一种用于测量钙离子的试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术属于分析检测技术领域，具体涉及一种用于测量钙离子的试剂盒及其使用方法。本发明专利技术主要涉及一种含有如下式I所示化合物的用于测量钙离子的试剂盒及其使用方法。所述试剂盒稳定性好、精密度高、线性范围广、不受镁干扰、且不含环境不友好的砷元素，可以应用于生化及临床医药领域。

【技术实现步骤摘要】
一种用于测量钙离子的试剂盒及其使用方法
本专利技术属于分析检测
，具体涉及一种用于测量钙离子的试剂盒及其使用方法。
技术介绍
血清总钙量是常用的临床生化检验指标，具有重要的临床意义。钙是人体内含量最多的阳离子，参考范围非常窄(2.08-2.70mmol/L)，医学决定水平浓度分别是1.75mmol/L、2.75mmol/L和3.38mmol/L。在这些水平之上或之下的轻微偏离对数种生理障碍具有诊断意义。血清钙升高常见于甲状旁腺功能亢进、多发性骨髓瘤、结节病、大量应用维生素D治疗引起的肠道过量吸收。血清钙水平降低一般与甲状旁腺功能减退、慢性肾衰竭等相关。血清总钙测定方法主要有火焰光度法、原子吸收分光光度法、放射性核素稀释质谱法、滴定法和比色法，其中决定性方法为放射性核素稀释质谱法，参考方法为原子吸收分光光度法。火焰光度法、原子吸收分光光度法和放射性核素稀释质谱法虽然结果准确，干扰因素少，但设备复杂，费用昂贵，不适合常规实验和自动分析。在临床检验中常用的测量钙的方法是比色法，有邻甲酚酞络合酮(OCPC)法、偶氮砷III法、甲基麝香草酚蓝法和NM-BAPTA法。虽然这些方法目前市面都在使用，但是每种方法都有缺点。OCPC法虽然是WHO和我国卫生部临床检验中心(1997年)推荐的常规方法，但是该方法存在选择性差(也会结合镁)、稳定性差(过分依赖于强碱环境)、线性不通过“零点”等严重缺点。偶氮砷III法是近几年发展起来的方法，该方法消除了OCPC法的许多缺点，具有试剂稳定、本底吸光度低、无强碱、不怕镁干扰等优点，但是该方法存在试剂间化学污染、灵敏度低和环境污染等问题。甲基麝香草酚蓝比色法测定血清钙具有快速、简便、结果准确的特点，适用于临床生化检验，缺点是由于试剂碱性较强、试剂本身的稳定性不甚理想。NM-BAPTA法存在显色剂硝化的产率低的缺点。而且，NM-BAPTA法专一性地与罗氏销售的相关设备配套使用，因而该方法具有价格高、适用设备机型少并且不利于临床应用推广等缺点。综上所述，开发出稳定性好、精密度高、线性范围广、不受镁干扰、不含砷元素、能应用于临床、全自动检测、适用范围广泛的钙检测试剂是目前亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供新的钙检测试剂，以改进或消除现有技术中的钙检测试剂的缺陷。专利技术人发现双硝基取代的BAPTA型螯合剂在此方面表现出非常好的性质，非常适合检测钙离子。本专利技术首先提供如下式I的化合物，其中，R1、R4相同或不同，彼此独立地选自氢、卤素、羧基、C1-6烷基和甲酰基；R2、R3、R5和R6相同或不同，彼此独立地选自氢、卤素、C1-6烷基或C1-6烷氧基；X+为带正电荷的抗衡离子。根据本专利技术的实施方案，R1、R4相同或不同，彼此独立地选自氢、卤素、羧基、C1-3烷基和甲酰基；R2、R3、R5和R6相同或不同，彼此独立地选自氢、卤素、C1-3烷基或C1-3烷氧基；X+独立地为钾离子、钠离子、锂离子或铯离子。根据本专利技术优选的实施方案，R1、R4选自氢；R2为甲基或乙基；R3、R5和R6为H；X+独立地为钾离子。作为示例，式I所示的化合物选自如下化合物NNM-BAPTA，本专利技术还提供一种检测钙离子浓度的试剂盒，包括：如上所述式I化合物，缓冲试剂及释放剂；所述缓冲试剂使检测体系的pH维持在7.0-11.0；所述释放剂选自螯合钙离子性能优于式I化合物的物质。根据本专利技术的实施方案，所述缓冲试剂使检测体系的pH维持在7.0-10.0。根据本专利技术的实施方案，所述缓冲试剂选自巴比妥钠缓冲体系、TRIS缓冲体系、硼酸缓冲体系、甘氨酸缓冲体系、碳酸盐缓冲体系、磷酸盐缓冲体系、CAPSO[3-环己基氨基-2-羟基-1-丙磺酸]缓冲体系、CAPS[3-环己基氨基-2-丙磺酸]缓冲体系或咪唑缓冲体系。根据本专利技术的实施方案，所述释放剂选自EDTA(乙二胺四乙酸，CAS登记号：60-00-4)、EDTA-2K(乙二胺四乙酸二钾，CAS登记号：25102-12-9)、EGTA(乙二醇-二(2-氨基乙基醚)-N,N,N,N-四乙酸，CAS登记号：67-42-5)、DTPA(二亚乙基三氨基五乙酸，CAS登记号：67-43-6)、DTPMP(二亚乙基三氨基五(亚甲基膦酸)，CAS登记号：15827-60-8)和/或EDPMP(亚乙基二氨基四(亚甲基膦酸)，CAS登记号1429-50-1)。根据本专利技术的实施方案，所述释放剂的浓度为NNM-BAPTA浓度的5倍，10倍，20倍，或50倍，或任意两个这些值为上下限组成的范围。根据本专利技术的实施方案，所述试剂盒检测钙离子的浓度范围为0.0～5mmol/L，例如0.0001～3mmol/L，如0.2～1mmol/L。根据本专利技术的实施方案，所述试剂盒中式I化合物的最终浓度将为检测样品中钙离子浓度的至少1.1至2.5倍，3倍和至多20倍，15倍或10倍，其是针对具有5mmol/L预期上限的样品所计算的。优选地，式I化合物在测定混合物中的最终浓度将为用样品的稀释因子乘以5mmol/L所得到的摩尔浓度的至少1.1倍，2倍，2.5倍，3倍和至多20倍，15倍或10倍。例如，在所述样品被以1:100稀释的情况中，测定混合物中的最终钙离子浓度将为0.05mmol/L。式I化合物的最终浓度应为该浓度的至少1.1倍，即0.055mmol/L。在一个优选实施方案中，用于测量钙的试剂盒包含浓度为0.05mmol/L-50mmol/L的式I化合物。根据本专利技术的实施方案，所述检测钙离子浓度的试剂盒可以包括两种或更多种式I化合物。在一个优选实施方案中，所述检测钙离子浓度的试剂盒包含单一的一种式I化合物。根据本专利技术的实施方案，所述检测钙离子浓度的试剂盒还可以包含或不包含洗涤剂。优选地，所述检测钙离子浓度的试剂盒不包含洗涤剂。在钙离子检测过程中，将洗涤剂添加至用于测量钙离子的试剂中来减少干扰性非特异性结合，减少泡沫和气泡等。优选地，所述洗涤剂指离子洗涤剂或非离子洗涤剂。洗涤剂的实例包括但不限于：十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪酸盐、家族、辛基糖苷、3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基-铵基]-1-丙磺酸盐(CHAPS)、十二烷基麦芽糖苷钠(DM)、月桂基二乙基胺氧化物(LDAO)、NP-40和家族、伯胺、胺乙酸盐和胺盐酸盐、季铵盐、三甲基乙基溴化铵、取代的二胺的酰胺、二乙醇氨基丙胺或二乙基氨基丙酰胺(diethylaminopropylamide)、环化的二亚乙基三胺的酰胺、烷基芳基磺酸盐、石油磺酸盐、磺化甘油酯、胆酰胺类(cholamides)、磺基甜菜碱类(sulfobetaines)、烷基糖苷、皂苷、烷基-聚乙二醇醚。本专利技术还提供如上所述检测钙离子浓度的试剂盒用于检测血液样品(例如全血、血浆或血清)或任何其它含水液体样品(例如脑脊髓液、淋巴液、唾液或尿)中的钙本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.式I所示的化合物，/n

【技术特征摘要】
1.式I所示的化合物，



其中，R1、R4相同或不同，彼此独立地选自氢、卤素、羧基、C1-6烷基和甲酰基；
R2、R3、R5和R6相同或不同，彼此独立地选自氢、卤素、C1-6烷基或C1-6烷氧基；
X+为带正电荷的抗衡离子。


2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1、R4相同或不同，彼此独立地选自氢、卤素、羧基、C1-3烷基和甲酰基；
R2、R3、R5和R6相同或不同，彼此独立地选自氢、卤素、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
X+独立地为钾离子、钠离子、锂离子或铯离子。


3.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，R1、R4选自氢；
R2为甲基或乙基；
R3、R5和R6为H；
X+独立地为钾离子。


4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于，式I所示的化合物选自如下化合物NNM-BAPTA，





5.一种检测钙离子浓度的试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1-4任一项所述式I化合物，缓冲试剂及释放剂；
所述缓冲试剂使检测体系的pH维持在7.0-11.0；
所述释放剂选自螯合钙离子性能优于式I化合物的物质。


6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲试剂选自巴比妥钠缓冲体系、TRIS缓冲体系、硼酸缓冲体系、甘氨酸缓冲体系、碳酸盐缓冲体系、磷酸盐缓冲体系、CAPSO[3-环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸]缓冲体系、CAPS[3-环己基氨基)-2-丙磺酸]缓冲体系、或咪唑缓冲体系；
优选地...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯成锋，
申请(专利权)人：福建福缘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35