产纤维素酶细菌C18的筛选及其微生物制剂的天然纤维素降解方法技术

本发明专利技术涉及微生物制剂技术领域，特别涉及产纤维素酶的海洋细菌及其微生物制剂和天然纤维素的降解方法。该海洋细菌的保藏编号为CCTCC NO：M 2020620。本发明专利技术筛选到的海水细菌适用于海南热带海洋环境，且具有高效纤维素降解能力，可降解甘蔗渣等天然维生素，达到经济廉价可以长期投放的效果，为开发产纤维素酶海洋微生物制剂和对虾海水养殖模式中充分利用廉价天然纤维素作为人工碳源奠定菌种基础。

【技术实现步骤摘要】
产纤维素酶细菌C18的筛选及其微生物制剂的天然纤维素降解方法
本专利技术涉及微生物制剂
，特别涉及产纤维素酶的海洋细菌及其微生物制剂和天然纤维素的降解方法。
技术介绍
在凡纳滨对虾养殖过程中，因投入的蛋白质饵料增加，养殖水体的氨氮和亚硝酸盐含量常超标，导致水体碳氮比失衡，严重影响了对虾的养殖。养殖过程中，人工碳源的添加可起到平衡水体碳氮比的作用。中国甘蔗种植面积广，产量大，具有丰富的甘蔗渣资源，且价格低廉，较易获得。甘蔗渣中的纤维素可缓慢分解为葡萄糖，能源源不断地提供碳源，提高水体碳氮比，利于养殖环境中有益菌的生长，促进生物絮团的形成，改善水质，同时可被对虾摄食，使对虾获得更好的生长效果。产纤维素酶菌是一种能产生纤维素酶降解纤维素生成葡萄糖的一种细菌。产纤维素酶菌所产生的纤维素酶可将甘蔗渣中的纤维素快速降解为葡萄糖，可更为快速、更为直接的提供碳源。如公开号CN103468602A专利技术公开了一株产纤维素酶芽孢杆菌(Bacillussp.)H1，保藏编号为CGMCCNo.7395。该专利技术方法简单快速，易于实施，对研究纤维素酶作用机理及纤维素酶制剂的生产具有潜在理论和应用价值。又如公开号CN102586133A专利技术公开了一株产生纤维素酶的芽孢杆菌属(Bacillussp.)菌株和利用此菌株生产纤维素酶的生产方法，经过培养基优化筛选及发酵工艺条件优化控制，确立了稳定的发酵方法，生产的纤维素酶制剂具有良好的酶活性。研究表明，产纤维素酶菌等水产益生菌具有地理种群的特殊性。由于我国内陆地区和海南岛的环境、气候有明显的差异，导致许多水产益生菌在海南岛的使用效果不明显。现有常见水产益生菌并不适合利用纤维素。现有的产纤维素酶菌也主要集中在陆源纤维素功能菌的筛选。因此寻找适用于海南热带海洋环境且产纤维素酶的海水细菌迫在眉睫。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了产纤维素酶的海洋细菌及其微生物制剂和天然纤维素的降解方法。本专利技术首次获得高纤维素酶活、安全无害、遗传稳定、耐受性明确和高甘蔗渣腐解率的海洋土著细菌，为后续适用于海南环境微生态制剂的制备和构建基于人工添加碳源的凡纳滨对虾等海洋水产海水养殖模式提供新思路。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种产纤维素酶的海洋细菌，其保藏编号为CCTCCNO：M2020620。作为优选，海洋细菌的筛选方法包括：采集海草床附近3cm以下底质泥样，涂布于2216E海水琼脂培养基上，经培养、纯化，得到产纤维素酶的海洋细菌。作为优选，2216E海水琼脂培养基的组成为：0.5％胰蛋白，0.1％酵母，0.01‰磷酸铁，1.7％琼脂，水余量。作为优选，培养的温度为30℃，培养的时间为15～30h。优选地，培养的时间为18h。本专利技术还提供了一种天然纤维素的降解方法，包括：将上述海洋细菌接种于2216E液体培养基进行培养，得到培养上清液；将所得培养上清液与天然纤维素混合，酶解。作为优选，培养的温度为30℃，培养的时间为12～16h。作为优选，酶解的pH值为4.6～5.0，酶解的温度为48～52℃，酶解的时间为0.5～2h。优选地，酶解的pH值为4.8，酶解的温度为50℃，酶解的时间为1h。作为优选，天然纤维素为甘蔗渣粉。作为优选，甘蔗渣粉为100～200目、碱液处理后的甘蔗渣粉。优选地，甘蔗渣粉为150目、碱液处理后的甘蔗渣粉。作为优选，碱液处理为：用85℃、2％的NaOH溶液浸泡甘蔗渣粉1h，冷却后水洗至中性，烘干。本专利技术还提供了另一种天然纤维素的降解方法，包括：将上述海洋细菌接种于含有天然纤维素的液体培养基振荡培养。作为优选，振荡培养的温度为30℃，振荡培养的转速为180rpm，振荡培养的时间为10～20天。优选地，振荡培养的时间为15天。本专利技术还提供了一种产纤维素酶的海洋微生物制剂，包括上述海洋细菌。本专利技术还提供了一种海洋水产的养殖方法，以天然纤维素作为人工碳源，在养殖水体中加入上述海洋细菌或海洋微生物制剂。本专利技术提供了产纤维素酶的海洋细菌及其微生物制剂和天然纤维素的降解方法。该海洋细菌的保藏编号为CCTCCNO：M2020620。本专利技术具有的技术效果为：本专利技术筛选到的海水细菌适用于海南热带海洋环境，且具有高效纤维素降解能力，可降解甘蔗渣等天然维生素，达到经济廉价可以长期投放的效果，为开发产纤维素酶海洋微生物制剂和对虾海水养殖模式中充分利用廉价天然纤维素作为人工碳源奠定菌种基础。生物保藏说明分类命名：芽孢杆菌DJYL181224C18(Bacillussp.DJYL181224C18)，于2020年10月22日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏中心地址为湖北省武汉市武汉大学校内，保藏编号为CCTCCNO：M2020620。附图说明图1示海洋中采样位置坐标；图2示安全性实验中对虾存活率；图3示不同pH值对菌体生长的影响；图4示不同盐度对菌体生长的影响。具体实施方式本专利技术公开了产纤维素酶的海洋细菌及其微生物制剂和天然纤维素的降解方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术提供的产纤维素酶的海洋细菌及其微生物制剂和天然纤维素的降解方法中所用试剂或仪器均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例11.采集样品2018年12月24日在文昌市东郊镇东郊椰林生态系统(19°31′28.81″N，110°52′0.45″E)采集海草床附近3cm以下底质泥样(图1)。采集的泥样置于无菌拉链塑料袋中，在4℃冰盒里保存。2.微生物分离纯化在收集样品24小时内，用无菌勺称取0.5g泥样悬浮于无菌生理盐水溶液(0.85％NaCl)中，搅拌均匀，以此为原液，用无菌生理盐水溶液连续稀释水样，以获得1:10、1:100和1:1000的稀释液，各取100μL稀释的样品均匀涂布在2216E海水琼脂培养基(0.5％胰蛋白，0.1％酵母，0.01‰磷酸铁和1.7％琼脂)上，并在30℃的恒温箱下培养18小时。根据常见细菌系统鉴定手册研究琼脂平板上菌落形态，包括形状、大小、高度和颜色。选择形态上不相同的菌落并将其划线在2216E海水琼脂培养基上以获得纯菌落。挑取单菌落于无菌2216E液体培养基中培养，达到OD600＝1的保种浓度，补充甘油使其终浓度为15％，在温度为-80℃的冰箱里保存。部分纯化的菌落保存在4℃以进一步鉴定。3.初步筛选产纤维素酶的海水细菌培养物使用羧甲基纤维素(CMC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产纤维素酶的海洋细菌，其特征在于，其保藏编号为CCTCC NO：M 2020620。/n

【技术特征摘要】
1.一种产纤维素酶的海洋细菌，其特征在于，其保藏编号为CCTCCNO：M2020620。


2.一种天然纤维素的降解方法，其特征在于，包括：将权利要求1所述海洋细菌接种于2216E液体培养基进行培养，得到培养上清液；将所得培养上清液与天然纤维素混合，酶解。


3.根据权利要求2所述的降解方法，其特征在于，所述酶解的pH值为4.6～5.0，酶解的温度为48～52℃，酶解的时间为0.5～2h。


4.根据权利要求2所述的降解方法，其特征在于，所述天然纤维素为甘蔗渣粉，所述甘蔗渣粉为100～200目、碱液处理...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢珍玉，吴金萍，徐雪妮，龙昊，蔡晓霓，任伟，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南;46