积，正戊烷∶叔丁基甲基醚(6:4)洗脱10倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加12倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥温度50℃，回差温度4℃，真空度-0.07Mpa以上，微波功率60KW)130分钟，得丹酚酸A，测得含量为94.57％。实施例2：高效液相色谱检测丹酚酸A有关物质含量1.溶液的配制稀释剂溶液：30％乙腈(含0.1％磷酸)水溶液，作为稀释剂；对照溶液：精密量取丹酚酸A对照品适量，加稀释剂溶解并稀释至每ml含0.7μg的溶液，作为对照溶液；供本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种丹酚酸A有关物质高效液相色谱检测方法，色谱柱为C18色谱柱，流动相包括流动相A、流动相B以及流动相C，所述的流动相A为甲醇溶液，流动相B为乙腈溶液，流动相C为0.1％磷酸溶液，采用梯度洗脱程序如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种丹酚酸A有关物质高效液相色谱检测方法，色谱柱为C18色谱柱，流动相包括流动相A、流动相B以及流动相C，所述的流动相A为甲醇溶液，流动相B为乙腈溶液，流动相C为0.1％磷酸溶液，采用梯度洗脱程序如下：










时间(min)
0-35
35-40
40-41


A(％)
9-14
14
14-9


B(％)
18-28
28
28-18


C(％)
73-58
58
58-73






表中以所述流动相的总体积为100％计。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱柱为T3，规格为长度×内径＝4.6×150mm，2.7μm。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述流动相流速为0.3～0.7mL/min。


4.根据权利要求3所述的方法，选择流动相的流速为0.5mL/min。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于色谱柱的柱温设定为30～4...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘艳红，王振，邓双炳，周舟，古丽萍，王章伟，钟仁清，余水平，
申请(专利权)人：江西青峰药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36