一种食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法技术

本发明专利技术属于食品安全检测技术领域，尤其涉及一种食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法，本发明专利技术方法用黑色标记物胶体金刚碳代替胶体金显色，有明显的优势，检测线为微红色为阳性，变黑则为阴性。这样既保持了免疫法的快速，操作简单等有点，又提高了灵敏度和特异性。异性。

【技术实现步骤摘要】
一种食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法


[0001]本专利技术属于食品安全检测
，尤其涉及一种食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法。

技术介绍

[0002]苏丹红类物质含有氮氮双键(偶氮基)，即结构式中的
‑
N＝N
‑
，与连接在其两端的苯环一起构成发色基团。偶氮基与芳香结构构成的偶氮苯大共轭体系能够吸收一定波长的可见光，故含有偶氮苯体系的物质能显现出一定的颜色。苏丹红I(结构式如下)，学名：1
‑
苯基偶氮
‑2‑
萘酚(1
‑
phenylazo
‑2‑
naphthalenol)，分子结构式为C6H5N＝NC10H6OH，分子量 248.28。
[0003]苏丹红为亲脂性偶氮染料，不溶于水，主要用于油彩、机油、蜡和鞋油等产品的染色。由于用苏丹红染色后的食品颜色非常鲜艳且不易褪色，能引起人们强烈的食欲，一些不法食品企业把苏丹红添加到食品中。常见的添加苏丹红的食品有辣椒粉、辣椒油、红豆腐，红心禽蛋等。
[0004]人体摄入苏丹红I后，不易排出，国际癌症研究机构(InternationalAgency for ResearchonCancer，IARC)将苏丹红I归为三类致癌物，即动物致癌物，主要基于体外和动物试验的研究结果，肝脏是苏丹红I产生致癌性的主要靶器官，此外还可引起膀胱、脾脏等脏器的肿瘤。所以对不法分子将苏丹红I用于食品加工生产的行为要坚决抵制，有关部门坚决查处。
>[0005]对苏丹红I的检测目前分为两种：定量检测和快速检测，定量检测主要有色谱法，光谱法，分光光度法，这种方法准确、定量分析，但是不适合现场快速检测，胶体金层析方法和ELSIA方法是比较快速的检测方法。所以在打击犯罪和现场查处执法方面很有效果。
[0006]胶体金层析方法最为快速，操作最为简单，但是由于免疫胶体金方法的原理所致，检测线包埋的苏丹红I
‑
BSA抗原为浅红色细线，所以当红色的免疫胶体金与苏丹红I
‑
BSA结合呈现的红色时，二者有视觉上的重叠，很难区分阴阳性，或者只能通过深浅判断，严重影响灵敏度；另一方面红色基质对检测线的判断也是有一定的影响，从而影响特异性。

技术实现思路

[0007]针对现阶段的苏丹红I胶体金检测试纸条存在的问题，本专利技术提供了一种食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法，该方法解决了传统试纸条上面T线红色与胶体金红色重叠的问题，同时对其它试纸条的生产具有一定的参考价值，而且能够清晰判断、快速、准确的判断，操作简单。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是一种食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法，包括以下步骤:
[0009]一种食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤:
[0010]S1：制备胶体碳溶液：将糖溶于稀碱溶液中，加入酰胺糖反应10
‑
120min，离心、洗涤、冷冻干燥后得到黑色胶体碳粉末，将胶体碳粉末进行超声，在碱性条件下用环氧基分子活化，并配置成溶液；
[0011]胶体碳金钢化：将胶体碳溶液，进行金刚化，分散，最后将其稀释成标准浓度的胶体金刚碳溶液；
[0012]S2：取粒径为40nm的胶体金钢碳溶液100mL，调至pH＝7.2，分别标记抗体得到碳标抗体溶液；
[0013]S3：先将碳标抗体溶液离心取黑色上清溶液，进行再离心，离心后溶液分为三层：透明上清液、管底可流动的黑色沉淀及管底壁上黑色致密的碳颗粒层，将可流动的黑色沉淀转移到另外一个离心管中，用重悬液重悬至原量 0.8倍，加入0.1％的叠氮钠4℃保存备用；
[0014]S4：将碳标抗体结合到滤纸或玻璃纤维纸上，并通过结合垫处理液进行水化和封闭处理，浸泡30min后于温度37℃下烘干2小时，得到结合垫；
[0015]S5：将步骤S2碳标抗体溶液喷涂在结合垫上：喷涂机将碳标抗体在滤纸或玻璃纤维纸上均匀喷涂，喷样量在30μL/cm2，37℃真空干燥，得到半成品；
[0016]S6：将半成品上涂覆有苏丹红I
‑
明胶偶联物和羊抗兔IgG溶液，形成平行的检测线和质控线；
[0017]S7：将其粘贴在胶板上，制成胶体金刚碳试纸条。
[0018]进一步的，步骤S2中标记抗体的方法如下：取100mL胶体碳溶液，在磁力搅拌器下混合条件下，加入6μg/mL的单克隆抗体，加入终质量浓度为1％的海藻糖，接着加入终质量浓度为0.5％的兔抗苏丹红I
‑
BSA，得到碳标抗体 100mL，4℃保存过夜后冷冻超速离心纯化。
[0019]进一步的，步骤S1中胶体碳溶液金刚化方法如下：将胶体碳溶液3个大气压的压力下煮沸30
‑
40min，然后于40
‑
60KHZ下超声30
‑
40min。
[0020]进一步的，步骤S1中糖为葡萄糖、蔗糖和果糖的一种或两种。
[0021]进一步的，步骤S1的反应条件为温度170
‑
210℃，压力为1
‑
1.5MPa。
[0022]进一步的，步骤S3中离心步骤为：常温、转速为1200
‑
1500rpm条件下离心20
‑
30min。
[0023]进一步的，步骤S3中再离心步骤为：4℃在转速为8000r/min条件下离心30min。
[0024]进一步的，步骤S4中结合垫处理液为：含有终质量浓度为0.3％吐温
‑
20、 2％海藻糖、10％蔗糖及pH值为7.2、浓度为0.01mol/L的PBS溶液。
[0025]进一步的，步骤S5中，喷涂之前，将所述滤纸或玻璃纤维纸浸入pH70
‑
8.4 的PBS中2min，取出，经80℃烘干干燥。
[0026]与现有技术相比，本专利技术具有的优点和积极效果是：
[0027]本专利技术提供食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法，本专利技术方法用黑色标记物胶体金刚碳代替胶体金显色，有明显的优势，检测线为微红色为阳性，变黑则为阴性。这样既保持了免疫法的快速，操作简单等有点，又提高了灵敏度和特异性，同时对其它试纸条的生产具有一定的参考价值，而且能够清晰判断、快速、准确的判断，操作简单。
具体实施方式
[0028]为了更好的理解本专利技术，下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步的描述。
[0029]实施例1：
[0030]一种食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤:
[0031]S1：制备胶体碳溶液：将葡萄糖溶于稀碱溶液中，加入酰胺糖在温度 170℃，压力为1MPa下，反应10min，离心、洗涤、冷冻干燥后得到黑色胶体碳粉末，将胶体碳粉末进行超声，在碱性条件下用环氧基分子活化，并配置成溶液；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤:S1：制备胶体碳溶液：将糖溶于稀碱溶液中，加入酰胺糖反应10
‑
120min，离心、洗涤、冷冻干燥后得到黑色胶体碳粉末，将胶体碳粉末进行超声，在碱性条件下用环氧基分子活化，并配置成溶液；胶体碳金钢化：将胶体碳溶液，进行金刚化，分散，最后将其稀释成标准浓度的胶体金刚碳溶液；S2：取粒径为40nm的胶体金钢碳溶液100mL，调至pH=7.2，分别标记抗体得到碳标抗体溶液；S3：先将碳标抗体溶液离心取黑色上清溶液，进行再离心，离心后溶液分为三层：透明上清液、管底可流动的黑色沉淀及管底壁上黑色致密的碳颗粒层，将可流动的黑色沉淀转移到另外一个离心管中，用重悬液重悬至原量0.8倍，加入0.1%的叠氮钠4℃保存备用；S4：将碳标抗体结合到滤纸或玻璃纤维纸上，并通过处理液进行水化和封闭处理，浸泡30min后于温度37℃下烘干2小时，得到结合垫；S5：将步骤S2碳标抗体溶液喷涂在结合垫上：喷涂机将碳标抗体在滤纸或玻璃纤维纸上均匀喷涂，喷样量在30μL/cm2，37℃真空干燥，得到半成品；S6：将半成品上涂覆有苏丹红I
‑
明胶偶联物和羊抗兔IgG溶液，形成平行的检测线和质控线；S7：将其粘贴在胶板上，制成胶体金刚碳试纸条。2.根据权利要求1所述的一种食品中苏丹红I胶体金刚碳检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤S2中标记抗体的方法如下：取100mL胶体碳溶液，在磁力搅拌器下混合条件下，加入6μg/mL的单克隆抗体，加入终质量浓度为1%的海藻糖，接着加入终质量浓度为0.5%的兔抗苏丹红I
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BSA，得到碳标抗体100mL，4℃保存过夜后冷冻超速离心纯化。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷奎德，张兴梅，韩琰旭，张科，陈发荣，吴月皓，齐瑜，
申请(专利权)人：北京艾旗斯德科技有限公司，
类型：发明
国别省市：