采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法技术

本发明专利技术涉及分析化学技术领域，具体公开一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，包括以下步骤：取神经酸标准品、含有神经酸的待测样品，以甲醇为溶剂，超声1～5分钟；色谱条件为：采用C

【技术实现步骤摘要】
采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法
本专利技术涉及分析化学
，具体涉及一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法。
技术介绍
神经酸化学名为顺-15-二十四碳单烯酸，分子式为C24H46O2，相对分子量为366.6。在常温下，神经酸为白色片状晶体，能溶于醇，不溶于水，熔点为39～40℃。目前多采用衍生化气相色谱法来测定神经酸的含量。采用衍生化气相色谱法，首先需要将神经酸进行酯化后测定酯化物的含量，该方法前处理过程繁琐，且难以判断酯化终点，检测结果的可信度不高。也有使用高效液相色谱法测定神经酸含量的现有技术，但依旧存在检测时间长，效率不高等问题，因此，亟需开发一种样品前处理简单，测定结果准确度高的神经酸含量测定方法。
技术实现思路
为了解决
技术介绍
中描述的技术问题，本专利技术提供了一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，选择甲醇为溶解和提取溶剂，采用C18色谱柱，选择0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇为流动相等度洗脱，实现了神经酸的含量快速、准确定量分析。本专利技术解决
技术介绍
中的技术问题，通过以下具体技术方案来实现：一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取神经酸标准品、含有神经酸的待测样品，以甲醇为溶剂，超声1～5分钟；（2）色谱条件为：采用C18色谱柱，以0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇为流动相等度洗脱。优选的，采用的色谱柱填料具体为十八烷基硅烷键合硅胶。优选的，所述流动相0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇的体积比为5～15：85～95。优选的，所述流动相0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇的体积比为5:95。优选的，检测波长在198nm～213nm之间。优选的，检测的波长为210nm。优选的，待分析标准品或样品的进样质量按C24H46O2计为2微克～70微克。优选的，分析流速为0.6ml/min～1.5ml/min。优选的，检测温度在20℃～30℃。本专利技术方法色谱柱使用的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，与CN109682900A中的色谱柱填料（辛烷基硅烷键合硅胶），提取溶剂、流动相组成有较大差异，属于在原理上本质不同的两种分析方法，通过与现有技术高效液相色谱法测定蒜头果油分离出的神经酸含量（赖福兵，李伟光等），蒜头果光合生理以及其种子中神经酸的提取纯化（付一笑），响应面优化超声辅助蒜头果中神经酸提取工艺及其HPLC分析（谷颖卓）中的高效液相色谱法测定神经酸的技术方案相对比，本专利技术创造性的仅使用了0.01mol/L磷酸二氢钾与甲醇两个试剂组成的流动相，本专利技术方法检测时间约为8～15分钟，分析时间优于现有技术甲醇－乙腈－四氢呋喃－0.4%乙酸水溶液10:80:5:5流动相的18分钟，试剂组成得到的效果优于现有技术甲醇－乙腈－四氢呋喃－0.4%乙酸水溶液。附图说明图1本专利技术方法实施例5神经酸标准品色谱图；图2本专利技术方法实施例5神经酸供试品色谱图；图3本专利技术方法神经酸线性回归方程图。具体实施方式本专利技术所使用的各种试剂均参照现有技术，使用色谱纯或分析纯级别。实施例一：（1）精密称取神经酸标准品约15mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为对照溶液。（2）精密称取神经酸原料约15mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为供试品溶液。（3）以0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇的体积比为3:97流动相等度洗脱，色谱柱柱为C18，检测波长为200nm，流速为1.2ml/min，进样体积为10ul,柱温30°C。经测试，实施例1中神经酸的出峰时间为7.9分钟。实施例二：（1）精密称取神经酸标准品约15mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为对照溶液。（2）精密称取神经酸原料约15mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为供试品溶液。（3）以0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇的体积比为3:97为流动相等度洗脱，色谱柱柱为C18，检测波长为200nm，流速为1.0ml/min，进样体积为20ul,柱温30°C。经测试，实施例2中神经酸的出峰时间为8.7分钟。实施例三：（1）精密称取神经酸标准品约15mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为对照溶液。（2）精密称取神经酸原料约15mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为供试品溶液。（3）以0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇的体积比为7:93为流动相等度洗脱，色谱柱柱为C18，检测波长为205nm，流速为0.8ml/min，进样体积为30ul,柱温20°C。经测试，实施例3中神经酸的出峰时间为11.3分钟。实施例四：（1）精密称取神经酸标准品约10mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为对照溶液。（2）精密称取神经酸原料约10mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为供试品溶液。（3）以0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇的体积比为7:93为流动相等度洗脱，色谱柱柱为C18，检测波长为205nm，流速为1.2ml/min，进样体积为10ul,柱温20°C。经测试，实施例4中神经酸的出峰时间为10.5分钟。实施例五：（1）精密称取神经酸标准品约10mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为对照溶液。（2）精密称取神经酸原料约10mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为供试品溶液。（3）以0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇的体积比为5:95为流动相等度洗脱，色谱柱柱为C18，检测波长为210nm，流速为1.0ml/min，进样体积为20ul,柱温25°C。经测试，实施例5中神经酸的出峰时间为12.7分钟。实施例六：（1）精密称取神经酸标准品约10mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为对照溶液。（2）精密称取神经酸原料约10mg置10ml量瓶中，加甲醇适量超声2分钟使溶解，并稀释至刻度，作为供试品溶液。（3）以0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇的体积比为5:95为流动相等度洗脱，色谱柱柱为C18，检测波长为210nm，流速为0.8ml/min，进样体积为30ul,柱温25°C。经测试，实施例6中神经酸的出峰时间为14.6分钟。根据实施例5中的技术方案，对本专利技术方法的精密度、准确度、线性、对照溶液稳定性做了验证，结果如下：精密度：按照实施例5中的方法，平行制备6份供试品溶液，分别使用不同品牌的色谱柱，不同型号的高效液相色谱仪，在不同日期测定神经酸供试本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n取神经酸标准品、含有神经酸的待测样品，以甲醇为溶剂，超声1～5分钟；/n色谱条件为：采用C

【技术特征摘要】
1.一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
取神经酸标准品、含有神经酸的待测样品，以甲醇为溶剂，超声1～5分钟；
色谱条件为：采用C18色谱柱，以0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇为流动相等度洗脱。


2.根据权利要求1所述的一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，其特征在于，采用的色谱柱填料具体为十八烷基硅烷键合硅胶。


3.根据权利要求1所述的一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，其特征在于，所述流动相0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇的体积比为5～15：85～95。


4.根据权利要求3所述的一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，其特征在于，所述流动相0.01mol/L磷酸二氢钾-甲醇的体积比为5:95...

【专利技术属性】
技术研发人员：代玉玲，王海云，朱常成，谢富兰，李加靖，席亮，廖荣，
申请(专利权)人：云南自由贸易试验区睿之成医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53