一种人工多肽PL、其抗体及在病理检测中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人工多肽PL及其抗体和在病理检测中的应用，属于生物学检测技术领域及免疫学领域。所述多肽PL具有SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
一种人工多肽PL、其抗体及在病理检测中的应用


[0001]本专利技术属于生物学检测
及免疫学领域，具体地，一种人工多肽PL、其抗体及在病理检测中的应用。

技术介绍

[0002]免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对病理组织中相应抗原进行定性、定位或定量测定的一项免疫学检测技术。免疫组织化学检测原理是：组织切片经抗原热修复处理后与一抗试剂进行孵育，在原位形成一抗与目标抗原的抗原
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抗体复合物；抗原
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抗体复合物中一抗分子再与酶标记的聚合物二抗通过孵育结合，在原位进一步形成抗原
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抗体
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二抗聚合物的复合物；最后通过酶催化的底物在抗原部位形成有颜色的沉积物。光学显微镜下通过观察棕色部位来确定是否有目标抗原及其表达情况。通过免疫组织化学染色可确定病理组织细胞类型和形态、辨认组织细胞产物的来源、确定组织细胞的分化程度；尤其在临床病理中的应用最为重要，如鉴定病变性质，发现微小病灶，探讨肿瘤起源或分化表型，确定肿瘤分期，指导治疗和预后；辅助疾病诊断和分类，寻找感染病因等。
[0003]目前国内市场上供应“抗体
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酶标记
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多聚物检测系统”二抗产品的公司主要有：(1)Dako公司的Envision二抗，使用链状的葡聚糖为多聚物载体，在载体上连接多个酶分子与二抗分子，使检测信号放大，但是链状的葡聚糖分子量较大，整个酶
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抗体聚合物与组织蛋白结合时产生较大的空间位阻，对于低丰度表达的蛋白检测灵敏度不高；(2)CN105566499A公开了的病理增强型二抗原理是使用葡萄串式多聚物为载体制备的酶标二抗，使多个酶紧密地连接到球状多分支载体体分子上，属于一步法二抗的制备。(3)德国SDT GmbH,Baesweiler专利技术的AmpliStain
TM detection systems使用蛇形链接物作物骨架制备酶
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载体
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二抗复合物。(4)罗氏诊断试剂公司开发的二抗，是以天然存在的小分子半抗原(如农药、兽药、抗生素、量子点等)与抗体偶联，以天然存在的小分子半抗原与对应酶多聚物抗小分子半抗原抗体结合，从而实现组织蛋白的免疫组化检测；但该方法需要天然半抗原小分子，交联过程需要较多有毒有害化学试剂，且偶联过程复杂，故生产费用较高。
[0004]目前，现有技术在聚合物结构设计、制备工艺上没有大的改进，具体体现在：单位体积内酶、抗体数量没有显著增加；聚合物空间位阻没有明显降低，导致灵敏度没有改善，故急需效果更好的病理检测增强型二抗。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：
[0006]本专利技术的第一方面提供一种人工多肽组合物，其包括人工多肽PL、人工多肽HM和人工多肽LH中的至少一种，其中，
[0007]所述人工多肽PL的氨基酸序列包括AAP(AADAAD)nAAPAAA，其中n＝1～10，即具有SEQ ID NO.1
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10所示氨基酸序列。在本专利技术的一些实施方案中，为了方便偶联蛋白，在该氨
基酸的N端或C端添加1个半胱氨酸(C)。
[0008]所述人工多肽HM的氨基酸序列包括GQA(T)nAQQ，其中n＝1～10，即具有SEQ ID NO.11
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20所示氨基酸序列序列。在本专利技术的一些实施方案中，为了方便偶联蛋白，在该氨基酸的N端或C端添加1个半胱氨酸(C)。
[0009]所述人工多肽LH的氨基酸序列包括TTT(PTT)n，其中n＝1～10，即具有SEQ ID NO.21
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30所示氨基酸序列序列。在本专利技术的一些实施方案中，为了方便偶联蛋白，在该氨基酸的N端或C端添加1个半胱氨酸(C)。
[0010]在本专利技术中，所述人工多肽又称为非天然多肽、合成多肽或人工合成多肽。其在哺乳动物体内天然不存在，尤其在人体内不存在，由此可避免交叉反应。
[0011]本专利技术的第二方面提供一种单抗组合物，包括分别抗本专利技术第一方面所述的人工多肽PL、人工多肽HM和人工多肽LH的单抗中的至少一种。其中，所述单抗又称为单克隆抗体。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，抗人工多肽PL的单抗的重链可变区CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3和轻链可变区CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3分别具有SEQ ID NO:31
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36所示的氨基酸序列。该抗体为兔源抗体，可特异性结合人工多肽PL，EC50为9.94ng/mL。
[0013]在本专利技术的一些实施方案中，抗人工多肽HM的单抗的重链可变区CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
‑
H3和轻链可变区CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3分别具有SEQ ID NO:37
‑
42所示的氨基酸序列。该抗体为兔源抗体，可特异性结合人工多肽HM，EC50为11.6ng/mL。
[0014]在本专利技术的一些实施方案中，抗人工多肽LH的单抗的重链可变区CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3和轻链可变区CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3分别具有SEQ ID NO:43
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48所示的氨基酸序列。该抗体为兔源抗体，可特异性结合人工多肽LH，EC50为1.78ng/mL。
[0015]本专利技术第三方面提供一种人工多肽
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抗体偶联物组合物，其包括本专利技术第一方面所述人工多肽PL与抗体形成的人工多肽PL
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抗体偶联物、本专利技术第一方面所述人工多肽HM与抗体形成的人工多肽HM
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抗体偶联物和本专利技术第一方面所述人工多肽LH与抗体形成的人工多肽LH
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抗体偶联物中的至少一种，其中，所述抗体为多抗，即多克隆抗体。
[0016]在本专利技术的一些实施方案中，所述多抗为羊抗鼠多抗或羊抗兔多抗。
[0017]本专利技术第四方面提供一种多聚物组合物，其包括偶联有本专利技术第二方面所述抗人工多肽PL的单抗的抗原结合部分的多聚物、偶联有本专利技术第二方面所述抗人工多肽HM的单抗的抗原结合部分的多聚物和偶联有本专利技术第二方面所述抗人工多肽LH的单抗的抗原结合部分的多聚物中的至少一种，其中，所述多聚物还偶联有显色剂。由此形成抗人工多肽PL单抗
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显色剂标记
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多聚物、抗人工多肽HM单抗
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显色剂标记
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人工多肽PL，其特征在于，其氨基酸序列包括TTT(PTT)n，其中n＝1～10。2.一种抗权利要求1所述人工多肽PL的单抗。3.根据权利要求2所述的单抗，其特征在于，所述单抗的重链可变区CDR
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H1、CDR
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H2、CDR
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H3和轻链可变区CDR
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L1、CDR
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L2、CDR
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L3分别具有SEQ ID NO:31
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36所示的氨基酸序列。4.一种人工多肽PL
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抗体偶联物，其特征在于，所述抗体为多抗，其偶联有权利要求1所述的人工多肽PL。5.一种多聚物，其特征在于，所述多聚物上偶联有权利要求2所述的单抗的抗原结合部分，还偶联有显色剂。6.根据权利要求5所述的多聚物，其特征在于，所述显色剂选自荧光素、酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘丽，李明振，蔡宁，
申请(专利权)人：图凌杭州生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：