一种促进堆肥腐熟真菌、筛选方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种促进堆肥腐熟真菌、筛选方法及应用，涉及生物技术领域，其保藏编号是：CGMCC No.21024，促进堆肥腐熟真菌的筛选方法，包括下列步骤：S1：取腐熟鸡粪与灭菌水按重量份数比1:9加入到三角瓶中，吸取上清液并用无菌水稀释成10

【技术实现步骤摘要】
一种促进堆肥腐熟真菌、筛选方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，更具体的说是涉及一种促进堆肥腐熟真菌、筛选方法及应用。

技术介绍

[0002]好氧堆肥是依靠专性和兼性好氧微生物作用降解有机物的生化过程，将需要堆腐的有机料与辅料按一定的比例混合，在合适的水分、通气条件下，使微生物繁殖并降解有机质，从而产生高温，杀死其中的病原菌及杂草种子，使有机物达到稳定化。好氧堆肥是畜禽废弃物资源化、无害化处理的重要途径，在堆肥过程中微生物将易降解的有机物分解后吸收转化成自身细胞物质，并将不易降解的有机物矿化再腐殖化，其中矿化作用和腐殖化作用主要对应堆肥的一次发酵和二次发酵两个阶段。一次发酵指堆肥升温期和高温期，然后随着温度不断降低，堆肥进入二次发酵阶段，此阶段微生物进一步分解剩余的有机物，并将形成的矿物质腐殖化。
[0003]研究发现，我国畜禽粪便产生量增速放缓，总量逐渐趋于稳定，目前每年产生的养殖废弃物可达38亿吨，但综合利用率不到60％。那些未能资源化利用或未经过无害化处理的废弃物不仅严重污染环境，而且在一定程度上危害人畜健康。因此，如何提高畜禽养殖废弃物的综合利用率已成为当前亟待解决的问题。好氧堆肥是畜禽废弃物无害化处理和资源化利用的重要方式，然而在实际生产中，堆肥周期过长、场地有限以及发酵不充分等问题严重限制了堆肥效率。
[0004]接种特异性外源微生物是加快腐熟进程、缩短堆肥周期的一种有效方法，但是大多数外源微生物都是为了促进堆肥升温、提高一次发酵的效率和品质，目前市场上缺乏促进堆肥二次发酵的微生物菌剂。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了解决上述技术问题，而提供一种促进堆肥腐熟真菌、筛选方法及应用，筛选出一种促进堆肥腐熟真菌，能够加快腐熟进程、缩短堆肥周期。
[0006]本专利技术通过下述技术方案实现：
[0007]一种促进堆肥腐熟真菌，该菌株已于2020年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏编号是：CGMCCNo.21024，其生物学分类命名为：链格孢Alternaria sp.。其保藏编号是：CGMCC No.21024。
[0008]促进堆肥腐熟真菌的筛选方法，包括下列步骤：
[0009]S1：取腐熟鸡粪与灭菌水按重量份数比1:9加入到三角瓶中，室温下放置于摇床中振荡 30min，取出后静置5min，然后吸取上清液并用无菌水稀释成10
‑5浓度梯度的菌悬液；
[0010]S2：分别吸取0.1mL不同浓度菌悬液涂布于马丁氏培养基上培养7d，培育温度为25℃，挑取形态各异的真菌点接在改良马丁培养基上进行纯化，纯化后得到纯化真菌；
[0011]S3：将纯化真菌分别接到改良马丁培养基制备纯化真菌菌悬液，将纯化真菌菌悬液按10％的接种量接入含有50g鸡粪的三角瓶，放置于25℃恒温培养箱中培养7d，得到鸡粪样品；
[0012]S4：将鸡粪样品与去离子水按重量份数比1：9在三角瓶中混合，放置于摇床中震荡浸提 1h后过滤，吸取该滤液10mL，加到铺有滤纸的培养皿内，培养皿点播小麦种子，通过计算种子的发芽指数筛选出促进堆肥腐熟真菌。
[0013]进一步，所述步骤S2中马丁氏培养基的制备方法，包括下列步骤：
[0014]A1：按重量份数计，将5份蛋白胨、20份葡萄糖、1份磷酸氢二钾、0.5份硫酸镁、18 份琼脂、1000份蒸馏水混合，得到混合液；
[0015]A2：将混合液灭菌后倒入平板，加入1％孟加拉红水溶液、1％链霉素溶液，最终得到马丁氏培养基。
[0016]进一步，所述混合液、1％孟加拉红水溶液、1％链霉素溶液按重量份数计，为1044.5：3.3:3。
[0017]进一步，所述步骤S2中改良马丁培养基的制备方法，包括下列步骤：
[0018]B1:按重量份数计，将5份蛋白胨、20份葡萄糖、1份磷酸氢二钾、0.5份硫酸镁、2份酵母粉、18份琼脂、1000份蒸馏水混合，得到混合液；
[0019]B2:将混合液调节至PH6.2
‑
6.6。
[0020]促进堆肥腐熟真菌的应用，将促进堆肥腐熟真菌应用于堆肥二次发酵。
[0021]本专利技术与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：本专利技术促进堆肥腐熟真菌能够极大提高堆肥二次发酵的效果。
附图说明
[0022]此处所说明的附图用来提供对本专利技术实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本专利技术实施例的限定。在附图中：
[0023]图1为促进堆肥腐熟真菌腐熟效果图；
[0024]图2为二次堆肥过程中温度的变化；
[0025]图3为二次堆肥过程中EC的变化；
[0026]图4为二次堆肥过程中GI的变化；
[0027]图5为二次堆肥过程中总腐殖酸、胡敏酸、富里酸含量及PHA的变化；
[0028]图6为二次堆肥过程中F3堆料的变化；
[0029]图7为不同培养天数下FCM3的菌落形态；
[0030]图8为PCR电泳图。
具体实施方式
[0031]下面结合实施例对本专利技术进行进一步描述。以下实施例仅为本专利技术的几个具体实施例，但本专利技术的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本专利技术进行非实质性的改动，均应属于侵犯本专利技术保护范围的行为。
[0032]下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
[0033]下述的实施例中的百分含量如无特别说明，均为质量百分含量。
[0034]实施例
[0035]在一个实施例中，一种促进堆肥腐熟真菌，其保藏编号是：CGMCC No.21024。
[0036]在一个实施例中，促进堆肥腐熟真菌的筛选方法，包括下列步骤：
[0037]S1：取腐熟鸡粪与灭菌水按重量份数比1:9加入到三角瓶中，室温下放置于摇床中振荡 30min，取出后静置5min，然后吸取上清液并用无菌水稀释成10
‑5浓度梯度的菌悬液；
[0038]S2：分别吸取0.1mL不同浓度菌悬液涂布于马丁氏培养基上培养7d，培育温度为25℃，挑取形态各异的真菌点接在改良马丁培养基上进行纯化，纯化后得到纯化真菌；
[0039]S3：将纯化真菌分别接到改良马丁培养基制备纯化真菌菌悬液，将纯化真菌菌悬液按10％的接种量接入含有50g鸡粪的三角瓶，放置于25℃恒温培养箱中培养7d，得到鸡粪样品；
[0040]S4：将鸡粪样品与去离子水按重量份数比1：9在三角瓶中混合，放置于摇床中震荡浸提 1h后过滤，吸取该滤液10mL，加到铺有滤纸的培养皿内，培养皿点播小麦种子，通过计算种子的发芽指数筛选出促进堆肥腐熟真菌。
[0041]在一个实施例中，所述步骤S2中马丁氏培养基的制备方法，包括下列步骤：
[0042]A1：按重量份数计，将5份蛋白胨、20份葡萄糖、1份磷酸氢二钾、0.5份硫酸镁、18 份琼脂、1000份蒸馏水混本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进堆肥腐熟真菌，其保藏编号是：CGMCC No.21024。2.根据权利要求1所述的促进堆肥腐熟真菌的筛选方法，其特征在于，包括下列步骤：S1：取腐熟鸡粪与灭菌水按重量份数比1:9加入到三角瓶中，室温下放置于摇床中振荡30min，取出后静置5min，然后吸取上清液并用无菌水稀释成10
‑5浓度梯度的菌悬液；S2：分别吸取0.1mL不同浓度菌悬液涂布于马丁氏培养基上培养7d，培育温度为25℃，挑取形态各异的真菌点接在改良马丁培养基上进行纯化，纯化后得到纯化真菌；S3：将纯化真菌分别接到改良马丁培养基制备纯化真菌菌悬液，将纯化真菌菌悬液按10%的接种量接入含有50g鸡粪的三角瓶，放置于25℃恒温培养箱中培养7d，得到鸡粪样品；S4：将鸡粪样品与去离子水按重量份数比1：9在三角瓶中混合，放置于摇床中震荡浸提1h后过滤，吸取该滤液10 mL，加到铺有滤纸的培养皿内，培养皿点播小麦种子，通过计算种子的发芽指数筛选出促进堆肥腐熟真菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：李兆君，魏启航，冯瑶，任艳芳，刘元望，何俊瑜，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业资源与农业区划研究所，
类型：发明
国别省市：