一种检测APOE和SLCO1B1基因多态性位点的引物、探针及其试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测APOE和SLCO1B1基因多态性位点的引物、探针及其试剂盒，引物和探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～12所示。本发明专利技术的检测试剂盒能够一管同时检测APOE基因APOE c.526C＞T、APOE c.388T＞C位点和SLCO1B1基因SLCO1B1 c.388A＞G、SLCO1B1 c.521T＞C位点，具有操作简单、特异性强、高通量、结果容易判读和检测成本低等优势，不但可以用于预测疾病风险和健康管理，也可指导他汀类药物的合理使用，值得推广。

【技术实现步骤摘要】
一种检测APOE和SLCO1B1基因多态性位点的引物、探针及其试剂盒
本专利技术涉及基因检测
，更具体地，涉及一种检测APOE和SLCO1B1基因多态性位点的引物、探针及其试剂盒。
技术介绍
近30年来，中国人群的血脂水平逐步升高，血脂异常患病率明显增加。《中国居民营养与慢性病状况报告(2015年)》显示，中国成人血脂异常总体患病率高达40.40％。《中国成人血脂异常防治指南(2016年修订版)》指出LDL-C是调脂治疗干预的首要靶点，降低LDL-C水平可显著减少ASCVD的发病及死亡危险。他汀类药物可通过抑制HMG-CoA还原酶活性来减少胆固醇的合成，有研究表明，他汀类药物可降低55％的LDL-C的水平，降低20-30％的心血管事件，ASCVD一级和二级预防中均能显著降低心血管事件风险，是防治此类疾病最为重要的药物。而他汀类药物是临床使用疗效和不良反应个体差异较大的药物，这些个体差异与药物基因多态性有关，APOE和SLCO1B1基因则是近年来研究最多的热点基因。APOE通过多种途径参与机体的脂质代谢调节，是影响机体血脂水平的重要内在因素。APOE多态性被认为是高脂蛋白血症及动脉粥样硬化性血管病的易感候选基因，可以形成3种单倍型分别是APOE3(388T-526C)、APOE2(388T-526T)、APOE4(388C-526C)，其中APOE4携带者患冠心病的风险要高40％，并且他汀类药物对APOE4携带者疗效往往不佳或无疗效，而对APOE2携带者的降脂作用最强。SLCO1B1编码的OATP1B1有机阴离子转运多肽，是运输他汀类药物进入肝脏的主要运载蛋白，SLCO1B1的基因多态性会影响他汀类药物的血药浓度。SLCO1B1*5基因型能够减少他汀转运到肝脏的水平，而使他汀类药物的血药浓度增加，从而增加他汀的不良反应，导致横纹肌溶解和肌病的风险增加。因此，CPIC药物遗传学指南和国家卫计委颁布的《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行)》中指出：SLCO1B1和APOE基因多态性影响他汀类药物的代谢水平，医生可根据其基因多态性，指导病人他汀类服用剂量，降低发生肌病的风险。目前针对基因多态性的检测方法主要包括：高分辨率熔解曲线法、芯片法、荧光PCR法、SNPshot法、直接测序法。其中，高分辨率熔解曲线法对设备的温度分辨率要求较高，各个样品孔间的差异必须小于0.1℃，而大部分常规的定量PCR仪孔间温度差异在0.3℃～0.5℃之间，常规定量PCR仪器无法胜任高分辨率熔解曲线(HRM)的分析，临床推广困难；芯片法操作复杂，耗时长，且自动化程度较低；普通荧光PCR法由于荧光通道的限制，检测通量受限，且现有同类试剂盒一管混合液仅检测一个位点的一种基因型，操作繁琐；SNPshot和直接测序法需要使用测序仪，该仪器昂贵，难以推广普及。因此，目前亟需开发一种准确度高、成本低的APOE和SLCO1B1基因多态性位点检测试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术中对基因多态性位点检测的不足，提供一种检测成本低、检测时间短、特异性强，不同基因型区分度高的APOE和SLCO1B1基因多态性位点检测试剂盒。本专利技术的第一个目的是提供一种检测APOE基因多态性位点的引物组。本专利技术的第二个目的是提供一种检测SLCO1B1基因多态性位点的引物组。本专利技术的第三个目的是提供一种检测APOE基因多态性位点的探针。本专利技术的第四个目的是提供一种检测SLCO1B1基因多态性位点的探针。本专利技术的第五个目的是提供以上任一所述引物组和/或探针在制备APOE和/或SLCO1B1基因多态性位点的检测试剂盒中的应用。本专利技术的第六个目的是提供一种APOE和/或SLCO1B1基因多态性位点检测试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：本专利技术提供一种检测APOE基因多态性位点的引物组，包括：检测位点APOEc.388T＞C的引物组，其核苷酸序列如SEQIDNO.1～2所示；检测位点APOEc.526C＞T的引物组，其核苷酸序列如SEQIDNO.3～4所示。一种检测SLCO1B1基因多态性位点的引物组，包括：检测位点SLCO1B1c.521T＞C的引物组，其核苷酸序列如SEQIDNO.5～6所示；检测位点SLCO1B1c.388A＞G的引物组，其核苷酸序列如SEQIDNO.7～8所示。优选地，以上所述引物组分为上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列为SEQIDNO.1、SEQIDNO.3、SEQIDNO.5、SEQIDNO.7；下游引物的核苷酸序列为SEQIDNO.2、SEQIDNO.4、SEQIDNO.6、SEQIDNO.8。更优选地，以上所述序列如SEQID1～8所示的引物的长度在16～28bp之间。进一步更优选地，以上所述序列如SEQID1～8所示的引物的长度优选在20～24bp之间。一种检测APOE基因多态性位点的探针，包括：检测位点APOEc.388T＞C的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；检测位点APOEc.526C＞T的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.10所示。一种检测SLCO1B1基因多态性位点的探针，包括：检测位点SLCO1B1c.521T＞C的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.11所示；检测位点SLCO1B1c.388A＞G的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示。优选地，以上所述序列如SEQIDNO.9～12所示的探针的长度在16～24bp之间。更优选地，以上所述序列如SEQIDNO.9～12所示的探针的长度优选在20～22bp之间。优选地，以上所述探针的5’端由FAM、ROX、VIC或CY5中的任意一种荧光基团所修饰，3’端由BHQ1或BHQ2中的任意一种淬灭基团所修饰。更优选地，检测位点APOEc.388T＞C的探针的5’端由FAM荧光基团所修饰，3’端由BHQ1淬灭基团所修饰；检测位点APOEc.526C＞T的探针的5’端由ROX荧光基团所修饰，3’端由BHQ2淬灭基团所修饰；检测位点SLCO1B1c.521T＞C的探针的5’端由VIC荧光基团所修饰，3’端由BHQ2淬灭基团所修饰；检测位点SLCO1B1c.388A＞G的探针的5’端由CY5荧光基团所修饰，3’端由BHQ2淬灭基团所修饰。以上所述引物组和/或所述探针在制备APOE和/或SLCO1B1基因多态性位点的检测试剂盒中的应用，也属于本专利技术的保护范围。本专利技术还要求保护一种APOE和/或SLCO1B1基因多态性位点检测试剂盒，包含以上所述引物组和所述探针。优选地，所述检测试剂盒包括PCR反应液、Taq酶、质控品对照质粒。优选地，所述检测试剂盒，PCR反应液包括PCR扩增缓冲液、0.1～1μM以上所述引物组、0.1μM以上所述探针、1×GCBuffer、ddH2O。更优选地，PCR反应液中的引物组，上游引物为0.1μM，下游引物为1μM。...

【技术保护点】
1.一种检测APOE基因多态性位点的引物组，其特征在于，包括：检测位点APOE c.388T＞C的引物组，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示；检测位点APOE c.526C＞T的引物组，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测APOE基因多态性位点的引物组，其特征在于，包括：检测位点APOEc.388T＞C的引物组，其核苷酸序列如SEQIDNO.1～2所示；检测位点APOEc.526C＞T的引物组，其核苷酸序列如SEQIDNO.3～4所示。


2.一种检测SLCO1B1基因多态性位点的引物组，其特征在于，包括：检测位点SLCO1B1c.521T>C的引物组，其核苷酸序列如SEQIDNO.5～6所示；检测位点SLCO1B1c.388A>G的引物组，其核苷酸序列如SEQIDNO.7～8所示。


3.一种检测APOE基因多态性位点的探针，其特征在于，包括：检测位点APOEc.388T＞C的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；检测位点APOEc.526C＞T的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.10所示。


4.一种检测SLCO1B1基因多态性位点的探针，其特征在于，包括：检测位点SLCO1B1c.521T>C的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.11所示；检测位点SLCO1B1c.388A>G的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示。

【专利技术属性】
技术研发人员：王博，王婉君，葛毅媛，谢龙旭，李烈军，
申请(专利权)人：广州凯普医药科技有限公司，郑州凯普医学检验所有限合伙，北京凯普医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44