PRPF8表达抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用制造技术

PRPF8表达抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用，及生物技术领域，尤其涉及一种PRPF8表达抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。本发明专利技术研究发现，通过在非小细胞肺癌细胞系中敲减PRPF8可抑制细胞的生长，抑制细胞克隆形成能力，因此在非小细胞肺癌中PRPF8可作为新型的抑制剂，用于临床对非小细胞肺癌的治疗。用于临床对非小细胞肺癌的治疗。用于临床对非小细胞肺癌的治疗。

【技术实现步骤摘要】
PRPF8表达抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种PRPF8表达抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。

技术介绍

[0002]肺癌是常见的恶性肿瘤，非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌的一种，约占80％
‑
85％，仅次于女性乳腺癌。非小细胞肺癌的治疗方案主要以化疗为主。到目前为止，顺铂仍然是NSCLC治疗的最广泛的一线化疗药物。但是，治疗效果并不显著，根本原因是并没有从蛋白产生的源头开始寻找靶基因。
[0003]PRPF8蛋白约280kDa，是U5 snRNP剪接体装配动力学的中心。它不仅在RNA底物中与5'的分支点和3'剪切位点中的多嘧啶区域形成直接接触。同时也参与了U5和U6snRNAs组成。在人类常染色体显性遗传性视网膜炎中发现，PRPF8可产生影响剪切体组装和功能的突变，引起局部疾病，导致细胞减少。
[0004]目前，PRPF8在肺癌发生、迁移和侵袭中的功能未见相关报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种PRPF8表达抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。
[0006]本专利技术PRPF8表达抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。
[0007]优选的，所述肺癌为非小细胞肺癌。
[0008]进一步的，所述PRPF8表达抑制剂包括下述至少一种：
[0009]特异性抑制PRPF8表达的化合物；
[0010]特异性干扰PRPF8表达的干扰分子；
[0011]特异性与PRPF8蛋白结合的抗体或配体。
[0012]PRPF8基因敲减试剂，所述PRPF8基因敲减试剂为特异性敲减PRPF8的基因编辑试剂。
[0013]进一步的，所述干扰分子为miRNA或siRNA。
[0014]进一步的，所述PRPF8基因敲减试剂包括一种表达载体，所述表达载体包括一种shRNA片段的DNA编码序列，所述shRNA片段的靶基因为PRPF8基因。
[0015]优选的，所述shRNA片段的序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。
[0016]优选的，所述表达载体为质粒载体或病毒载体。
[0017]本专利技术还提供一种治疗肺癌的药物，包括一种PRPF8基因敲减试剂，所述PRPF8基因敲减试剂包括一种shRNA片段，所述shRNA片段的靶基因为PRPF8基因。
[0018]优选的，所述shRNA片段的序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。
[0019]优选的，所述肺癌为非小细胞肺癌。
[0020]本专利技术还提供一种试剂在制备试剂盒中的应用，所述试剂用于定量检测PRPF8蛋白表达水平，所述试剂盒用于判断药物治疗肺癌的有效性。
[0021]优选的，所述肺癌为非小细胞肺癌。
[0022]本专利技术的有益效果：
[0023]人类PRPF8的功能缺失突变延迟了剪接体组分对前mRNA的组装，并且抑制了9％(5/57)受试基因的剪切，产生功能不同的蛋白，对疾病的发生和肿瘤的生长具有重要的作用。
[0024]本专利技术通过在非小细胞肺癌细胞系中敲减PRPF8可抑制细胞的生长，抑制细胞克隆形成能力，因此在非小细胞肺癌中PRPF8可作为新型的抑制剂，用于临床对非小细胞肺癌的治疗。
[0025]通过抑制该基因的表达量可抑制非小细胞肺癌的细胞生长，可成为临床上治疗非小细胞肺癌的药物。
附图说明
[0026]图1为敲降细胞系荧光鉴定结果；
[0027]图2为PRPF8敲降细胞系WB鉴定结果；
[0028]图3为KEGG富集分析结果；
[0029]图4为A549敲降PRPF8细胞生长曲线结果；
[0030]图5为A549敲降PRPF8细胞克隆形成结果；
[0031]图6为imageJ分析图5克隆形成结果；
[0032]图7为MDA
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MB
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468敲降PRPF8细胞生长曲线；
[0033]图8为MDA
‑
MB
‑
468敲降PRPF8细胞克隆形成结果；
[0034]图9为imageJ分析图8克隆形成结果。
具体实施方式
[0035]下面对本专利技术的实施例做详细说明，以下实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方案和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。
[0036]实施例1、生物信息学分析PRPF8在肺癌中的表达
[0037]利用数据库对PRPF8在肺癌中的表达进行分析，通过KEGG等数据库对PRPF8进行富集分析，关注肺癌中PRPF8调控的通路，分析PRPF8在肺癌中的主要作用途径。
[0038]实施例2、敲降细胞系的建立
[0039]根据PRPF8序列设计合成2条shRNA，如下表所示，连入p
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GIPZ和p
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TRIPZ载体上(购买自美国Addgene生物技术有限公司,USA)。
[0040]表shRNA序列
[0041][0042]实施例3、慢病毒制备
[0043](1)293T细胞接种25cm小瓶，过夜培养后弃培养基，换2.5mL DMEM无抗培养基；
[0044](2)将质粒pPAX2、pMD2、GIPZ
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CTRL；质粒pPAX2、pMD2、GIPZ
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PRPF8
‑
1；质粒pPAX2、pMD2、GIPZ
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PRPF8
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4混匀后，加入250μL opti
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MEM培养基，再用250μL opti
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MEM培养基稀释Lipo2000，室温放置5min后，将质粒与Lipo2000混合，室温放置20min，加入293T细胞中；
[0045](3)5％CO2培养18h后换DMEM培养基；
[0046](4)继续培养48h后回收上清，并用0.45μM滤膜过滤；
[0047](5)加入1/3体积的病毒浓缩液(25％PEG8000/0.75M NaCl)，混匀后4℃过夜；
[0048](6)然后于4℃、1500g离心45min，弃上清，沉淀用1640培养基溶解，分别得到GIPZ
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CTRL、GIPZ
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PRPF8
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1、GIPZ
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PRPF8
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4病毒上清。分装，
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80℃保存。
[0049]实施例4、细胞转染
[0050](1)嘌呤浓度的筛选
[0051]将A549细胞系用胰酶消化3分钟，用培养基重悬成单细胞悬液，调整细胞密度为每孔105个细胞，培养30小时后，换成含嘌呤不同浓度的培养基，终浓度分别为：0.25μg/ml、0.4μg/ml、0.6μg/ml、0.75μg/ml、1.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PRPF8表达抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述肺癌为非小细胞肺癌。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述PRPF8表达抑制剂包括下述至少一种：特异性抑制PRPF8表达的化合物；特异性干扰PRPF8表达的干扰分子；特异性与PRPF8蛋白结合的抗体或配体；PRPF8基因敲减试剂，所述PRPF8基因敲减试剂为特异性敲减PRPF8的基因编辑试剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述PRPF8基因敲减试剂包括一种表达载体，所述表达载体包括shRNA片段的DNA编码序列，所述shRNA片段的靶基因为PRPF8基因。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述shRNA片段的序列如...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹涤非，黄国庆，薛佳莹，王雷，吴琼，李瑶，孙鑫，孙尧，
申请(专利权)人：黑龙江省科学院高技术研究院，
类型：发明
国别省市：