一种姐妹染色单体互换差别染色辅助装置及方法制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种姐妹染色单体互换差别染色辅助装置及方法。它包括容器、石英玻璃片和紫外线灯；所述容器中装有2

【技术实现步骤摘要】
一种姐妹染色单体互换差别染色辅助装置及方法


[0001]本专利技术涉及一种染色辅助装置及方法，尤其涉及一种姐妹染色单体互换差别染色辅助装置及方法。

技术介绍

[0002]姐妹染色单体互换(Sister chromatid exchange,SCE)试验是一种检测染色体同源位点上DNA复制产物互换频率的试验方法。SCE是染色体不稳定性和DNA损伤较敏感的指标，可以检测出各种物理化学因素、疾病、药物、病毒、治疗方法是否对染色体造成损伤，进而影响细胞遗传。
[0003]在细胞分裂时，每条染色体均有两条染色单体，每条染色单体含一条双链DNA。5
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溴脱氧尿嘧啶核苷(5
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bromodeoxy
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uridine，BrdU)是脱氧胸腺嘧啶核苷的类似物，在DNA链的复制过程中，可替代胸腺嘧啶掺入到复制的DNA中。经两个复制周期后，中期染色体的两个DNA双链产生了差别：一条染色单体的两股DNA的均有BrdU掺入，另一条染色单体的两股DNA中一股含BrdU，一股不含BrdU。利用特殊的差别染色技术对染色体标本进行处理，可使双链均含有BrdU的单体浅染，只有一条含BrdU的单体深染。当姐妹染色体间存在同源片段交换时，可在同一条染色单体上看到深浅不同的颜色。
[0004]差别染色是姐妹染色单体互换试验中关键的技术环节，传统的操作方法如图1所示：在平皿9中平行放置两根牙签4(防止载玻片吸在容器底部不易取出)，将载玻片3放在牙签4上，加适量2
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SSC溶液5(以不超过标本2为度)。在标本上盖一张比载玻片3稍大的擦镜纸6，使纸边浸入2
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SSC溶液5中，并使2
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SSC溶液5渗至玻片标本2上，保持标本2湿润。将平皿置55℃水浴面上，用30W紫外灯1垂直照射标本30分钟，照射距离10cm。
[0005]姐妹染色单体互换差别染色方法中，紫外线照射的标准化是保证染色质量和效果的关键。在传统操作方法中，通过浸水的擦镜纸保持湿润的效果并不理想，经常会出现玻片中间被烤干的情况；擦镜纸也会影响紫外线的穿透，让照射的质量打折扣；擦镜纸盖在玻片上也存在擦掉玻片上的细胞可能。而将载有细胞的玻片完全浸泡在水中时，虽然避免了擦镜纸的影响，但是载玻片上方液体的高度不容易标准化，不同批次实验间液面高度的差异会影响紫外线照射效果，另外，高温下液体蒸发速度快，容易出现液体蒸干的情况。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种姐妹染色单体互换差别染色辅助装置。该装置能保证样品在液体浸泡下，以设定的温度完成紫外线照射，同时保证紫外线照射的距离、时间、功率和穿透性。
[0007]本专利技术提供的一种姐妹染色单体互换差别染色辅助装置，它包括容器、石英玻璃片和紫外线灯；所述容器中装有2
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SSC溶液；所述石英玻璃片与所述溶液接触；所述紫外灯线照射的紫外线透过所述石英玻璃片照射在完全浸泡在所述溶液中的待染色的细胞上。
[0008]本专利技术中，所述2
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SSC溶液为本领域中常用试剂，可通过商业途径购买，其组成为
0.3mol/L NaCl与0.03mol/L柠檬酸钠混合制成。
[0009]上述的装置中，所述石英玻璃片的厚度可为0.5mm～2mm，太薄容易破碎，太厚影响透光；
[0010]所述紫外灯距离所述待染色的细胞的垂直距离为10cm～15cm。
[0011]上述的装置中，所述装置还包括载玻片；所述紫外灯线照射的紫外线透过所述石英玻璃片照射在位于所述载玻片上的待染色的细胞上；所述载玻片和所述石英玻璃片之间设有间距。
[0012]上述的装置中，所述间距可为0.05mm～5.0mm，优选1.0mm、0.05mm～1.0mm、1mm～5.0mm或0.05mm～2.5mm。
[0013]上述的装置中，当所述紫外线灯位于所述容器的上方时，所述石英玻璃片位于所述容器底部的支撑物上且所述溶液的液面不超过所述石英玻璃片的上表面，超过上表面的液体无法控制厚度与液体蒸发；所述容器上方的所述紫外线灯照射的紫外线透过所述石英玻璃片和所述溶液照射在位于所述石英玻璃片下方的载玻片上表面的待染色的细胞上。
[0014]上述的装置中，所述支撑物具体可为棉签。
[0015]上述的装置中，当所述紫外线灯位于所述容器下方时，所述容器的底部开设有透光孔；所述石英玻璃片与所述透光孔密封配合；所述载玻片位于所述石英玻璃片的上方；所述容器下方的所述紫外线灯照射的紫外线透过所述石英玻璃片和所述溶液照射在位于所述载玻片的下表面的样品上。
[0016]本专利技术还提供了利用上述的装置进行辅助染色的方法。
[0017]本专利技术具有如下有益效果：
[0018]1、石英玻璃作为紫外线照射透光窗口，石英玻璃对紫外线的穿透率为高，达80％以上，能有效保证紫外线照射的均一性，达到标准化。
[0019]2、整个样品浸泡在液体下，能保证紫外线照射的整个过程都有2
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SSC液体保护，避免干燥。加热浸泡的液体，使温度控制更加准确。
[0020]3、通过石英玻璃片与样品之间支撑物的厚度可确定光线透过水的距离。
附图说明
[0021]图1是传统染色装置的示意图。
[0022]图2是本专利技术的整体结构及实施例1示意图。
[0023]图3是本专利技术的整体结构及实施例2示意图。
[0024]图4是本专利技术应用的整体结构示意图。
[0025]图5是本专利技术应用的局部结构示意图。
[0026]图6是本专利技术应用的载玻片架示意图。
[0027]图7是本专利技术装置应用的外观示意图。
[0028]图8是本专利技术应用的SCE结果图片(箭头所指为典型姐妹染色单体互换图片)。
[0029]图9是传统方法的SCE结果图片(箭头所指为典型姐妹染色单体互换图片)。
[0030]图中，各标记如下：
[0031]1紫外灯；2待染色的细胞标本；3载玻片；4棉签a；5 2
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SSC溶液；6擦镜纸；7支撑物；8石英玻璃片；9容器；10控温定时装置；11载玻片架；12自来水或蒸馏水；13、空心箱体。
具体实施方式
[0032]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0033]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0034]下面结合说明书附图对本专利技术作进一步说明，但本专利技术并不局限于下述实施例。
[0035]下述实施例中的外周血淋巴细胞染色体制片通过如下步骤得到：
[0036]在无菌条件下，用RPMI1640培养基，常规方法培养外周血淋巴细胞，培养24h后加入BrdU，最终浓度为10μg/mL。避光，置37℃温箱中培养至48小时，加入秋水仙素至终浓度0.4
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0.8μg/mL，继续培养4小时。按常规收集细胞，气干法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种姐妹染色单体互换差别染色辅助装置，其特征在于：它包括容器、石英玻璃片和紫外线灯；所述容器中装有2
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SSC溶液；所述石英玻璃片与所述溶液接触；所述紫外灯线照射的紫外线透过所述石英玻璃片照射在完全浸泡在所述溶液中的待染色的细胞上。2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于：所述石英玻璃片的厚度为0.5mm～2mm；所述紫外灯距离所述待染色的细胞的垂直距离为10cm～15cm。3.根据权利要求1或2所述的装置，其特征在于：所述装置还包括载玻片；所述紫外灯线照射的紫外线透过所述石英玻璃片照射在位于所述载玻片上的待染色的细胞上；所述载玻片和所述石英玻璃片之间设有间距。4.根据权利要求3所述的装置，其特征在于：所述间距为0.05mm～5.0mm。...

【专利技术属性】
技术研发人员：高朝贤，杨学琴，李丽梅，刘征宇，易娟，林涌钦，
申请(专利权)人：深圳市职业病防治院，
类型：发明
国别省市：