一种降压肽、长效降压肽及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种降压肽、长效降压肽及其制备方法，涉及降压药物技术领域。本发明专利技术的降压肽至少一种如SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
一种降压肽、长效降压肽及其制备方法


[0001]本专利技术涉及降压药物
，特别是涉及一种降压肽、长效降压肽及其制备方法。

技术介绍

[0002]血管紧张素转化酶抑制肽(angiotensin converting enzymeinhibitory peptides)是一种对血管紧张素转换酶(ACE)活性具有抑制作用的多肽类物质。血管紧张素转化酶抑制肽一般由2～20个氨基酸残基组成，通常是由蛋白质酶解而得，其通过抑制血管紧张素转换酶的活性，阻碍血管紧张素Ⅱ的生成以及抑制血管舒缓激肽的分解而达到降血压的作用。由于蛋白酶的酶切位点不固定，酶切后得到的多肽也是多种多样的，后期的筛选及分离纯化成为技术难点所在。

技术实现思路

[0003]基于此，有必要针对上述问题，提供一种降压肽，该降压肽为具有降血压作用的小分子生物肽，可用于高血压的防治，其副作用小、降压效果好。
[0004]一种降压肽，包括至少一种如下多肽序列：
[0005]Gly
‑
Phe
‑
Ala
‑
Gly
‑
Asp
‑
Asp
‑
Ala
‑
Pro
‑
Arg(SEQ ID NO.1)，
[0006]Gly
‑
Lue
‑
Gly
‑
Gly
‑
Lue
‑
Ser
‑
Pro
‑r/>Glu
‑
Lys(SEQ ID NO.2)，
[0007]Lue
‑
Pro
‑
Lys(SEQ ID NO.3)，
[0008]Pro
‑
Arg
‑
Pro(SEQ ID NO.4)，
[0009]Ser
‑
Arg
‑
Pro(SEQ ID NO.5)，
[0010]Arg
‑
Pro
‑
Ala(SEQ ID NO.6)。
[0011]上述降压肽，是首次从海洋生物沙虫中分离纯化得到的，实验证明其具有较好的降压的效果，可用于高血压的防治。
[0012]在其中一个实施例中，所述降压肽为SEQ ID NO.5所示的多肽序列。该序列的多肽在6种多肽中降压效果最佳。
[0013]本专利技术还提供一种上述降压肽的制备方法，包括以下步骤：
[0014]S1、选取沙虫，加碱液调节pH值为7.5
‑
8.5；
[0015]S2、加酶进行酶解，酶解完成，升温使酶失活，得到酶解混合物；
[0016]S3、将酶解混合物进行固液分离，保留液体，得酶解液；
[0017]S4、将酶解液进行超滤透析，保留分子量≤100KDa的超滤液；
[0018]S5、对所述超滤液进行分离提纯，即得如SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.6所示的多肽。
[0019]上述制备方法，可以稳定、准确地对酶进行切割，得到上述降压肽，上述降压肽是首次在沙虫中分离纯化得到的，且实验证明该多肽具有降压的效果。
[0020]血管紧张素转化酶抑制肽的活性，取决于多肽的氨基酸种类、序列及其空间结构。在上述酶解过程中，蛋白质大分子首先被蛋白酶切割成多肽片段，随着酶解程度加深，多肽
被进一步酶解切割形成游离氨基酸。因此，控制好酶解工艺参数(包括酶的种类、用量、pH值、温度、酶解时间)，可控制切割位点及酶解程度，这对于多肽片段的大小及结构具有决定作用。
[0021]在其中一个实施例中，所述步骤S1具体为：将沙虫洗净，绞碎匀浆，加入10
‑
15倍体积的水，混匀，加碱液调节pH值为7.5
‑
8.5。
[0022]在其中一个实施例中，所述步骤S2具体为：按沙虫重量的0.5％
‑
1％加入酶粉浆，酶解温度为45
±
5℃，酶解时间4
‑
6h，酶解完成后，升温至95
±
5℃，保温3～8min，使酶失活，得到酶解混合物。
[0023]在其中一个实施例中，所述酶粉浆中含有胰蛋白酶和中性蛋白酶，胰蛋白酶和中性蛋白酶的重量比为(2
‑
4):1。
[0024]在其中一个实施例中，所述沙虫和酶的用量比为100g：0.5
‑
1g。在沙虫(方格星虫)匀浆液的酶解过程中，若酶解不足，则星虫蛋白以大分子状态存在，不能切割得到具有ACE抑制活性的肽段；若酶解过度，则肽段被进一步切割形成游离氨基酸，不具有活性结构，从而失去了ACE抑制活性。
[0025]在其中一个实施例中，所述步骤S3具体为：对所述酶解混合物进行离心，弃去沉淀，保留上清液，得到酶解液。
[0026]在其中一个实施例中，所述步骤S5具体为：将聚乙二醇修饰铜离子螯合琼脂糖装柱，水洗，磷酸盐缓冲液洗脱至平衡，再将所述超滤液过柱层析，得到降压肽。
[0027]本专利技术还提供一种聚乙二醇修饰的降压肽的制备方法，包括以下步骤：
[0028]1)将权利要求1
‑
2任一项所述的降压肽溶于缓冲液中，得到多肽溶液；
[0029]2)将聚乙二醇与甘氨酸混合，经反应得到活化的聚乙二醇；
[0030]3)将多肽溶液与活化的聚乙二醇混合，反应完成后加酸调节pH值为2
‑
4，终止反应；
[0031]4)将步骤3)的产物进行透析，经分离纯化，得到聚乙二醇修饰的降压肽。
[0032]在其中一个实施例中，所述步骤1)具体为：将所述降压肽溶于Tris
‑
HCl缓冲液中，配制成浓度5
‑
50mg/ml的肽溶液，降温到2
‑
8℃备用。
[0033]在其中一个实施例中，所述步骤2)具体为：将聚乙二醇与氨基酸混合，在酸性条件下反应脱水得到活化的聚乙二醇，将其溶于乙腈
‑
水溶液中，活化的聚乙二醇的浓度为50
‑
150mg/ml，降温至2
‑
8℃备用。
[0034]优选地，所述聚乙二醇分子量为3000
‑
30000。包括但不限于支链或直链的聚乙二醇。
[0035]优选地，所述氨基酸选用甘氨酸。甘氨酸分子量小，稳定性好，活化的收率高达70％，而其他氨基酸活化收率约为30％
‑
50％。采用甘氨酸进行活化产率更高，副产物更少。
[0036]在其中一个实施例中，所述步骤3)具体为：将上述肽溶液和活化的聚乙二醇溶液按照1:(10
‑
50)的比例混合，2
‑
8℃下搅拌36
‑
72h；反应完成，加酸调节pH值为2
‑
4，终本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降压肽，其特征在于，包括至少一种如下多肽序列：Gly
‑
Phe
‑
Ala
‑
Gly
‑
Asp
‑
Asp
‑
Ala
‑
Pro
‑
Arg(SEQ ID NO.1)，Gly
‑
Lue
‑
Gly
‑
Gly
‑
Lue
‑
Ser
‑
Pro
‑
Glu
‑
Lys(SEQ ID NO.2)，Lue
‑
Pro
‑
Lys(SEQ ID NO.3)，Pro
‑
Arg
‑
Pro(SEQ ID NO.4)，Ser
‑
Arg
‑
Pro(SEQ ID NO.5)，Arg
‑
Pro
‑
Ala(SEQ ID NO.6)。2.根据权利要求1所述的降压肽，其特征在于，所述降压肽为SEQ ID NO.5所示的多肽序列。3.一种如权利要求1或2所述的降压肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、选取沙虫，加碱液调节pH值为7.5
‑
8.5；S2、加酶进行酶解，酶解完成，升温使酶失活，得到酶解混合物；S3、将酶解混合物进行固液分离，保留液体，得酶解液；S4、将酶解液进行超滤透析，保留分子量≤100KDa的超滤液；S5、对所述超滤液进行分离提纯，即得如SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.6所示的多肽。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1具体为：将沙虫洗净，绞碎匀浆，加入10
‑
15倍体积的水，混匀，加碱液调节pH值为7.5
‑
8.5；所述步骤S2具体为：按沙虫重量的0.5％
‑
1％加入酶粉浆，酶解温度为45
±
5℃，酶解时间为4
‑
6h，酶解完成后，升温至95
±

【专利技术属性】
技术研发人员：吕应年，戚怡，罗辉，唐晓宁，林芊杏，刘欢，黄细香，蔡晓璇，
申请(专利权)人：广东医科大学，
类型：发明
国别省市：