一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠及其制备方法及其用途技术

本发明专利技术公开了一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠及其制备方法及其用途，磷脂微珠的配方按照质量份数包括：32‑36份琼脂，20‑24份明胶，26‑30份磷脂酰胆碱，28‑32份磁粉，6‑10份聚乙二醇单甲醚；制备方法，包括：配置琼脂‑明胶混合溶液；在乙醇中加入磷脂酰胆碱、聚乙二醇单甲醚表面活性剂搅拌混合；将琼脂‑明胶混合溶液加入有机溶剂后与表面活性剂混合后再加入磁粉，搅拌、加冰水，得到磷脂微珠；本发明专利技术的磷脂微珠对核酸的吸附力均匀，且吸附能力强，增加了核酸与核酸之间、核酸与细胞因子之间的接触机会，可应用于基于人工抗原呈递细胞的T细胞扩增，能够增加扩增量和质量。

【技术实现步骤摘要】
一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠及其制备方法及其用途
本专利技术涉及生物材料领域，特别是一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠及其制备方法及其用途。
技术介绍
在正常的免疫反应中，抗原特异性T细胞需要至少两个信号的刺激才能进行增殖并对抗原产生免疫应答。第一信号来自TCR识别MHC/抗原肽复合物，传递抗原特异性识别信号；第二信号由抗原呈递细胞(APC)的共刺激分子提供，为非特异性协同刺激信号。在和APC识别结合的过程中，多种跨膜分子聚集在富含神经鞘磷脂和胆固醇的“筏”状结构上，并相互靠拢成簇，形成细胞间相互结合的部位，这种结构成为免疫突触。免疫突触的形成有助于增强TCR与抗原肽-MHC复合物相互作用的亲和力和促进T细胞信号转导分子的相互作用，其数量和分布直接决定了T细胞活化的程度。抗原呈递细胞(APC)是指能够摄取、加工处理抗原，并将处理过的抗原呈递给T细胞的一类免疫细胞。树突细胞(DC)是迄今为止发现的人体内最强的专职性APC，已被广泛应用于过继性免疫细胞治疗领域。然而，DC在体外培养条件下，其分化状态难以控制，并且患者自体来源的DC难以规模化获取。在当今研发异体通用型细胞治疗产品的大趋势背景下，DC的应用受到巨大限制。人工抗原呈递细胞(aAPC)能模拟DC体外诱导抗原特异性T淋巴细胞活化、增值，引起T淋巴细胞对抗原相关靶细胞的杀伤效应。现有技术以磁珠同时负载人工合成的目标抗原肽以及细胞因子，作为诱导T细胞的活化、增值的双信号分子，可替代APC发挥T细胞激活功能，是一种极具前景的T细胞规模化扩增培养解决方案。市场需要一种更高效激活T细胞，并且易规模化生产的aAPC，本专利技术解决这样的问题。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠及其制备方法及其用途，本专利技术的磷脂微珠能增加磁珠与抗原肽-MHC复合物的结合效率，对抗原肽-MHC复合物的吸附力均匀，且吸附能力强，增加了T细胞表面信号转导分子的相互作用，提高T细胞扩增数量和质量。为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠，配方按照质量份数包括：32-36份琼脂，20-24份明胶，26-30份磷脂酰胆碱，28-32份磁粉，6-10份聚乙二醇单甲醚。前述的一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠，配方按照质量份数包括：34份琼脂，22份明胶，28份磷脂酰胆碱，30份磁粉，8份聚乙二醇单甲醚。前述的一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠，磷脂微珠的粒径≤2μm。一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠的制备方法，包括如下步骤：按照配方准备材料，配方按照质量份数包括：32-36份琼脂，20-24份明胶，26-30份磷脂酰胆碱，28-32份磁粉，6-10份聚乙二醇单甲醚；将琼脂溶解在热水中，配成琼脂溶液，再向其中加入明胶，使之溶解；在乙醇中加入磷脂酰胆碱、聚乙二醇单甲醚搅拌混合，得到第一混合液；将琼脂-明胶混合溶液与等体积的有机溶剂混合，搅拌，得到第二混合液；将第一混合液倒入第二混合液，搅拌，得到第三混合液；在第三混合液中加入磁粉，搅拌1分钟后，加入冰水，继续搅拌得到磷脂微珠。前述的一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠的制备方法，有机溶剂包括：乙酸丁酯，氯仿，汽油。前述的一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠的制备方法，将琼脂溶解在60℃的热水中，配成琼脂溶液，再向其中加入明胶，使之溶解。前述的一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠的制备方法，将琼脂-明胶混合溶液与等体积的有机溶剂混合，开动搅拌，转速为200转/分，得到第二混合液。前述的一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠的制备方法，将第一混合液倒入第二混合液，搅拌，转速380转/分，得到第三混合液。前述的一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠的制备方法，在第三混合液中加入磁粉，转速为160转/分，搅拌1分钟后，加入冰水，转速为,320转/分，继续搅拌得到磷脂微珠。一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠的用途，用于基于人工抗原呈递细胞的T细胞扩增，方法包括如下步骤：将磷脂磁珠，抗原肽复合物，CD3抗体，放入洗涤缓冲液中4℃孵育一天，获得负载抗原肽表位的aAPC微珠；将aAPC微珠与分离的单个核细胞共孵育，孵育8天后加入细胞因子，每次换液都加一次细胞因子，培养体系中细胞因子浓度为500U/ml，共孵育4周。本专利技术的有益之处在于：本专利技术的磷脂微珠对抗原肽复合物的吸附能力强，同时增加T细胞表面信号转导分子的相互作用，有利于免疫突触的形成，提高T细胞扩增数量和质量；本专利技术微珠的配方中磷脂酰胆碱和聚乙二醇单甲醚对微珠的吸附能力具有协同增效的作用，二者配合在吸附能力和提高T细胞扩增量和质量上具有很大的进步；本专利技术的微珠的物理参数与硅质膜二氧化硅磁珠相似，可以完全代替其在各个领域的应用，具有优秀的研究前景。附图说明图1是本专利技术实验二中各组T细胞和靶细胞按照不同效靶比共培养后，用CFSE染料标记法检测靶细胞裂解率。具体实施方式以下结合附图和具体实施例对本专利技术作具体的介绍。一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠，配方按照质量份数包括：32-36份琼脂，20-24份明胶，26-30份磷脂酰胆碱，28-32份磁粉，6-10份聚乙二醇单甲醚。作为一种优选，配方按照质量份数包括：34份琼脂，22份明胶，28份磷脂酰胆碱，30份磁粉，8份聚乙二醇单甲醚。一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠的制备方法，包括如下步骤：按照配方准备材料；将琼脂溶解在热水中，作为一种优选，热水为60℃的热水，配成琼脂溶液，再向其中加入明胶，使之溶解；在乙醇中加入磷脂酰胆碱、聚乙二醇单甲醚搅拌混合，作为一种优选，转速为200转/分，得到第一混合液；将琼脂-明胶混合溶液与等体积的有机溶剂混合，搅拌，作为一种优选，转速380转/分，得到第二混合液；作为一种实施例，有机溶剂包括：乙酸丁酯，氯仿，汽油；作为一种优选，选用乙酸乙酯无毒更优。将第一混合液倒入第二混合液，搅拌，作为一种优选，转速380转/分，得到第三混合液；在第三混合液中加入磁粉，作为一种优选，转速为160转/分，搅拌1分钟后，加入冰水，作为一种优选，转速为320转/分，继续搅拌得到磷脂微珠。根据如下配方的实施例和优选转速温度的方法得到样品1-3和对比样品1-2；实施例1：32g琼脂，24g明胶，26g磷脂酰胆碱，28g磁粉，10g聚乙二醇单甲醚；实施例2：36g琼脂，20g明胶，30g磷脂酰胆碱，32g磁粉，6g聚乙二醇单甲醚；实施例3：34g琼脂，22g明胶，28g磷脂酰胆碱，30g磁粉，8g聚乙二醇单甲醚；对比实施例1：34g琼脂，22g明胶，28g磷脂酰胆碱，30g磁粉；对比实施例2：34g琼脂，22g明胶，30g磁粉，8g聚乙二醇单甲醚本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠，其特征在于，配方按照质量份数包括：32-36份琼脂，20-24份明胶，26-30份磷脂酰胆碱，28-32份磁粉，6-10份聚乙二醇单甲醚。/n

【技术特征摘要】
1.一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠，其特征在于，配方按照质量份数包括：32-36份琼脂，20-24份明胶，26-30份磷脂酰胆碱，28-32份磁粉，6-10份聚乙二醇单甲醚。


2.根据权利要求1所述的一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠，其特征在于，配方按照质量份数包括：34份琼脂，22份明胶，28份磷脂酰胆碱，30份磁粉，8份聚乙二醇单甲醚。


3.根据权利要求1所述的一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠，其特征在于，所述磷脂微珠的粒径≤2μm。


4.一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
按照配方准备材料，配方按照质量份数包括：32-36份琼脂，20-24份明胶，26-30份磷脂酰胆碱，28-32份磁粉，6-10份聚乙二醇单甲醚；
将琼脂溶解在热水中，配成琼脂溶液，再向其中加入明胶，使之溶解；
在乙醇中加入磷脂酰胆碱、聚乙二醇单甲醚搅拌混合，得到第一混合液；
将琼脂-明胶混合溶液与等体积的有机溶剂混合，搅拌，得到第二混合液；
将第一混合液倒入第二混合液，搅拌，得到第三混合液；
在第三混合液中加入磁粉，搅拌1分钟后，加入冰水，继续搅拌得到磷脂微珠。


5.根据权利要求4所述的一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠的制备方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文君，黄翔，
申请(专利权)人：浙江康佰裕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33