一种同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法技术

本发明专利技术涉及一种同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法，针对24种抗癫痫药物的种类进行分组，按照不同的梯度洗脱条件，在基本相同的色谱条件下进行色谱分析，实现同时满足人血浆中24种抗癫痫药物的检测，对需要衍生化的药物加入紫外衍生化试剂进行柱前衍生化，使不具有紫外吸收的抗癫痫药物可以被检测出来，分离效率高，选择性更好。

【技术实现步骤摘要】
一种同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法
本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法，其中，24种抗癫痫药物分别为：1.吡拉西坦；2.左乙拉西坦；3.乙琥胺；4.扑米酮；5.拉科酰胺；6.舒噻嗪；7.唑尼沙胺；8.布瓦西坦；9.苯巴比妥；10.奥卡西平；11.利卡西平；12.苯妥英钠；13.氯硝西泮；14.地西泮；15.斯利潘托；16.拉莫三嗪；17.非尔氨酯；18.卢非酰胺；19.赛加宾；20.卡马西平；21.吡仑帕奈；22.氨己烯酸；23.普瑞巴林；24.加巴喷丁。
技术介绍
癫痫(epilepsy)是神经系统的常见疾病，是大脑神经元突发性异常放电，导致短暂的大脑功能障碍的一种慢性疾病，影响着全球约7000万人口。在中国，癫痫已经成为神经科仅次于头痛的第二大常见病，给患者和家属带来极大的痛苦。据文献报道，在抗癫痫药的临床应用中，医生在调整用药方案之前需要在尽可能短的时间内获知其血药浓度，因此，准确、快速是抗癫痫药临床药物监测的基本要求。目前，抗癫痫药的治疗药物监测方法主要有免疫分析法、色谱-光谱分析法。免疫分析法是利用抗癫痫药与其特异性抗体在体外反应的原理测定，因其具有样品量少、操作方便、快捷的特点，在抗癫痫药的治疗药物监测中被广为采用。但该方法必须针对投入市场的每一种抗癫痫药研究出抗体，且待监测抗癫痫药的代谢产物、结构类似物、患者同服其他药物或食物，均可能与抗体产生交叉反应，致使测定的结果往往高于真实的血药浓度，干扰用药方案和用药剂量的调整。基于色谱强大的分离能力和光谱检测的高选择性与灵敏度的色谱-联用技术，是生物样本中抗癫痫药物测定的主要选择。如气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳法(CE)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和液相色谱-质谱联用法(LC-MS)等。因仪器相对便宜、准确度及重现性好，HPLC已成为抗癫痫药临床血药浓度测定的主要选择。目前已投入临床使用的品种多达20余种，医院临床药学工作者每天可能要面对服用不同药物的癫痫病患者，如果每个药物或几个药物均需要建立一个HPLC分析方法，必然给抗癫痫药物的治疗药物监测带来工作上的不便，也可能影响个体化用药和临床医生调整剂量的决策时间，进而影响癫痫病的治疗质量。因此，建立一种能够满足血浆中不同抗癫痫药物测定的HPLC分析系统(无需更换固定相、流动相种类)，以适应临床治疗药物监测中血样分析的高效快速提取、分离、分析要求，已成为临床药学工作者的迫切需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法。本专利技术的技术方案如下：一种同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法，所述24种抗癫痫药物分为以下三组，利用高效液相色谱方法进行检测，具体色谱条件为：色谱柱为EclipsePlusC18柱；以流动相A和流动相B作为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为磷酸二氢钾溶液；第一组15种抗癫痫药物分别为：吡拉西坦；左乙拉西坦；乙琥胺；扑米酮；拉科酰胺；舒噻嗪；唑尼沙胺；布瓦西坦；苯巴比妥；奥卡西平；利卡西平；苯妥英钠；氯硝西泮；地西泮；斯利潘托；经过预处理后的含有上述第一组抗癫痫药物的血桨，按照如下过程进行梯度洗脱：0min，10％A；2min，10％A；3min，28％A；7.5min，28％A；8min，35％A；8.5min，45％A；9.5min，55％A；11min，60％A；11.5min，65％A；20min，65％A。第二组6种抗癫痫药物分别为：拉莫三嗪；非尔氨酯；卢非酰胺；赛加宾；卡马西平；吡仑帕奈；经过预处理后的含有上述第二组抗癫痫药物的血桨，按照如下过程进行梯度洗脱：0min，20％A；2min，20％A；5min，30％A；8min，60％A；10min，60％A；13min，60％A；15min，20％A。第三组3种抗癫痫药物分别为：氨己烯酸；普瑞巴林；加巴喷丁；经过预处理后的含有上述第三组抗癫痫药物的血桨，按照如下过程进行梯度洗脱：0min，20％A；2min，20％A；3min，28％A；7.5min，28％A；8min，35％A；8.5min，45％A；9.5min，55％A；11min，60％A；11.5min，65％A；20min，65％A。采用本专利技术的检测方法，可以同时满足人血浆中24种抗癫痫药物的高效、快速、简便、精准检测，针对不同组药物，按照不同的梯度洗脱条件进行色谱分析，其他色谱条件相同(例如，色谱柱、流动相种类、柱温等)。为了改善色谱分离选择性，本专利技术针对上述提及的24种抗癫痫药物进行高效液相色谱分析时，尝试了很多混合流动相进行梯度洗脱，例如，乙腈-磷酸二氢钾、甲醇-磷酸二氢钾、乙腈-0.1％甲酸水、乙腈-甲酸铵、乙腈-水，实验结果发现，除了以乙腈-磷酸二氢钾作为混合流动相以外，其他混合流动相在相同的洗脱条件下存在色谱分离选择性不佳，洗脱时基线漂移，不出峰、色谱峰峰形较差等问题。为了获得更好的谱图，本专利技术以乙腈-磷酸二氢钾作为混合流动相时，限定流动相B中磷酸二氢钾的浓度为1～60mM。在一种优选方案中，本专利技术选择的流动相B中磷酸二氢钾的浓度为5～50mM，进一步优选地，流动相B中磷酸二氢钾的浓度为5mM，即以乙腈-5mM磷酸二氢钾溶液作为混合流动相。在色谱法中，色谱柱的选择十分重要，对色谱柱的要求：柱效高、选择性好，分析速度快等。本专利技术在探索色谱条件时，也尝试了大量其他色谱柱，例如，ZorbaxSB-C18，结果发现，选择性不佳，效果差。本专利技术采用乙腈-磷酸二氢钾溶液，例如，乙腈-5mM磷酸二氢钾溶液作为混合流动相，色谱柱为EclipsePlusC18柱，在其他条件的配合下，能够同时满足人血浆中24种抗癫痫药物的高效、快速、简便、精准检测，灵敏度高、特异性强，准确度和精密度基本满足要求。在一种优选方案中，EclipsePlusC18柱的长度为150mm，直径为4.6mm，填料粒径为3.5μm。在一种优选方案中，上述提及的色谱条件还包括，检测波长为205～215nm，优选为210nm。进一步地，柱温为30～40℃，优选为35℃。进一步地，进样体积为5～20μL，例如，5μL、10μL、15μL或20μL。对于本专利技术而言，进行梯度洗脱时，限定不同梯度洗脱过程中混合流动相的流速，可以取得更好的分离效果，在一种优选方案中，第一组抗癫痫药物进行梯度洗脱时，流速为0.8～1.2mL/min，优选为1.0mL/min。第二组抗癫痫药物进行梯度洗脱时，在0～8min内，流速为0.8～0.9mL/min，优选为0.85mL/min，在8min以后至15min内，流速为0.9～1.2mL/min，优选为1.0mL/min。第三组抗癫痫药物进行梯度洗脱时，流速为0.8～1.2mL/min，优选为1.0mL/min。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述24种抗癫痫药物分为以下三组，利用高效液相色谱方法进行检测，具体色谱条件为：色谱柱为Eclipse Plus C

【技术特征摘要】
1.一种同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述24种抗癫痫药物分为以下三组，利用高效液相色谱方法进行检测，具体色谱条件为：色谱柱为EclipsePlusC18柱；以流动相A和流动相B作为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为磷酸二氢钾溶液；
第一组15种抗癫痫药物分别为：吡拉西坦；左乙拉西坦；乙琥胺；扑米酮；拉科酰胺；舒噻嗪；唑尼沙胺；布瓦西坦；苯巴比妥；奥卡西平；利卡西平；苯妥英钠；氯硝西泮；地西泮；斯利潘托；经过预处理后的含有上述第一组抗癫痫药物的血桨，按照如下过程进行梯度洗脱：0min，10％A；2min，10％A；3min，28％A；7.5min，28％A；8min，35％A；8.5min，45％A；9.5min，55％A；11min，60％A；11.5min，65％A；20min，65％A；
第二组6种抗癫痫药物分别为：拉莫三嗪；非尔氨酯；卢非酰胺；赛加宾；卡马西平；吡仑帕奈；经过预处理后的含有上述第二组抗癫痫药物的血桨，按照如下过程进行梯度洗脱：0min，20％A；2min，20％A；5min，30％A；8min，60％A；10min，60％A；13min，60％A；15min，20％A；
第三组3种抗癫痫药物分别为：氨己烯酸；普瑞巴林；加巴喷丁；经过预处理后的含有上述第三组抗癫痫药物的血桨，按照如下过程进行梯度洗脱：0min，20％A；2min，20％A；3min，28％A；7.5min，28％A；8min，35％A；8.5min，45％A；9.5min，55％A；11min，60％A；11.5min，65％A；20min，65％A。


2.根据权利要求1所述的同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述流动相B中磷酸二氢钾的浓度为1～60mM；优选为5～50mM；更优选为5mM。


3.根据权利要求1所述的同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述色谱柱的长度为150mm，直径为4.6mm，填料粒径为3.5μm；检测波长为205～215nm，优选为210nm；柱温为30～40℃，优选为35℃；进样体积为5～20μL，优选为10μL。


4.根据权利要求1所述的同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于，第一组抗癫痫药物进行梯度洗脱时，流速为0.8～1.2mL/min，优选为1.0mL/min；第二组抗癫痫药物进行梯度洗脱时，在0～8min内，流速为0.8～0.9mL/min，优选为0.85mL/min，在8min以后至15min内，流速为0.9～1.2mL/min，优选为1.0mL/min；第三组抗癫痫药物进行梯度洗脱时，流速为0.8～1.2mL/min，优选为1.0mL/min。


5.根据权利要求1所述的同时适应人血浆中24种抗癫痫药物测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于，三组不同混合对照品溶液按照如下方法制备：
针对第一组15种抗癫...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤道权，赵琳琳，杜岩，王陈祥，郭梦喆，季帅，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32