一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术属于食品的检测分析技术领域，公开了一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒，包括包被抗原的微孔板、睾酮标准品、睾酮一抗、酶标二抗、5×牛奶样本稀释液、10×样品提取液、20×浓缩洗液、终止液、TMB底物；所述包被抗原的微孔板用的是96孔可拆单孔微孔板，所述睾酮一抗为睾酮单克隆抗体(12.5mg/mL，LOT：120501，来自广州优抗多)原抗体液用保存液稀释30W倍使用。本发明专利技术的睾酮的免疫检测试剂盒是一种快速的检测方法，可以适合乳品中睾酮含量检测，很好的填补对这一样品检测的空白，此技术也容易推广，一般实验员经过短时间学习培训就可以操作，不需要很多贵重的仪器和试剂就能完成检测。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒及检测方法
本专利技术涉及食品的检测分析
，更具体地说，涉及一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒及检测方法。
技术介绍
睾丸素又称睾酮、睾丸酮或睾甾酮，由男性的睾丸或女性的卵巢分泌，肾上腺亦分泌少量睾酮，具有维持肌肉强度及质量、维持骨质密度及强度、提神及提升体能等作用。睾酮可能影响许多身体系统和功能，包括：血生成，体内钙平衡，骨矿化作用，脂代谢，糖代谢和前列腺增长。目前用于检测尿液中睾酮含量的方法有液质联用法，也有免疫法，但是用于乳品中睾酮含量检测的报道还很少，为了控制乳品中睾酮含量，急需一种有效的检测方法，故提出一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒及检测方法，解决上述问题。
技术实现思路
1.要解决的技术问题针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒及检测方法，解决了上述问题。2.技术方案为解决上述问题，本专利技术采用如下的技术方案。一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒，包括包被抗原的微孔板、睾酮标准品、睾酮一抗、酶标二抗、5×牛奶样本稀释液、10×样品提取液、20×浓缩洗液、终止液、TMB底物；所述包被抗原的微孔板用的是96孔可拆单孔微孔板；所述睾酮一抗为睾酮单克隆抗体(12.5mg/mL，LOT：120501，来自广州优抗多)原抗体液用保存液稀释30W倍使用；所述酶标二抗为HRP－羊抗小鼠IgG(博士德)，原酶偶联物液体用保存液稀释2000倍；所述浓缩的5×牛奶样本稀释液：0.5MPB(pH6.8)，需要加4体积水稀释后使用；所述浓缩的10×样本提取液：10×0.01MPBS(pH7.4)，需要加9体积水稀释后使用；所述浓缩的20×洗液，需要加19体积水稀释后使用；所述终止液为0.2M硫酸溶液，所述TMB底物为辣根过氧化物酶底物TMB。优选的，所述包被抗原的微孔板的包被物为睾酮抗原(16.1mg/mL，来自广州优抗多)。优选的，所述微孔板包被过程为：(1)2W×(CB溶液稀释)，加100ul/孔，4℃过夜；(2)拍干，洗微孔板2次，1％BSA+10％蔗糖(PBST稀释)，180ul/孔，37℃，孵育1-1.5h；(3)拍干，真空干燥15分钟。优选的，一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒的检测方法，包括以下步骤：一、样品处理：所述样品在检测前需要进行前处理，所述样品包括牛奶、鱼/虾/肉(牛肉、鸡肉、猪肉)、血浆/血清、尿样；二、点板检测过程：1)加入50μL的各个标准品于所设定的对应的微孔中；2)加入50μL的样品于所设定的微孔中；3)在每孔中加入50μL的酶标二抗和50μL的睾酮一抗，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；4)室温(22.5±2.5)℃避光孵育30分钟；5)洗板4次，每次应该加入250μL1×洗液，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；6)加入100μL的TMB底物；计时，轻敲微孔板边缘混匀1分钟7)在室温(22.5±2.5)℃避光孵育15分钟，加入100μL的终止液终止反应；8)酶标仪，在450nm下读OD值，读数前，用无绒布擦拭除去微孔底部的水分和指痕；三、计算结果：1)分别计算标准品和样品的平均吸光度值和相对吸光度值：相对吸光度值(％)＝(标准或样品吸光度值/零标准吸光度值)×1002)以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度的对数为横坐标建立标准曲线；3)从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。优选的，所述牛奶的处理步骤为：(1)取0.5mL牛奶样品，加入1.5mL无水甲醇，混匀；(2)室温4000g离心3分钟；(3)取0.1mL上层液，加入0.15mL1X牛奶样品稀释液，混匀；(4)每孔取50μL样品进行检测；稀释倍数：10。优选的，所述鱼/虾/肉(牛肉、鸡肉、猪肉)的处理步骤为：(1)使用合适的匀浆器匀质样品；(2)取2g匀质样品，加入6mL乙腈和1g硫酸镁，最大转速漩涡3分钟，均匀；(3)室温4000g离心5分钟；(3)移取3mL乙腈上清液到新的试管中，60-70℃水浴中氮气吹干；(4)加入0.75mL溶液A和2mL正己烷溶解干燥物，最大转速涡流一分钟；(5)室温下4000g离心5分钟，弃去上层正己烷；(6)每孔取50μL样品进行检测；稀释倍数：1。优选的，所述血浆/血清的处理步骤为：(1)取2mL血清/血浆，加入6mL乙腈和0.5mL清洁液，最大转速涡流3分钟；(2)室温下4000g离心5分钟；(3)移取3mL上层液到新的试管中，60-70℃水浴中氮气吹干；(4)加入0.5mL溶液A和2mL正己烷溶解干燥物；(5)室温4000g离心5分钟，弃去正己烷层；(6)每孔取50μL下层样品进行检测；稀释倍数：0.5。优选的，所述尿样的处理步骤为：(1)取0.5mL尿样，4000g离心5分钟；(2)取0.1mL上层液，加入0.4mL溶液A，混匀；(3)每孔取50μL样品进行检测；稀释倍数：5。3.有益效果相比于现有技术，本专利技术的优点在于：(1)本专利技术的睾酮的免疫检测试剂盒是一种快速的检测方法，可以适合乳品中睾酮含量检测，很好的填补对这一样品检测的空白，此技术也容易推广，一般实验员经过短时间学习培训就可以操作，不需要很多贵重的仪器和试剂就能完成检测。(2)本专利技术达成两个优点：一、通过优化工艺路线，放大抗原、抗体的稀释倍数，使得价格相对贵重的抗原、抗体用量减少，节省了成本；二、通过测试多种样本，发现此免疫检测方法适合多种食品样本，特别是适合乳品样本的测试，使得此方法相比液质联用的方法更容易推广应用。附图说明图1为睾酮酶联免疫反应测试盒的典型标准曲线图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述；显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。在本专利技术的描述中，需要说明的是，术语“上”、“下”、“内”、“外”“顶/底端”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制。此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。在本专利技术的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“设置有”、“套设/接”、“连接”等，应做广义理解，例如“连接”，可以是固定连接，也可以是可拆卸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒，其特征在于：包括包被抗原的微孔板、睾酮标准品、睾酮一抗、酶标二抗、5×牛奶样本稀释液、10×样品提取液、20×浓缩洗液、终止液、TMB底物；/n所述包被抗原的微孔板用的是96孔可拆单孔微孔板；/n所述睾酮一抗为睾酮单克隆抗体(12.5mg/mL，LOT：120501，来自广州优抗多)原抗体液用保存液稀释30W倍使用；/n所述酶标二抗为HRP－羊抗小鼠IgG(博士德)，原酶偶联物液体用保存液稀释2000倍；/n所述浓缩的5×牛奶样本稀释液：0.5MPB(pH 6.8)，需要加4体积水稀释后使用；/n所述浓缩的10×样本提取液：10×0.01MPBS(pH 7.4)，需要加9体积水稀释后使用；/n所述浓缩的20×洗液，需要加19体积水稀释后使用；/n所述终止液为0.2M硫酸溶液，所述TMB底物为辣根过氧化物酶底物TMB。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒，其特征在于：包括包被抗原的微孔板、睾酮标准品、睾酮一抗、酶标二抗、5×牛奶样本稀释液、10×样品提取液、20×浓缩洗液、终止液、TMB底物；
所述包被抗原的微孔板用的是96孔可拆单孔微孔板；
所述睾酮一抗为睾酮单克隆抗体(12.5mg/mL，LOT：120501，来自广州优抗多)原抗体液用保存液稀释30W倍使用；
所述酶标二抗为HRP－羊抗小鼠IgG(博士德)，原酶偶联物液体用保存液稀释2000倍；
所述浓缩的5×牛奶样本稀释液：0.5MPB(pH6.8)，需要加4体积水稀释后使用；
所述浓缩的10×样本提取液：10×0.01MPBS(pH7.4)，需要加9体积水稀释后使用；
所述浓缩的20×洗液，需要加19体积水稀释后使用；
所述终止液为0.2M硫酸溶液，所述TMB底物为辣根过氧化物酶底物TMB。


2.根据权利要求1所述的一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒，其特征在于：所述包被抗原的微孔板的包被物为睾酮抗原(16.1mg/mL，来自广州优抗多)。


3.根据权利要求2所述的一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒，其特征在于：所述微孔板包被过程为：
(1)2W×(CB溶液稀释)，加100ul/孔，4℃过夜；
(2)拍干，洗微孔板2次，1％BSA+10％蔗糖(PBST稀释)，180ul/孔，37℃，孵育1-1.5h；
(3)拍干，真空干燥15分钟。


4.根据权利要求1-3所述的一种用于检测乳品中睾酮的试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
一、样品处理：所述样品在检测前需要进行前处理，所述样品包括牛奶、鱼/虾/肉(牛肉、鸡肉、猪肉)、血浆/血清、尿样；
二、点板检测过程：
1)加入50μL的各个标准品于所设定的对应的微孔中；
2)加入50μL的样品于所设定的微孔中；
3)在每孔中加入50μL的酶标二抗和50μL的睾酮一抗，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；
4)室温(22.5±2.5)℃避光孵育30分钟；
5)洗板4次，每次应该加入250μL1×洗液，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；
6)加入100μL的TMB底物；计时，轻敲微孔板边缘混匀1分钟
7)在室温(22.5±2.5)℃避光孵育15分钟，加入100μL的终止液终止反应；
8)酶标仪，在450nm下读OD值...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓兴朝，陈欢，林金昌，崔让莲，曾祥富，
申请(专利权)人：深圳容金科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44