一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株及其应用，所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株分类命名为

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株及其应用
本专利技术属于微生物分离培养
，具体涉及一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株对墨兰根腐病的防治应用。
技术介绍
墨兰（Cymbidiumsinense）是兰科兰属地生植物，主要分布于中国、印度、缅甸、越南、泰国、日本琉球群岛等地。墨兰根腐病是人工栽培及产业化生产的主要病害之一。该病发生普遍，是兰花上的重要病害，影响兰花长势和观赏。该病主要为害肉质根。发病初期根上出现浅褐色、水渍状病斑，扩展后呈褐色腐烂，根一段一段腐烂至全根腐烂，再蔓延到其他根上。墨兰根腐病病原菌为尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)由于根系受害，轻时叶尖干枯，叶片黄绿，长势差，重时全株死亡，造成严重的经济损失。由于日益严峻的3R问题以及兰花作为室内观赏花卉的特性，使得化学防治已不再适用于兰花根腐病的防控，因此生物防治被认为是绿色生态可行的防治方法，筛选分离出一种防治兰花根腐病，同时对环境、人类无害的生物菌株是有必要的。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株(Bacillussubtilissubsp.inaquosorum)；第二目的在于提供所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株(Bacillussubtilissubsp.inaquosorum)的应用。除非另有说明外，本专利技术中所采用的百分数均为体积百分数。本专利技术的第一目的是这样实现的，所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株分类命名为(Bacillussubtilissubsp.inaquosorum)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日：2020年01月13日，保藏编号：19347，，所述枯草芽孢杆菌沙漠亚种属于细菌界，厚壁菌门，芽孢杆菌纲，芽孢杆菌目、芽孢杆菌科，芽孢杆菌属。本专利技术所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株(Bacillussubtilissubsp.inaquosorum)CPBA-W01，于2020年01月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter，简称：CGMCC。地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100080)。其保藏编号为CGMCCNo：19347。所述菌株对墨兰根腐病的抑病效果较好，能够抑制病原菌的生长，而不影响墨兰的品质。所述菌株采用对峙培养法的第3天即可观察到墨兰根腐病病原菌受到抑制，在对峙培养的第5天观察到抑制现象更明显，抑菌带达到9mm。所述菌株采用滤纸片培养法的第3天即可观察到墨兰根腐病病原菌受到抑制，在对峙培养的第5天观察到抑制现象更明显，抑菌圈达到8mm。所述菌株是通过下述具体步骤获得的：A、标本采集：从四川省攀枝花市苏铁自然保护区采集的攀枝花苏铁珊瑚状菌根；B、菌株的分离培养：采用常规组织法分离攀枝花苏铁珊瑚状菌根内生细菌：用蒸馏水洗净珊瑚状菌根表面土壤后吸干水分，将珊瑚根组织切成0.5cm×0.5cm的组织块，先用75%酒精消毒1min，然后用0.1%升汞溶液消毒5min，最后用无菌水漂洗3次。用无菌滤纸吸干多余水分后放置在LB培养基上，28℃培养48h。待菌落形成后，用无菌接种环挑出典型的单一菌落，在新的LB培养基，用划线法将菌株纯化；C、菌种保存：将实验获得的生防备用菌株的纯菌落接种于试管斜面，28℃培养5d长满菌落后4℃冰箱保存。保存培养基为LB培养基。LB固体培养基成分以g/L计为：胰蛋白胨10g、酵母粉5g、氯化钠10g、琼脂20g、蒸馏水1L，pH7.2~7.5。步骤A所述的标本采集地为四川省攀枝花市苏铁自然保护区。步骤A所述的标本采自苏铁自然保护区攀枝花苏铁珊瑚状菌根。步骤B所述无菌操作台中步骤为，酒精灯下操作，并在酒精灯火焰上灼烧接种针，接种环，在酒精等下操作所有分离步骤。步骤B所述的灭菌，是将接种针、接种环、无菌水、镊子、空培养基等试验所需材料置于高压蒸汽式灭菌器中，在121℃下灭菌处理30min。步骤B所述的分离培养条件的优选；28℃黑暗中静置培养48h。步骤C所述的纯化培养及保存的条件优选；28℃黑暗静置培养5d后4℃保存。一种用所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株(Bacillussubtilissubsp.inaquosorum)CPBA-W01防治墨兰根腐病的方法，包括生防菌株的筛选及生防效果的测定，具体包括以下步骤：A、生防菌株的筛选：利用十字交叉法对拮抗菌进行初筛。具体操作如下：以墨兰根腐病菌(Fusariumoxysporum)为指示菌，在改良PDA培养基平板中心接种病原菌的6mm琼脂块，然后将分离培养得到的细菌单菌落等距离接种在距离病原菌2.5cm处，每皿接种4个菌株，设置5个重复，28℃恒温培养3~5d后，观察抑菌圈大小，挑选出拮抗效果最优的菌株；B、生防效果的测定：为了筛出抑菌活性较强的菌株，采用平板对峙生长法对初筛获得的菌株进行复筛：以墨兰根腐病菌(Fusariumoxysporum)为指示菌，首先用6mm打孔器打取活化的病原菌琼脂块，置于平板上，然后采用点接法接种拮抗菌，两菌相距2.5cm，对照组只接种病原菌琼脂块，设置3个重复，28℃培养箱中培养3~5d，观察病原菌生长情况，测量抑菌带，计算抑菌率，最终筛选出拮抗效果最好的拮抗菌。抑菌率计算公式：抑菌率（%）=（对照病原菌菌落直径-处理病原菌菌落直径）/对照病原菌菌落直径×100%。改良PDA固态培养基成分以g/L计为：马铃薯160～240g、葡萄糖10～20g、琼脂15～20g、胰蛋白胨5g、酵母粉2g、氯化钠5g、蒸馏水1L，PH自然。本专利技术的第二目的是这样实现的，所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株(Bacillussubtilissubsp.inaquosorum)在生物防治墨兰根腐病中的应用。本专利技术的有益效果包括以下几个方面。1、本专利技术所述菌株对防治墨兰根腐病的效果好，对天麻的品质没有影响。2、本专利技术所述菌株在对峙培养的第3天即可观察到墨兰根腐病病原菌受到抑制，在对峙培养的第5天观察到抑制现象更明显。3、本专利技术所述菌株易于获得，培养时间短，有利于大规模生产和推广应用。附图说明图1为实施例1中枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株(Bacillussubtilissubsp.inaquosorum)CPBA-W01在LB培养基上，28℃培养48h的菌株菌落形态正反面图；图2为实施例1中采用平板对峙法的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株(Bacillussubtilissubsp.inaquosorum)CPBA-W01对墨兰根腐病病原菌(Fusariumoxysporum)拮抗效果正反面图；图3墨兰根腐病病原菌(Fusariumoxysporum)纯培养正反面图。具体实施方式下面结合实施例对本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株，其特征在于所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株分类命名为

【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株，其特征在于所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株分类命名为Bacillussubtilissubsp.inaquosorum，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日：2020年01月13日，保藏编号：19347，所述枯草芽孢杆菌沙漠亚种属于细菌界，厚壁菌门，芽孢杆菌纲，芽孢杆菌目、芽孢杆菌科，芽孢杆菌属。


2.一种权利要求1所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株的应用，其特征在于所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株在生物防治天麻腐烂病中的应用。


3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株的应用，其特征在于所述的枯草芽孢杆菌沙漠亚种菌株在生物防治墨兰...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍建榕，陈健鑫，马焕成，魏玉倩，张东华，王芳，周嫒婷，马翔，尼玛此姆，
申请(专利权)人：西南林业大学，
类型：发明
国别省市：云南;53