一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法组成比例

本发明专利技术公开了一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法，取仙鹤草配方颗粒0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入提取溶剂，称定重量，提取20‑40min，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；另取槲皮苷、绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成溶液；十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250 mm，内径为4.6 mm，硅胶粒径为5μm；二极管阵列检测器，检测波长为250‑360nm；柱温：20℃‑40℃；流速：0.8‑1.2mL/min；甲醇‑乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，梯度脱洗；分别精密吸取参照物溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。

【技术实现步骤摘要】
一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法
本专利技术属于中药检测
，具体涉及一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法。
技术介绍
仙鹤草，为蔷薇科植物龙芽草的干燥地上部分。夏、秋二季茎叶茂盛时采割，除去杂质，干燥。本品长50～100cm，全体被白色柔毛。茎下部圆柱形，直径4～6mm，红棕色，上部方柱形，四面略凹陷，绿褐色，有纵沟和棱线，有节；体轻，质硬，易折断，断面中空。单数羽状复叶互生，暗绿包，皱缩卷曲；质脆，易碎；叶片有大小2种，相间生于叶轴上，顶端小叶较大，完整小叶片展平后呈卵形或长椭圆形，先端尖，基部楔形，边缘有锯齿；托叶，抱茎，斜卵形。总状花序细长，花萼下部呈筒状，萼筒上部有钩刺，先端裂，花瓣黄色。气微，味微苦。目前有部分文献对仙鹤草配方颗粒的成分进行含量测定研究，针对特征图谱定性研究文献较少。
技术实现思路
为解决前述问题，本专利技术提供了一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、供试品溶液的制备：取仙鹤草配方颗粒0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入提取溶剂，称定重量，提取20-40min，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(2)、参照物溶液的制备：a.取仙鹤草对照药材1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入提取溶剂，密塞，称定重量，提取20-40min，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；另取槲皮苷、绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成溶液，即得；(3)、色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为250-360nm；柱温：20℃-40℃；流速：0.8-1.2mL/min；流动相：甲醇-乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，梯度脱洗；(4)、测试：分别精密吸取参照物溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。优选的，步骤(1)中，所述供试品提取溶剂为甲醇或50％甲醇或70％甲醇或水或50％乙醇。优选的，步骤(1)中，所述提取方式为回流提取或超声提取。优选的，步骤(1)中，所述提取时间为20min或30min或40min。优选的，步骤(2)中，所述参照物提取溶剂为50％甲醇。优选的，步骤(2)中，取槲皮苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1mL含30μg的溶液，即得。优选的，步骤(3)中，所述色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为324nm，理论板数按槲皮苷峰计算应不低于5000；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；流动相：甲醇-乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：0-5min，流动相A由8％(v/v)升至10％(v/v)；5-20min，流动相A由10％(v/v)升至16％(v/v)；20-25min，流动相A保持16％(v/v)；25-30min，流动相A由16％(v/v)升至23％(v/v)；30-50min，流动相A由23％(v/v)升至30％(v/v)；50-55min，流动相A由30％(v/v)升至32％(v/v)；55-70min，流动相A由32％(v/v)升至55％(v/v)。优选的，所述的特征图谱中应呈现10个特征峰，其中峰1应与相应的参照物峰保留时间相同，其中与绿原酸参照物相应的峰为S1峰，计算峰1-6与S1峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内，各峰规定值为：峰20.882、峰31.000、峰41.099、峰51.444、峰61.483；与槲皮苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰7-10与S2峰的相对保留时间，其相对保留之间规定值在±5％之内，规定值为峰70.972、峰81.000、峰91.023、峰101.457。本技术方案的有益效果如下：(1)本专利技术的HPLC特征图谱检测方法，可以比较全面地反映仙鹤草配方颗粒所含化学成分的种类和数量，能够更加有效地体现出仙鹤草配方颗粒中成分的整体性和综合作用。(2)本专利技术的仙鹤草配方颗粒的HPLC特征图谱检测方法，以相应的仙鹤草对照药材以及化学对照品作为对照，一方面表明了仙鹤草配方颗粒和仙鹤草对照药材之间的化学成分对应关系，且方法简单，稳定性好，精密度高；另一方面仙鹤草配方颗粒可能与其他部分中药配方颗粒性状上相似，无法从其性状上鉴别其是否为仙鹤草，通过此方法，能够有效的对仙鹤草配方颗粒进行鉴别，为仙鹤草配方颗粒的鉴别提供了新方法，防止临床上配方颗粒的混用，保证用药安全。附图说明图1为槲皮苷紫外吸收光谱图；图2为绿原酸紫外吸收光谱图；图3为新绿原酸紫外吸收光谱图；图4为隐绿原酸紫外吸收光谱图；图5为仙鹤草配方颗粒不同波长色谱图；图6为仙鹤草配方颗粒采用不同柱温时的色谱图；图7为仙鹤草配方颗粒采用不同流速时的色谱图；图8为仙鹤草配方颗粒采用不同溶剂时的色谱图；图9为仙鹤草配方颗粒采用不同提取方式时的色谱图；图10为仙鹤草配方颗粒采用不同提取时间时的色谱图；图11为仙鹤草配方颗色谱图的色谱峰指认；图12为仙鹤草配方颗粒采用不同仪器时的色谱图；图13为仙鹤草配方颗粒采用不同色谱柱时的色谱图；图14为3批仙鹤草配方颗粒特征图谱验证图；图15为仙鹤草配方颗粒对照特征图谱；峰1：新绿茶酸；峰3：绿原酸(S1)；峰4：隐绿原酸；峰8：槲皮苷(S2)。具体实施方式1、实验仪器及材料高效液相色谱仪：Waters2695-e2998型高效液相色谱仪、安捷伦1260型高效液相色谱仪、岛津LC-20AT型高效液相色谱仪；电子天平：ME204E/02、MS205DU、XP26(梅特勒-托利多仪器有限公司)；超纯水机：细胞型1810A(上海摩勒科学仪器有限公司)；超声波清洗器：KQ5200DB型(600W，40KHz；昆山市超声仪器有限公司)；色谱柱：AgilentZORBAXEclipseXDB-C185μm4.6×250mm、WatersXBridgeC185μm4.6×250mm、KromasilC185μm4.6×250mm。槲皮苷(中国食品药品检定研究员，批号：111538-201606，含量以90.6％计)，绿原酸(中国食品药品检定研究院，批号：110753-201415，含量以96.2％计)，新绿原酸(成都普菲德生物技术有限公司，批号：17062003，含量以98％计)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）、供试品溶液的制备：取仙鹤草配方颗粒0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入提取溶剂，称定重量，提取20-40min，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；/n（2）、参照物溶液的制备：取仙鹤草对照药材1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入提取溶剂，密塞，称定重量，提取20-40min，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；另取槲皮苷、绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成溶液，即得；/n（3）、色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250 mm， 内径为4.6mm，硅胶粒径为5 μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为250-360nm；柱温：20℃-40℃；流速：0.8-1.2mL/min；流动相：甲醇-乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，梯度脱洗；/n（4）、测试：分别精密吸取参照物溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。/n

【技术特征摘要】
1.一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、供试品溶液的制备：取仙鹤草配方颗粒0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入提取溶剂，称定重量，提取20-40min，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（2）、参照物溶液的制备：取仙鹤草对照药材1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入提取溶剂，密塞，称定重量，提取20-40min，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；另取槲皮苷、绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成溶液，即得；
（3）、色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为250-360nm；柱温：20℃-40℃；流速：0.8-1.2mL/min；流动相：甲醇-乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，梯度脱洗；
（4）、测试：分别精密吸取参照物溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。


2.根据权利要求1所述的一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法，其特征在于：步骤（1）中，所述供试品提取溶剂为甲醇或50%甲醇或70%甲醇或水或50%乙醇。


3.根据权利要求1所述的一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法，其特征在于：步骤（1）中，所述提取方式为回流提取或超声提取。


4.根据权利要求1所述的一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法，其特征在于：步骤（1）中，所述提取时间为20min或30min或40min。


5.根据权利要求1所述的一种仙鹤草配方颗粒特征图谱鉴别方法，其特征在于：步骤（2）中，所述参照物提取溶剂为50%甲醇。


6.根据权利要求1所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：周厚成，胡昌江，费文波，付林，高锐，周维，
申请(专利权)人：四川新绿色药业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51