一种RNA病毒保护剂及保护剂的制备方法技术

本申请公开了一种RNA病毒保护剂及保护剂的制备方法，所述病毒保护剂包括：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、蛋白酶K、RNase抑制剂、DNA降解酶和无菌水。所述病毒保护剂的制备方法包括以下步骤：常温状态下，用无菌水分别溶解异硫氰酸胍、柠檬酸钠、蛋白酶K、RNase抑制剂和DNA降解酶，得到异硫氰酸胍水溶液、柠檬酸钠水溶液、蛋白酶K水溶液、RNase抑制剂水溶液、DNA降解酶溶液；将这些水溶液混匀，并将PH调至7.5

【技术实现步骤摘要】
一种RNA病毒保护剂及保护剂的制备方法


[0001]本申请涉及生物医药领域，尤其涉及一种RNA病毒保护剂及保护剂的制备方法。

技术介绍

[0002]病毒是一种不具细胞结构，只含一种核酸，必须寄生于活细胞内的非细胞生物。比如新型冠状病毒，新型冠状病毒可导致急性感染性肺炎，该病毒传播性极强，在全球范围内流行，做好该病毒的防控工作极其重要，为了做好防控工作，要对高风险地区人员和与该地区人员接触的人进行核酸检测。核酸检测过程中，要采集待测人员的咽拭子、鼻拭子或特定部位组织，作为待测样本。当采集的待测样本数量过多，或者在不具检测条件的地区采集待测样本时，要经储存或运输至检测点，才能进行后续的核酸提取、纯化和临床实验等。而在储存或运输的过程中，待测样本中的RNA很容易降解，从而导致检测不到RNA，造成核酸检测“假阴性”。
[0003]为了解决上述问题，现有技术中，使用等渗盐溶液或磷酸缓冲液作为病毒保护剂，但是将待测样本置于等渗盐溶液或磷酸缓冲液配制的病毒保护剂中后，必须保持低温条件，并且不能反复冻融；而在实际应用过程中，待测样本在长途运输或者转移时，使用干冰来维持低温，由于干冰在长途运输时易融化，从而无法长时间维持低温条件；待测样本在转移过程中，不可避免接触室温，从而导致反复冻融，引起RNA降解。
[0004]综上所述，提供一种能室温保存RNA病毒的保护剂，至关重要。

技术实现思路

[0005]本申请提供了一种RNA病毒保护剂及保护剂的制备方法，旨在解决现有技术中病毒保护剂不能常温保存待测样本的问题。
[0006]本申请第一方面提供一种RNA病毒保护剂，所述保护剂，包括：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、蛋白酶K、RNase抑制剂、DNA降解酶和无菌水。
[0007]每10mL所述保护剂中包括：
[0008][0009]可选的，所述保护剂的成分具体为：
[0010][0011][0012]可选的，所述保护剂的成分具体为：
[0013]可选的，所述保护剂的成分具体为：
[0014]可选的，所述保护剂的成分具体为：
[0015]可选的，所述保护剂的成分具体为：
[0016]可选的，所述保护剂的成分具体为：
[0017]可选的，所述保护剂的成分具体为：
[0018][0019][0020]可选的，所述保护剂的成分具体为：
[0021][0022]本申请第二方面提供一种RNA病毒保护剂的制备方法，所述制备方法包括：
[0023]常温状态下，用无菌水分别溶解异硫氰酸胍0.2g
‑
0.9g、柠檬酸钠0.1g
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0.8g、蛋白酶K1
‑
8g、RNase抑制剂0.2g和DNA降解酶15ku，得到异硫氰酸胍水溶液、柠檬酸钠水溶液、蛋白酶K水溶液、RNase抑制剂水溶液、DNA降解酶溶液。
[0024]将所述异硫氰酸胍水溶液、所述柠檬酸钠水溶液、所述蛋白酶K水溶液、所述RNase抑制剂水溶液和所述DNA降解酶溶液混匀，得到病毒的初步保护剂。
[0025]将所述病毒的初步保护剂的PH调至7.5
‑
8.5，并用无菌水定容至10mL，得到定容后的RNA病毒的保护剂。
[0026]采用滤膜对定容后的病毒的保护剂进行过滤，获得病毒的保护剂。
[0027]本申请提供的RNA病毒保护剂，其中异硫氰酸胍可快速灭活病毒，柠檬酸钠和乙二胺四乙酸能鳌合Mg
2+
和Ca
2+
等二价阳离子，而多种RNA酶的活性要依赖二价阳离子。蛋白酶K可降解RNA酶防止RNA降解，DNA降解酶可以降解待测样本中的DNA，RNase抑制剂，可抑制RNase的活性，防止RNA被降解。本申请提供的RNA病毒保护剂可在室温下保存RNA，防止RNA降解。
附图说明
[0028]图1是本申请实施例2中待测假病毒的实验组以及对照组的琼脂糖凝胶电泳图。
具体实施方式
[0029]以下对本申请的具体实施方式进行详细说明。显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0030]本申请实施例若无特殊说明，所用试剂及耗材均为市售商品。
[0031]本申请实施例提供一种RNA病毒保护剂，所述保护剂包括：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、蛋白酶K、RNase抑制剂、DNA降解酶和无菌水。
[0032]每10mL所述保护剂中包括：
[0033][0034]实施例1
[0035]在常温常压下分别根据表1中配方1
‑
配方8中组分：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、蛋白酶K、RNase抑制剂和DNA降解酶，将所述异硫氰酸胍、所述柠檬酸钠、所述蛋白酶K、所述RNase抑制剂和所述DNA降解酶分别用无菌水溶解，得到异硫氰酸胍水溶液、柠檬酸钠水溶液、蛋白酶K水溶液、RNase抑制剂水溶液、DNA降解酶溶液。将所述异硫氰酸胍水溶液、所述柠檬酸钠水溶液、所述蛋白酶K水溶液、所述RNase抑制剂水溶液和所述DNA降解酶溶液混匀，得到RNA病毒的初步保护剂，将所述RNA病毒的初步保护剂的PH调至7.5
‑
8.5，并用无菌水定容至10mL，得到定容后的RNA病毒保护剂，将所述容后的RNA病毒保护剂用滤膜过滤，得到RNA病毒保护剂。
[0036]其中，所述滤膜的孔径为0.22μm，可以除去配制过程中产生的颗粒性杂质，避免杂质对加入的病毒RNA浓度和纯度造成影响。
[0037]表1病毒保护剂的配方组分
[0038][0039]实施例2
[0040]对病毒保护剂的保存效果进行验证，将假病毒分别置于实施例1的配方1
‑
配方8的实验组与PBS缓冲液的对照组中，在保存的1d和3d，用核酸蛋白检测仪检测实验组和对照组的假病毒RNA浓度和假病毒RNA在260nm与280nm处的吸光值的比值。表2为实验组和对照组在保存1d时，测出的假病毒RNA浓度和吸光度，表3为实验组中配方1
‑
4的假病毒RNA和对照
组假病毒RNA保存3d时的浓度和吸光度。A260/A280表示假病毒RNA的纯度，A260/A280的值小于2则说明假病毒RNA不纯，A260/280的值越低则说明假病毒RNA纯度越低。用浓度来表示假病毒RNA的降解程度，若浓度越低，则降解程度越高。
[0041]表2假病毒RNA保存1d的浓度和吸光度
[0042][0043]表3假病毒RNA保存3d的浓度和吸光度
[0044][0045][0046]具体验证方案：
[0047]设置实验组和对照组，实验组：取100μl的假病毒置于400μl所述实施例1中的RNA病毒保存液中，分别置于室温和4℃保存；对照组：取100μl的假病毒置于400μl的PBS缓冲液中，分别置于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种RNA病毒保护剂，其特征在于，包括：异硫氰酸胍、柠檬酸钠、蛋白酶K、RNase抑制剂、DNA降解酶和无菌水；每10mL所述病毒的保护剂中包括：余量为无菌水。2.根据权利要求1所述一种RNA病毒保护剂，其特征在于，每10mL所述保护剂成分具体为：余量为无菌水。3.根据权利要求1所述一种RNA病毒保护剂，其特征在于，每10mL所述保护剂成分具体为：余量为无菌水。4.根据权利要求1所述一种RNA病毒保护剂，其特征在于，每10mL所述保护剂成分具体为：余量为无菌水。5.根据权利要求1所述一种RNA病毒保护剂，其特征在于，每10mL所述保护剂成分具体为：
余量为无菌水。6.根据权利要求1所述一种RNA病毒保护剂，其特征在于，每10mL所述保护剂成分具体为：余量为无菌水。7.根据权利要求1所述一种RNA病毒保护剂，其特征在于，每10mL所述保护剂成分具体为：余量为无菌水。8.根据权利要求1所述一种RNA病毒保护剂，其特征在于，每10mL所述保护剂成分具体为：余量为无菌水。9.根据权利要求1所述一种RNA病毒保护...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵志军，贾伟，潘亚菲，
申请(专利权)人：宁夏医科大学总医院，
类型：发明
国别省市：