一种免疫细胞培养方法技术

本发明专利技术公开了一种免疫细胞培养方法，包括如下步骤：S1：准备工作，S2：样品稀释，S3：梯度离心，S4：收集白膜层，S5：清洗，S6：清洗，S7：接种，S8：加滋养细胞，S9：起始培养，S10：观察记录，S11：冻存。此免疫细胞培养方法避免了以往人工手动操作对细胞培养液吹打费时费力且吹打效果差的情况，提高了吹打效率，通过设置了第一离心机构和第二离心机构能够实现对细胞培养液的离心处理，装置通过一次性在吹打混合机构外部设置四个第一离心机构和四个第二离心机构，多工位操作，能够一次性进行大量免疫细胞的培养，效率高，便于推广。

【技术实现步骤摘要】
一种免疫细胞培养方法
本专利技术涉及免疫细胞培养
，具体为一种免疫细胞培养方法。
技术介绍
自然杀伤细胞是机体重要的免疫细胞,不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关,而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生,能够识别靶细胞、杀伤介质，免疫细胞在医学上有着重要的作用，因此需要对免疫细胞进行培养。现有免疫细胞培养中需要对培养液体进行人工吹打混合，并在操作过程中需要多次离心处理，处理中人工操作过程复杂，培养成本较高，且现有免疫细胞培养中一次性培养的细胞较少，培养效率较为低下，为此，我们提出一种免疫细胞培养方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种免疫细胞培养方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种免疫细胞培养方法，包括如下步骤：S1：准备工作，培养液及淋巴细胞分离液复温至室温；S2：样品稀释，将分离血浆后的下层红细胞加入等体积生理盐水稀释，通过吹打混合机构充分吹打混匀，转移至50ml离心管中；S3：梯度离心，于每管装有淋巴细胞分离液的50ml离心管中缓缓加入准备好的稀释血液，20℃，800g条件下通过第一离心机构离心20min；S4：收集白膜层，离心后用移液机构的25ml移液管吸取中间白膜层于50ml离心管中，每管加生理盐水至50ml，转速1500rpm通过第二离心机构离心6min；S5：清洗，倾弃上清，用手指适度弹敲离心管底部，直至细胞沉淀松散，加生理盐水重悬，将各离心管中的细胞悬液合并混匀，总体积30ml；S6：清洗，将所需体积的细胞悬液再次离心，转速1500rpm，离心6min，倾弃剩余上清，手指适度弹敲离心管底部，直至细胞沉淀松散；S7：接种，用15ml完全培养基重悬，接种至培养瓶中；S8：加滋养细胞，复苏滋养细胞，加生理盐水至40ml重悬，取样计细胞活率，转速1500rpm离心5min，用15ml完全培养基重悬加入步骤七所述培养瓶中；S9：起始培养，加入1.5ml浓度5％的自体血浆、30mlNK完全培养基、1.5ml自体血浆、滋养细胞，设置温度37℃在CO2培养箱中开始培养；S10：观察记录，肉眼及显微镜观察并进行相关数据检测和记录。S11：冻存；所述步骤S2中的吹打混合机构的底部设置有底板，且吹打混合机构固定安装在底板的顶部中心，所述吹打混合机构包括处理箱、箱盖、进料口、空心管、缓冲板和吹打管，所述底板的顶部中心固定安装有固定架，且底板顶部位于固定架内部固定安装有处理箱，所述处理箱的顶部安装有箱盖，且箱盖顶部的一端设置有进料口，所述箱盖的顶部中心固定安装有空心管，且空心管的端部伸入处理箱内部，所述空心管位于处理箱内部的一端固定连接有缓冲板，且缓冲板整体成圆形结构，所述缓冲板内设置有空腔，所述空心管与缓冲板内部连通，所述缓冲板的底部等距固定连接有吹打管，且吹打管均与缓冲板内部连通，所述吹打管的端部成锥形结构，且吹打管的外侧安装有单向气阀；所述步骤S3中的第一离心机构和步骤四中的第二离心机构均固定安装在底板顶部，所述第一离心机构位于吹打混合机构和第二离心机构之间，所述步骤四中的移液机构固定安装在底板顶部，且移液机构位于第一离心机构和第二离心机构之间。优选的，所述空心管位于箱盖外部的一端固定连接有固定盒，且固定盒的整体成圆板形结构，所述空心管与固定盒内部连通，所述固定盒侧壁固定连接有安装盒，且安装盒外侧等距开设有三个弧形槽，所述安装盒内部通过弧形槽与外部连通，所述固定盒远离固定盒的一侧内部固定连接有支撑弹簧，且支撑弹簧的端部固定连接有封堵板，所述封堵板配合滑动连接在安装盒内部，所述固定盒位于安装盒的一侧开设有连通口，且固定盒通过连通口与安装盒内部连通，所述封堵板位于连通口的一侧固定连接有滑动杆，且滑动杆的端部穿过固定盒，所述箱盖的顶部滑动连接有立板，所述滑动杆的端部与立板固定连接，所述滑动杆外侧位于立板和固定盒之间套设有伸缩弹簧。优选的，所述箱盖的顶部开设有水平方向的滑槽，所述立板的底部设置有限位块，且限位块配合滑动连接在滑槽内部，所述立板通过设置在其上的限位块滑动连接在箱盖顶部，所述箱盖顶部位于立板的侧边对称固定连接有固定板，且两个固定板之间的顶端通过转轴转动连接有偏心轮，所述偏心轮与立板接触，所述固定板顶端固定安装有转动电机，且转动电机的输出轴端部穿过固定板与偏心轮固定连接。优选的，所述第一离心机构和第二离心机构均包括固定座、转台、固定槽、放置架和离心管，所述底板顶部位于固定架外部等距固定安装有四个固定座，且固定座内转动连接有转台，所述转台的顶部等距开设有四个固定槽，且四个固定槽内转动连接有放置架，所述放置架内卡接有离心管，所述固定架的顶部固定安装有水泵，且水泵的进液端安装有连接管，且连接管的端部与处理箱的底端连接，所述水泵的出水端固定安装有排料管，且排料管位于离心管的正上方。优选的，所述转台的底部转动连接有外齿圈，所述放置架的底部均转动连接有传动齿轮，且四个传动齿轮均与外齿圈啮合连接，所述转台底部固定安装有伺服电机，且伺服电机的输出轴端部固定安装有驱动齿轮，所述驱动齿轮与外齿圈啮合连接。优选的，所述封堵板位于固定盒的一侧设置有密封垫，且密封垫与固定盒紧密接触，所述封堵板表面位于滑动杆外侧对称固定有限位杆，且限位杆的端部滑动穿过固定盒与立板固定连接。优选的，所述固定座内壁的底部通过轴承转动连接有传动杆，且传动杆外侧固定安装有从动齿轮，所述传动杆的顶部与转台固定，所述固定座内壁的底部固定安装有驱动电机，且驱动电机的输出轴端部固定安装有主动齿轮，所述主动齿轮与从动齿轮啮合连接。优选的，所述移液机构包括安装架、固定杆、支撑杆、丝杠、滑块、移液电机、电动推杆和移液管，所述底板顶部位于第一离心机构和第二离心机构之间固定安装有安装架，所述安装架的顶端固定连接有固定杆，且固定杆的端部固定连接有支撑杆，所述固定杆的表面设置有长度刻度线，所述固定杆的顶部开设有水平方向的凹槽，且凹槽内转动连接有丝杠，所述丝杠外侧螺纹连接有滑块，且滑块配合滑动连接在固定杆内部，所述固定杆端部固定安装有移液电机，且移液电机的输出轴端部伸入固定杆内部与丝杠固定连接，所述滑块的端部固定安装有电动推杆，且电动推杆的端部固定安装有移液管，所述移液管位于离心管的正上方。优选的，所述放置架内壁的顶端设置有密封圈，所述放置架的顶端与固定槽内壁密封连接，且放置架内部与固定槽内部连通。优选的，所述转台的顶部中心开设有圆柱槽，且圆柱槽内固定安装有加热板，所述转台上的圆柱槽内设置有水箱，且水箱的顶部中心设置有把手，所述水箱的顶部安装有气泵，所述气泵的进气端与外界连通，且气泵的出气端安装有通气管，且通气管的端部伸入水箱内部，所述通气管位于水箱内部的一段成螺旋状设置。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术通过吹打混合机构上的转动电机工作使偏心轮转动，偏心轮转动过程中不断地推动立板在箱盖上滑动，立板向固定和处滑动推动滑动杆滑动，滑动杆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1：准备工作，培养液及淋巴细胞分离液复温至室温；/nS2：样品稀释，将分离血浆后的下层红细胞加入等体积生理盐水稀释，通过吹打混合机构充分吹打混匀，转移至50ml离心管中；/nS3：梯度离心，于每管装有淋巴细胞分离液的50ml离心管中缓缓加入准备好的稀释血液，20℃，800g条件下通过第一离心机构离心20min；/nS4：收集白膜层，离心后用移液机构的25ml移液管吸取中间白膜层于50ml离心管中，每管加生理盐水至50ml，转速1500rpm通过第二离心机构离心6min；/nS5：清洗，倾弃上清，用手指适度弹敲离心管底部，直至细胞沉淀松散，加生理盐水重悬，将各离心管中的细胞悬液合并混匀，总体积30ml；/nS6：清洗，将所需体积的细胞悬液再次离心，转速1500rpm，离心6min，倾弃剩余上清，手指适度弹敲离心管底部，直至细胞沉淀松散；/nS7：接种，用15ml完全培养基重悬，接种至培养瓶中；/nS8：加滋养细胞，复苏滋养细胞，加生理盐水至40ml重悬，取样计细胞活率，转速1500rpm离心5min，用15ml完全培养基重悬加入步骤七所述培养瓶中；/nS9：起始培养，加入1.5ml浓度5％的自体血浆、30mlNK完全培养基、1.5ml自体血浆、滋养细胞，设置温度37℃在CO2培养箱中开始培养；/nS10：观察记录，肉眼及显微镜观察并进行相关数据检测和记录；/nS11：冻存；/n所S2中的吹打混合机构(2)的底部设置有底板(1)，且吹打混合机构(2)固定安装在底板(1)的顶部中心，所述吹打混合机构(2)包括处理箱(6)、箱盖(7)、进料口(8)、空心管(9)、缓冲板(10)和吹打管(11)，所述底板(1)的顶部中心固定安装有固定架(27)，且底板(1)顶部位于固定架(27)内部固定安装有处理箱(6)，所述处理箱(6)的顶部安装有箱盖(7)，且箱盖(7)顶部的一端设置有进料口(8)，所述箱盖(7)的顶部中心固定安装有空心管(9)，且空心管(9)的端部伸入处理箱(6)内部，所述空心管(9)位于处理箱(6)内部的一端固定连接有缓冲板(10)，且缓冲板(10)整体成圆形结构，所述缓冲板(10)内设置有空腔，所述空心管(9)与缓冲板(10)内部连通，所述缓冲板(10)的底部等距固定连接有吹打管(11)，且吹打管(11)均与缓冲板(10)内部连通，所述吹打管(11)的端部成锥形结构，且吹打管(11)的外侧安装有单向气阀；/n所述S3中的第一离心机构(3)和步骤四中的第二离心机构(4)均固定安装在底板(1)顶部，所述第一离心机构(3)位于吹打混合机构(2)和第二离心机构(4)之间，所述步骤四中的移液机构(5)固定安装在底板(1)顶部，且移液机构(5)位于第一离心机构(3)和第二离心机构(4)之间。/n...

【技术特征摘要】
1.一种免疫细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：准备工作，培养液及淋巴细胞分离液复温至室温；
S2：样品稀释，将分离血浆后的下层红细胞加入等体积生理盐水稀释，通过吹打混合机构充分吹打混匀，转移至50ml离心管中；
S3：梯度离心，于每管装有淋巴细胞分离液的50ml离心管中缓缓加入准备好的稀释血液，20℃，800g条件下通过第一离心机构离心20min；
S4：收集白膜层，离心后用移液机构的25ml移液管吸取中间白膜层于50ml离心管中，每管加生理盐水至50ml，转速1500rpm通过第二离心机构离心6min；
S5：清洗，倾弃上清，用手指适度弹敲离心管底部，直至细胞沉淀松散，加生理盐水重悬，将各离心管中的细胞悬液合并混匀，总体积30ml；
S6：清洗，将所需体积的细胞悬液再次离心，转速1500rpm，离心6min，倾弃剩余上清，手指适度弹敲离心管底部，直至细胞沉淀松散；
S7：接种，用15ml完全培养基重悬，接种至培养瓶中；
S8：加滋养细胞，复苏滋养细胞，加生理盐水至40ml重悬，取样计细胞活率，转速1500rpm离心5min，用15ml完全培养基重悬加入步骤七所述培养瓶中；
S9：起始培养，加入1.5ml浓度5％的自体血浆、30mlNK完全培养基、1.5ml自体血浆、滋养细胞，设置温度37℃在CO2培养箱中开始培养；
S10：观察记录，肉眼及显微镜观察并进行相关数据检测和记录；
S11：冻存；
所S2中的吹打混合机构(2)的底部设置有底板(1)，且吹打混合机构(2)固定安装在底板(1)的顶部中心，所述吹打混合机构(2)包括处理箱(6)、箱盖(7)、进料口(8)、空心管(9)、缓冲板(10)和吹打管(11)，所述底板(1)的顶部中心固定安装有固定架(27)，且底板(1)顶部位于固定架(27)内部固定安装有处理箱(6)，所述处理箱(6)的顶部安装有箱盖(7)，且箱盖(7)顶部的一端设置有进料口(8)，所述箱盖(7)的顶部中心固定安装有空心管(9)，且空心管(9)的端部伸入处理箱(6)内部，所述空心管(9)位于处理箱(6)内部的一端固定连接有缓冲板(10)，且缓冲板(10)整体成圆形结构，所述缓冲板(10)内设置有空腔，所述空心管(9)与缓冲板(10)内部连通，所述缓冲板(10)的底部等距固定连接有吹打管(11)，且吹打管(11)均与缓冲板(10)内部连通，所述吹打管(11)的端部成锥形结构，且吹打管(11)的外侧安装有单向气阀；
所述S3中的第一离心机构(3)和步骤四中的第二离心机构(4)均固定安装在底板(1)顶部，所述第一离心机构(3)位于吹打混合机构(2)和第二离心机构(4)之间，所述步骤四中的移液机构(5)固定安装在底板(1)顶部，且移液机构(5)位于第一离心机构(3)和第二离心机构(4)之间。


2.根据权利要求1所述的一种免疫细胞培养方法，其特征在于：所述空心管(9)位于箱盖(7)外部的一端固定连接有固定盒(13)，且固定盒(13)的整体成圆板形结构，所述空心管(9)与固定盒(13)内部连通，所述固定盒(13)侧壁固定连接有安装盒(18)，且安装盒(18)外侧等距开设有三个弧形槽(19)，所述安装盒(18)内部通过弧形槽(19)与外部连通，所述固定盒(13)远离固定盒(13)的一侧内部固定连接有支撑弹簧(20)，且支撑弹簧(20)的端部固定连接有封堵板(17)，所述封堵板(17)配合滑动连接在安装盒(18)内部，所述固定盒(13)位于安装盒(18)的一侧开设有连通口(16)，且固定盒(13)通过连通口(16)与安装盒(18)内部连通，所述封堵板(17)位于连通口(16)的一侧固定连接有滑动杆(15)，且滑动杆(15)的端部穿过固定盒(13)，所述箱盖(7)的顶部滑动连接有立板(14)，所述滑动杆(15)的端部与立板(14)固定连接，所述滑动杆(15)外侧位于立板(14)和固定盒(13)之间套设有伸缩弹簧(22)。


3.根据权利要求2所述的一种免疫细胞培养方法，其特征在于：所述箱盖(7)的顶部开设有水平方向的滑槽(12)，所述立板(14)的底部设置有限位块，且限位块配合滑动连接在滑槽(12)内部，所述立板(14)通过设置在其上的限位块滑动连接在箱盖(7)顶部，所述箱盖(...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅建勋，欧阳建华，汪凯，何伟贤，付引梅，谭慕华，梁键全，
申请(专利权)人：广东美赛尔细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44