CDKL1基因或蛋白作为黑色素瘤诊断标志物的用途制造技术

本发明专利技术公开了检测CDKL1基因或蛋白表达的物质作为标志物在制备用于黑色素瘤的检测产品中的应用。本发明专利技术证实CDKL1在小鼠和人的黑色素瘤细胞中低表达，可作为黑色素瘤的诊断或预后标志物。进一步通过TCGA数据库中451个黑色素瘤样本分析CDKL1表达水平与黑色素瘤疾病具有统计学相关性，发现CDKL1表达量高的患者，生存期明显优于CDKL1表达量低的患者。本发明专利技术首次证实CDKL1与黑色素瘤的相关性，是黑色素瘤治疗领域的一种非常有价值的潜在药物筛选或治疗靶点。

【技术实现步骤摘要】
CDKL1基因或蛋白作为黑色素瘤诊断标志物的用途
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及CDKL1基因或蛋白作为黑色素瘤诊断标志物的用途。
技术介绍
黑色素瘤，又称为恶性黑色素瘤(malignantmelanoma，MM)，约占所有恶性肿瘤的1％～3％。皮肤黑色素瘤(CMM)是由表皮黑色素细胞恶性转化而来的侵袭性肿瘤，是所有皮肤肿瘤中进展最快且预后最为不良的恶性肿瘤，后期出现血运或淋巴结转移。其发病隐匿，易于早期转移，就诊患者多为中晚期，且发生转移5年内死亡率较高。近年来，MM的发病率和死亡率呈明显上升趋势，美国癌症协会(ACS)2017年报道称，除MM和甲状腺癌的发病率和死亡率呈上升趋势外，其他常见恶性肿瘤都呈下降趋势。我国流行病学研究显示，每年新发病例约20000人，《中国黑色素瘤诊治指南(2015版)》更新显示，与欧美国家相比，我国MM呈现死亡率随发病率上升而上升状态，这反映了我国在MM诊断治疗上与欧美国家存在差距，需要在临床工作中做到早预防、早发现、早治疗。目前关于黑色素瘤基础和临床研究的探索不断增多，但其发病机制仍然未明，很多患者确诊时已经是中晚期。临床治疗上无显著进展，现状仍不容乐观。因此，进一步探索黑色素瘤发生和发展的相关机制，寻找新的肿瘤标志物以及治疗靶点延长患者生存期成为亟待解决的问题。已显示某些基因与黑色素瘤相关。如CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭及转移的影响，SPINK5在皮肤恶性黑色素瘤临床组织样本中的表达情况。寻找更多黑色素瘤的新靶标，对黑色素瘤的生物诊断和治疗具有重要意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种与黑色素瘤发生相关的诊断标志物，将其应用到临床中，实现对黑色素瘤早期诊断，提高患者的生存率和生存质量。为实现上述目的，本专利技术具体技术方案如下：本专利技术第一方面提供了检测CDKL1基因或蛋白表达的物质在制备用于黑色素瘤的检测产品中的应用。在一些实施方式中，所述CDKL1基因或蛋白在黑色素瘤细胞中表达下调。在一些实施方式中，所述产品包括试剂盒、试剂、芯片。在一些实施方式中，所述检测CDKL1基因表达的物质包括扩增CDKL1基因的引物对；所述引物对由SEQIDNO.1或SEQIDNO.3所示的单链DNA分子和SEQIDNO.2或SEQIDNO.4所示的单链DNA分子组成。在一些实施方式中，检测CDKL1蛋白表达的物质包括检测CDKL1蛋白特异性抗体。本专利技术第二方面提供了一种用于检测黑色素瘤的试剂盒，所述试剂盒包括能够在mRNA水平检测CDKL1基因表达水平的上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.3所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2或SEQIDNO.4所示。进一步地，本专利技术提供了一种用于检测黑色素瘤的试剂盒，所述试剂盒包括检测CDKL1蛋白表达水平的特异性抗体。本专利技术第二方面提供了CDKL1在筛选预防或治疗黑色素瘤的候选药物中的应用。在一些实施方式中，所述候选药物能上调黑色素瘤细胞或组织中CDKL1基因或蛋白的表达水平。基于上述技术方案，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术证实CDKL1在小鼠和人的黑色素瘤细胞中低表达，可作为黑色素瘤的诊断或预后标志物。进一步通过TCGA数据库中451个黑色素瘤样本分析CDKL1表达水平与黑色素瘤疾病具有统计学相关性，发现CDKL1表达量高的患者，生存期明显优于CDKL1表达量低的患者。本专利技术首次证实CDKL1与黑色素瘤的相关性，是黑色素瘤治疗领域的一种非常有价值的潜在药物筛选或治疗靶点。附图说明图1检测CDKL1mRNA在小鼠黑色素瘤细胞中的表达水平；图2检测CDKL1蛋白在小鼠黑色素瘤细胞中的表达水平；图3检测CDKL1mRNA在人黑色素瘤细胞中的表达水平；图4检测CDKL1蛋白在人黑色素瘤细胞中的表达水平；图5CDKL1表达与黑色素瘤患者的生存关系。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1比较小鼠正常表皮细胞JB6和小鼠黑色素瘤高转移细胞B16-F10及小鼠黑色素瘤低转移细胞B16-F1中CDKL1的mRNA水平含量。小鼠黑色素瘤细胞B16-F10接种于含有10％胎牛血清DMEM培养基中(加入青霉素、链霉素100U/mL)，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，以0.25％胰蛋白酶消化传代。操作步骤如下：RNA抽提和荧光定量PCR检测：使用总RNA极速抽提试剂盒(飞捷生物)提取细胞的RNA，按照常规步骤进行反转录形成cDNA后，实时荧光定量PCR检测CDKL1的表达效果，其中，cDNA扩增引物对序列分别：qPCR引物F：5’-AGGCTCCTATGGGGTAGTGTT-3’(SEQIDNO:1)；qPCR引物R：5’-GGCGATTTTCTTTATGACAGGGT-3’(SEQIDNO:2)。结果如图1显示，CDKL1表达水平在肿瘤细胞中的含量低于正常表皮细胞的含量。实施例2比较小鼠正常表皮细胞和和小鼠黑色素瘤高转移细胞B16-F10及小鼠黑色素瘤低转移细胞B16-F1中CDKL1的蛋白水平含量。操作步骤如下：收集80％汇合度时细胞，离心后弃上清，PBS润洗两次，弃上清。加入RIPA裂解液，冰上裂解20min。12000g离心10min收集上清。加入1xSDS上样缓冲液，吹打混匀后煮沸变性5min。10％SDS-PAGE凝胶分离总蛋白，然后转移到PVDF膜。5％BSA室温封闭2h，与CDKL1抗体(GeneTex，GTX55287(1:1000稀释))4℃孵育过夜，TBST洗涤3次。二抗室温孵育1h，TBST洗涤3次。ECL超敏化学发光液显影，经Tannon成像系统成像。以Tubulin(abcam，ab7291(1:2000稀释))作为内参比较不同细胞中CDKL1蛋白的表达水平。结果如图2所示，与正常表皮细胞相比，肿瘤细胞中系CDKL1蛋白表达明显降低。实施例3比较人正常表皮细胞HaCat和人黑色素瘤细胞SK-MEL-24，SK-MEL-28中CDKL1的表达量。具体步骤参见实施例1所述的实验方法。cDNA扩增引物对序列分别：qPCR引物F：5’-ACACGGGTCAGATTGTGGC-3’(SEQIDNO:3)；qPCR引物R：5’-GGATTTCCCGAAGGGCAATTT-3’(SEQIDNO:4)。结果如图3所示，发现CDKL1表达水平在人黑色素瘤细胞中的含量低于正常表皮细胞的含量。实施例4比较人正常表皮细胞HaCat和人黑色素瘤细胞SK-MEL-24，SK-MEL-28中CDKL1的蛋白水平含量。具体步本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测CDKL1基因或蛋白表达的物质在制备用于黑色素瘤的检测产品中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.检测CDKL1基因或蛋白表达的物质在制备用于黑色素瘤的检测产品中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述CDKL1基因或蛋白在黑色素瘤细胞中表达下调。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂盒、试剂、芯片。


4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测CDKL1基因表达的物质包括扩增CDKL1基因的引物对；
所述引物对由SEQIDNO.1或SEQIDNO.3所示的单链DNA分子和SEQIDNO.2或SEQIDNO.4所示的单链DNA分子组成。


5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，检测CDKL1蛋白表达的物质包括检...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔健，姜薇，
申请(专利权)人：河北仁博科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13