一种检测鱼粉中三种生物胺含量的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测鱼粉中三种生物胺的茚三酮柱后衍生化法，包括：待测样品溶液制备、标准曲线建立、利用氨基酸自动分析仪检测。本发明专利技术利用柱后衍生法，通过设定缓冲溶液种类、PH值以及相关参数对鱼粉中三种生物胺含量进行检测，相比现有技术中的柱前衍生法，前处理操作简单，检测耗时短，重复性好，具有良好的推广前景。推广前景。

【技术实现步骤摘要】
一种检测鱼粉中三种生物胺含量的方法


[0001]本专利技术涉及分析化学
，具体而言，尤其涉及一种检测鱼粉中三种生物胺含量的茚三酮柱后衍生化法。

技术介绍

[0002]鱼粉，是全鱼或经过分割的鱼体经过蒸煮、压榨、脱脂、干燥、粉碎获得的产品，其蛋白质含量高，营养丰富且价格昂贵，多应用于生产水产饲料及高档猪饲料。鱼粉的新鲜程度影响饲料原料的卫生安全，直接关系着饲料质量的好坏。其中，生物胺是判断鱼粉新鲜度的重要指标。生物胺是机体腐败过程中的产物，包含腐胺、尸胺和组胺等，它们分别由鸟氨酸、赖氨酸和组氨酸在氨基酸脱羧酶的作用下经过脱羧反应而形成。生物胺具有一定的毒性，可能造成畜禽的中毒，甚至影响人体健康。因此，研究鱼粉中生物胺含量的检测方法具有重要意义。
[0003]目前，现行有效的生物胺检测方法有GB/T 21970
‑
2008《水质组胺等五种生物胺的测定》；GB/T 23884
‑
2009《动物源性饲料中生物胺的测定》和GB 5009.208
‑
2016《食品安全国家标准食品中生物胺的测定》等方法。以上三种国标检测方法均是采用高效液相色谱法，衍生试剂选用的是丹酰氯和苯甲酰氯，苯甲酰氯不溶于水，影响衍生效果；丹酰氯衍生法选择带有盐的流动相，会减短色谱柱的寿命，两种方法均采用的是柱前衍生，前处理操作繁琐耗时，衍生过程不易控制。因此，需要对现有的生物胺检测方法进行改进，本专利技术旨在提供一种用氨基酸自动分析仪检测三种生物胺的方法，包含腐胺、尸胺和组胺。
专利
技术实现思路

[0004]根据上述提出的技术问题，本专利技术主要利用氨基酸自动分析仪对鱼粉中三种生物胺的含量进行检测，此种检测方法前处理简单、耗时短、干扰少，可大大提高检测速度。
[0005]本专利技术采用的技术手段如下：
[0006]一种检测鱼粉中三种生物胺含量的方法，包括以下步骤：
[0007](1)鱼粉样品经过粉碎机粉碎后，装入洁净的自封袋中，置于
‑
18℃的冰箱中保存；
[0008](2)样品溶液制备：将步骤(1)中粉碎后样品溶于盐酸溶液，搅拌后取上清液加入一级水定容；摇匀后过0.22μm微孔滤膜，即得待测的样品溶液；
[0009](3)样品溶液检测：将步骤(2)所得样品溶液利用氨基酸自动分析仪分析；
[0010](4)标准曲线建立：采用外标法，以生物胺标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
[0011](5)结果判定：根据上述步骤获得待测样品的生物胺峰面积，带入标准曲线计算得到样品溶液生物胺浓度c，通过下述计算公式计算得到待测样品中的生物胺含量，
[0012][0013]其中，X—样品中生物胺的含量，mg/kg；
[0014]c—样品溶液中生物胺的浓度，μg/mL；
[0015]V—样品溶液的体积，mL；
[0016]n—稀释倍数；
[0017]m—样品的质量，g。
[0018]进一步地，盐酸溶液浓度为0.1mol/L。
[0019]进一步地，搅拌时间为10～30min。
[0020]进一步地，步骤(3)中，氨基酸分析仪的色谱条件为：阳离子分离柱，30mm
×
4.6mm，进样体积50μL，柱温70℃；紫外检测器波长570nm；反应器温度140℃；衍生剂为茚三酮溶液，所述茚三酮溶液的流速为0.25mL/min；流动相为钾盐缓冲溶液，等度洗脱，流速为0.45mL/min；所述钾盐缓冲溶液包括缓冲液A和缓冲液B；再生液D流速为0.45mL/min；
[0021]所述等度洗脱为：
[0022]0～12.0min，缓冲液A：30％，缓冲液B：70％，再生液D：0％；
[0023]12.1～17.0min，缓冲液A：0％，缓冲液B：0％，再生液D：100％；
[0024]17.1～28.0min，缓冲液A：30％，缓冲液B：70％，再生液D：0％。
[0025]进一步地，缓冲液A的配制为：无水氢氧化钾11.2g，无水柠檬酸14.0g，无水氯化钾14.9g，辛酸0.1mL，一级水定容1000mL；缓冲液B的配制为：无水氢氧化钾16.8g，无水柠檬酸16.0g，硼酸10g，无水氯化钾164.0g，辛酸0.1mL，一级水定容1000mL；
[0026]茚三酮溶液的配制为：茚三酮40g，苯酚4g，抗坏血酸0.4g，甲醇1200mL，缓冲液800mL，混合均匀；所述缓冲液的配制为：196.0g醋酸钾，272.0g三水乙酸钠，200mL乙酸，用一级水定容1000mL；
[0027]再生液D的配制为：无水氢氧化钾33.7g，EDTA0.2g，一级水定容至1000mL。
[0028]进一步地，缓冲液A的pH值为5.45
‑
5.50，所述缓冲液B的pH值为7.80
‑
7.84。
[0029]进一步地，步骤(4)具体为：分别配制一系列不同浓度的三种生物胺标准品溶液，利用氨基酸自动分析仪检测，测出一系列不同浓度的生物胺标准品对应的峰面积，分别以三种生物胺的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
[0030]较现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0031]1、本专利技术提供了一种新的检测生物胺的方法，单个样品的前处理时间约40min，所用试剂简单、安全，相对现有技术中需要多种提取液，且前处理时间至少需要4
‑
5小时的情况下，可节约检测时间80％，本专利技术检测方法不仅检测速度快，也更加节约能源，大幅降低检测成本。
[0032]2、使用本专利技术检测方法，样品经前处理后，上机检测样品净化度高，干扰少，所得结果具有良好的重复性，且精确性高。
[0033]3、本专利技术检测过程所用仪器设备少，操作简单易学，对人员要求较低，同时与现行有效的生物胺国标方法相比，无论在时间成本还是试剂成本上都有明显优势，具有良好的应用前景。
附图说明
[0034]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图做以简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发
明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0035]图1为本专利技术实施例1检测样品结果谱图；
[0036]图2为本专利技术对比例1检测样品结果谱图；
[0037]图3为本专利技术对比例2检测样品结果谱图；
[0038]图4为本专利技术生物胺标准溶液谱图；
[0039]图5为腐胺标准工作曲线；
[0040]图6为组胺标准工作曲线；
[0041]图7为尸胺标准工作曲线。
具体实施方式
[0042]下面结合实施例对本专利技术技术方案作进一步描述。
[0043]设备及标准品选用如下：
[0044]氨基酸自动分析仪选用德国Sykam本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测鱼粉中三种生物胺含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将鱼粉样品粉碎后，冷冻保存；(2)样品溶液制备：将步骤(1)中粉碎后样品溶于盐酸溶液，搅拌后取上清液加入一级水定容；摇匀后过0.22μm微孔滤膜，即得待测的样品溶液；(3)样品溶液检测：将步骤(2)所得样品溶液利用氨基酸自动分析仪分析；(4)标准曲线建立：采用外标法，以生物胺标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；(5)结果判定：根据上述步骤获得待测样品的生物胺峰面积，带入标准曲线计算得到样品溶液生物胺浓度c，通过下述计算公式计算得到待测样品中的生物胺含量，其中，X—样品中生物胺的含量，mg/kg；c—样品溶液中生物胺的浓度，μg/mL；V—样品溶液的体积，mL；n—稀释倍数；m—样品的质量，g。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述盐酸溶液浓度为0.1mol/L。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述搅拌时间为10～30min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，氨基酸自动分析仪的色谱条件为：阳离子分离柱，30mm
×
4.6mm，进样体积50μL，柱温70℃；紫外检测器波长570nm；反应器温度140℃；衍生剂为茚三酮溶液，所述茚三酮溶液的流速为0.25mL/min；流动相为钾盐缓冲溶液，等度洗脱，流速为0.45mL/min；所述钾盐缓冲溶液包括缓冲液A和缓冲液B；再生液D流速为0.45mL/min；所述等度洗脱为：0～12.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：史莹，吴振洲，封伟杰，张敏，邵彩梅，孙美玲，谢俊美，韩金，
申请(专利权)人：辽宁禾丰牧业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：