一种用于定量样品中目标分析物的天然同位素校准曲线法制造技术

本发明专利技术提供了一种用于定量样品中目标分析物的天然同位素校准曲线法，步骤为：在待测样品中添加已知量的校准物；对待测样品进行前处理后进行质谱法分析，得到校准物及校准物的天然同位素和目标分析物的质谱信号；通过计算得到校准物的天然同位素的含量，以校准物和校准物的天然同位素的含量、质谱信号响应的对应关系绘制校准曲线，目标分析物的质谱信号响应对应到校准曲线中即得到目标分析物含量。本发明专利技术首次以目标分析物的稳定同位素标记的类似物和稳定同位素标记的类似物的一系列天然同位素来作为校准物绘制标准曲线，从而定量待测样品中的目标分析物。该方法具有非常高的可靠性和准确性，且简化了检测程序，极大拓展了应用范围。用范围。用范围。

【技术实现步骤摘要】
一种用于定量样品中目标分析物的天然同位素校准曲线法


[0001]本专利技术涉及检测分析
，具体涉及一种用于定量样品中目标分析物的天然同位素校准曲线法。

技术介绍

[0002]以质谱为分析手段的痕量分析方法，主要的定量方法包括有外标法，内标法和标准加入法。根据校准方式的不同，可分为单点校准，多点校准和校准曲线法；根据配制校准品所采用的溶液不同，又分为纯溶液标准品和基质匹配的标准品。这其中以基质匹配内标校准曲线法和标准加入法的结果最为准确。标准加入法由于难以预估样品中目标化合物的量且工作量较大（每个样品，需要制备至少三份样品），较多用于结果的确认。因而，基质匹配内标校准曲线法是目前最为常用的痕量分析方法。该方法的优点在于前处理的过程中加入了内标化合物用于平行校准前处理过程中目标化合物的损失，如果条件允许的情况下，内标化合物一般选取目标化合物的稳定同位素标记的类似物，由于两者具有极其类似的物理化学性质，该内标不仅可以校准前处理过程中目标化合物的损失，同样可以校准质谱分析过程中的基质效应；但该方法的主要弊端在于较难获取配制标准品所需的空白基质，尤其是当分析的目标物是内源性的，且样品基质的种类繁多，个体差异较大时，空白基质的获取尤为困难。
[0003]申请号为201280036810.1的专利文献中记载了一种用于定量样品中目标分析物的方法，包括获得质谱信号，所述质谱信号包括第一校准物信号、包括第二校准物信号，并且可能包含来自单个样品的目标分析物信号，所述单个样品包含第一已知量的第一校准物、包含第二已知量的第二校准物，并且潜在包含目标分析物。所述第一已知量和所述第二已知量不同，并且其中所述第一校准物、所述第二校准物以及所述目标分析物可通过质谱法在所述单个样品中各自区分。所述方法还包括使用所述第一校准物信号、所述第二校准物信号，以及所述目标分析物信号来定量所述单个样品中的所述目标分析物。但该方法的缺陷在于其必须包含至少两个校准物，且所述第一校准物，第二校准物以及更多的校准物均为目标分析物的不同稳定同位素标记的类似物（以睾酮分析为例，添加的校准物为D2
‑
睾酮，D3
‑
睾酮，D5
‑
睾酮的不同浓度混合校准物）。而在实际应用过程中，稳定同位素标记的类似物获取较为困难，成本较高；且绝大部分目标分析物只有一种稳定同位素标记的类似物可供获取，从而导致大部分目标分析物无法直接采用该专利中的方法进行定量。
[0004]在自然界中，所有元素是以同位素的混合物存在着的。有机化合物一般由C、H、O、N、S等元素组成，它们都有同位素，根据自然规律，各元素的同位素都以一定的天然丰度存在，见表1。
[0005]表1 有机化合物中常见元素的天然同位素丰度表
考虑到有机化合物分子中，一般每个元素都具有多种同位素，则各同位素的峰强度可按下述二项式的展开式算出。
[0006](a+b)
n
(c+d)
m
……
其中a和b、c和d分别为第一、第二种元素的M和M+1同位素的天然丰度（习惯上，也可称为轻质同位素和重质同位素，例如以C为例，a和b分别为
12
C和
13
C的天然丰度），n，m分别为第一、第二种元素的原子数目。目前主流的质谱分析仪大多配有工具软件可供计算有机化合物的同位素丰度比，只要输入化合物的分子式即可，故这里就不再赘述其丰度比的计算原理。
[0007]对稳定同位素类似物进行质谱分析时，会同时获得稳定同位素类似物的一系列天然同位素的质谱信号。但并未见有任何人对该质谱信号进行进一步的利用。现有技术中也并未有任何报道将质谱分析获得的稳定同位素类似物的一系列天然同位素的质谱信号用于目标分析物的定量中。

技术实现思路

[0008]针对现有技术中的不足，本专利技术的目的是提供一种通过质谱法定量样品中目标分析物的方法。
[0009]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术提供了一种用于定量样品中目标分析物的天然同位素校准曲线法，包括以下步骤：A、在待测样品中添加已知量的校准物，所述校准物为目标分析物的稳定同位素标记的类似物；B、对待测样品进行前处理；C、将步骤B处理后的待测样品进行质谱法分析，得到校准物及校准物的天然同位素的质谱信号、待测样品中的目标分析物的质谱信号；D、根据校准物的分子式计算得到校准物的天然同位素丰度比，从而得到校准物的天然同位素的含量，以校准物和校准物的天然同位素的已知含量、质谱信号响应的对应关系绘制校准曲线，再根据待测样品中的目标分析物的质谱信号响应，对应到校准曲线中即得到待测样品中的目标分析物含量；
步骤A中，所述目标分析物为一个或多个，每一种目标分析物对应在待测样品中添加一个已知量的校准物。
[0010]优选地，步骤B中，所述前处理的方法选自固相萃取法、固液萃取法、液液萃取法、沉淀蛋白法、直接稀释法、溶剂提取法、盐析法、化学分离法、浓缩法、吸附色谱分离、分配色谱分离、离子交换色谱分离、掩蔽法中的任一种。
[0011]优选地，步骤C中，所述校准物的天然同位素质谱信号为一个或多个。
[0012]优选地，所述校准物的天然同位素质谱信号为多个时，即包括校准物的第一天然同位素、校准物的第二天然同位素，以此类推，步骤D的标准曲线绘制方法如下：根据校准物的分子式计算得到校准物的天然同位素丰度比，从而得到校准物的第一天然同位素的含量作为第二已知量的校准物、校准物的第二天然同位素的含量作为第三已知量的校准物，以此类推；再根据各校准物的已知含量、质谱信号响应的对应关系绘制校准曲线。
[0013]优选地，当采用单位质量分辨率的质谱分析时，所述校准物与校准物的天然同位素的质荷比大于等于1个道尔顿质量数；当采用高分辨质谱分析时，所述校准物与校准物的天然同位素的质荷比大于等于0.05个道尔顿质量数。
[0014]优选地，所述校准物与目标分析物在质谱法分析中彼此相差至少2个道尔顿质量数。
[0015]优选地，步骤A中，所述待测样品包括生物样品、环境样品、食品样品、合成样品、药物样品、化工样品、临床化学样品、法医样品、药理样品、农业样品中的任一种；所述生物样品包括血浆、血清、全血、尿液、组织、脑脊液、汗液、唾液、毛发、皮肤中的任一种。
[0016]优选地，步骤A中，所述目标分析物为包括至少3个碳原子的有机分子。
[0017]优选地，步骤A中，所述的校准物为目标分析物的稳定同位素标记类似物，为目标分析物的至少1个原子被其稳定同位素替代后得到，稳定同位素包括但不限于2H、
11
B、
13
C、
15
N、
17
O、
18
O、
33
S、
34
S和
36
S中的任一种或多种。
[0018]优选地，所述质谱法采用的离子源包括但不限于电喷雾离子源（ESI）、大气压化学电离离子源（APCI）、基质辅助激光本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于定量样品中目标分析物的天然同位素校准曲线法，其特征在于，包括以下步骤：A、在待测样品中添加已知量的校准物，所述校准物为目标分析物的稳定同位素标记物；B、对待测样品进行前处理；C、将步骤B处理后的待测样品进行质谱法分析，得到校准物及校准物的天然同位素的质谱信号、待测样品中的目标分析物的质谱信号；D、根据校准物的分子式计算得到校准物的天然同位素丰度比，从而得到校准物的天然同位素的含量，以校准物和校准物的天然同位素的已知含量、质谱信号响应的对应关系绘制校准曲线，再根据待测样品中的目标分析物的质谱信号响应，对应到校准曲线中即得到待测样品中的目标分析物含量；步骤A中，所述目标分析物为一个或多个，每一种目标分析物对应在待测样品中添加一个已知量的校准物；步骤C中，所述校准物的天然同位素质谱信号为一个或多个；所述校准物的天然同位素质谱信号为多个时，即包括校准物的第一天然同位素、校准物的第二天然同位素，以此类推，步骤D的标准曲线绘制方法如下：根据校准物的分子式计算得到校准物的天然同位素丰度比，从而得到校准物的第一天然同位素的含量作为第二已知量的校准物、校准物的第二天然同位素的含量作为第三已知量的校准物，以此类推；再根据各校准物的已知含量、质谱信号响应的对应关系绘制校准曲线。2.根据权利要求1所述的用于定量样品中目标分析物的天然同位素校准曲线法，其特征在于，步骤B中，所述前处理的方法选自固相萃取法、固液萃取法、液液萃取法、沉淀蛋白法、直接稀释法、溶剂提取法、盐析法、浓缩法、掩蔽法中的任一种。3.根据权利要求1所述的用于定量样品中目标分析物的天然同位素校准曲线法，其特征在于，当采用单位质量分辨率的质谱分析时，所述校准物与校准物的天然同位素的质荷比大于等于1个道尔顿质量数；当采用高分辨质谱分析时，所述校准物与校准物的天然同位素的质荷比大于等于0.05个道尔顿质量数。4.根据权利要求1所述的用于定量样品中目标分析物的天然同位素校准曲线法，其特征在于，所述校准物与目标分析物在质谱法分析中彼此相差至少2个道尔顿质量数。5.根据权利要求1所述的用于定量样品中目标分析物的天然同位素校准曲线法，其特征在于，步骤A中，所述待测样品包括生物样品、环境样品、食品样品...

【专利技术属性】
技术研发人员：郏征伟，陈铭，谭晓杰，
申请(专利权)人：裕菁科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：