植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用及功能性食品制造技术

本发明专利技术涉及一种植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用及功能性食品，属于微生物领域。因为本发明专利技术涉及的植物乳杆菌为具有bsh1基因和/或bsh3基因的植物乳杆菌，通过实验证明，bsh1和bsh3基因对缓解DSS导致的组织损伤和保护肠道上皮细胞的完整性具有重要作用，可以有效缓解DSS诱导的肠炎，所以本发明专利技术涉及的有bsh1基因和/或bsh3基因的植物乳杆菌为研究bsh基因对植物乳杆菌AR113的特定益生功能的影响奠定良好的理论基础。影响奠定良好的理论基础。影响奠定良好的理论基础。

【技术实现步骤摘要】
植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用及功能性食品


[0001]本专利技术涉及微生物领域，具体涉及一种植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用及功能性食品。

技术介绍

[0002]结肠炎(Inflammatory bowel disease，IBD)与宿主遗传因素和环境因素息息相关，肠道菌群变化也会影响IBD的易感性。其中，肠道微生物组成改变、异常的免疫反应和弱化的肠粘膜屏障，会导致宿主与微生物之间作用异常而加速肠道炎症反应。
[0003]随着近年来结肠炎发病率和死亡率不断上升，结肠炎已成为严重威胁人类生命健康的一类恶性疾病，被世界卫生组织列为现代难治疗病症之一。其常见临床表现为体重下降、腹泻、血便，有癌变的倾向，反复性强。研究证明，目前用于治疗结肠炎的药物主要有氨基水杨酸、糖皮质激素以及免疫调节剂等，药价高，且副作用不可控。

技术实现思路

[0004]本专利技术是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用及功能性食品。
[0005]本专利技术提供了植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用，具有这样的特征，其中，植物乳杆菌为具有bsh1基因和/或bsh3基因的植物乳杆菌。
[0006]在本专利技术提供的植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用中，还可以具有这样的特征：其中，植物乳杆菌为植物乳杆菌AR113。
[0007]在本专利技术提供的植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用，还具有这样的特征：肠炎为DSS诱导的肠炎。
[0008]本专利技术提供了一种功能性食品，具有这样的特征，包括：植物乳杆菌，其中，植物乳杆菌为具有bsh1基因和/或bsh3基因的植物乳杆菌。
[0009]在本专利技术提供的功能性食品中，还具有这样的特征：其中，功能性食品为酸奶、干酪、酒酿、泡菜、酱油、食醋、豆豉或乳腐中的任意一种。
[0010]专利技术的作用与效果
[0011]根据本专利技术所涉及的一种植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用及功能性食品，本专利技术涉及的植物乳杆菌为具有bsh1基因和/或bsh3基因的植物乳杆菌，因为本专利技术提供的具有bsh1基因和/或bsh3基因的植物乳杆菌可以有效缓解DSS诱导的肠炎，所以为研究bsh基因对植物乳杆菌AR113的特定益生功能的影响奠定良好的理论基础。
附图说明
[0012]图1是本专利技术的实施例中动物实验分组方案图；
[0013]图2是本专利技术的实施例中结肠炎小鼠的理化指标图；
[0014]图3是本专利技术的实施例中小鼠结肠HE染色图；
[0015]图4是本专利技术的实施例中小鼠结肠组织损伤评分图；
[0016]图5是本专利技术的实施例中小鼠结肠炎症因子的转录水平图；以及
[0017]图6是本专利技术的实施例中小鼠肠道屏障功能基因的表达图。
具体实施方式
[0018]为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下结合实施例及附图对本专利技术作具体阐述。
[0019]下述实施例中菌株及质粒来源如表1所示。
[0020]表1本实验使用的菌株及质粒
[0021][0022]植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)AR113菌株已于2017年03月22日保藏于中国普通微生物保藏中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其编号为CGMCC No.13909。
[0023]L.plantarum AR113Δbsh 1、L.plantarum AR113Δbsh 2、L.plantarum AR113Δbsh 3、L.plantarum AR113Δbsh 4、L.plantarum AR113Δbsh 13、L.plantarum AR113Δbsh 132、L.plantarum AR113Δbsh 134的构建方法如下：
[0024]在CRISPR/Cas9编辑质粒pHSP01的基础上进行改造，分别以植物乳杆菌AR113基因组为模板，使用相应引物进行PCR扩增，获得BSH1up、BSH1down和BSH1 gRNA，然后使用FX KOD酶将三者进行Overlap PCR，割胶回收获得BSH1up
‑
down
‑
gRNA片段(BSH 2、BSH 3和BSH 4的操作同上)，再与经ApaI和XbaI酶切回收的pHSP01载体进行无缝克隆，连接产物转化至大肠Top 10感受态细胞，涂布于相应抗性的平板。长出的单菌落用引物Plcp11yz
‑
F和Plcp11yz
‑
R进行验证，获得的正确质粒命名依次命名为pLdbsh1、pLdbsh2、pLdbsh3和pLdbsh4。将重组质粒pLdbsh1、pLdbsh2、pLdbsh3和pLdbsh4分别电转于AR113(pLH01)感受态，抗性平板筛选阳性克隆子，经PCR验证后进行测序，获得正确的单基因敲除型菌株命名为L.plantarumAR113Δbsh 1(简称Δbsh 1)，L.plantarum AR113Δbsh 2(简称Δbsh 2)，L.plantarumAR113Δbsh 3(简称Δbsh 3)，L.plantarum AR113Δbsh 4(简称Δbsh 4)；多
基因敲除型菌株命名为L.plantarumAR113Δbsh 13(简称Δbsh 13)，L.plantarum AR113Δbsh 132(简称Δbsh 132)，L.plantarumAR113Δbsh 134(简称Δbsh 134)。
[0025]质粒pLdbsh1、pLdbsh2、pLdbsh3和pLdbsh4的引物序列如下：
[0026][0027][0028]下述实施例中的实验动物为小鼠，具体来源如下：
[0029]实验所用小鼠为6周龄雄性SPF级C57BL/6小鼠，体重18～20g，购自南京模式动物有限公司。每笼饲养8只小鼠，在恒温23
±
2℃，湿度50
±
5％、暗/光周期为12h的环境下，自由饮食，适应一周后进行实验。
[0030]下述实施例中的试剂和设备来源如表2所示。
[0031]表2主要实验试剂和设备
[0032][0033][0034]<实施例>
[0035]1.结肠炎模型建立及分组给药
[0036]小鼠自由饮用2.5％DSS溶液7天，每两天换一次DSS溶液，构建急性溃疡性肠炎模型小鼠。
[0037]图1是本实施例的动物实验分组方案图。
[0038]如图1所示，将88只小鼠均分为11组，正常对照组(Conrtol)：自由饮食；模型组(DSS)：自由饮用2.5％DSS溶液，于第5天后开始连续灌胃200μL无菌水7天；阳性药物组(DSS+5
‑
ASA)：自由饮用2.5％DSS溶液，于第5天后开始连续灌胃200μL 5
‑
ASA溶液7天；(DSS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用，其特征在于：其中，植物乳杆菌为具有bsh1基因和/或bsh3基因的植物乳杆菌。2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应用，其特征在于：其中，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌AR113。3.根据权利要求1所述的植物乳杆菌在缓解肠炎的功能性食品的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾连中，王光强，夏永军，熊智强，张汇，宋馨，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：发明
国别省市：