胶质瘤标志物SPC25及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及到SPC25在胶质瘤诊断、治疗以及预后中的应用。一种胶质瘤的生物标志物，所述标志物是SPC25基因/蛋白。SPC25基因/蛋白在制备诊断和/或预后判断胶质瘤的试剂盒中的用途。SPC25基因/蛋白的抑制剂在制备治疗胶质瘤药物中的应用，所述抑制剂能够抑制SPC25基因/蛋白的功能。实验证明SPC25基因和蛋白在体内胶质瘤中的表达较正常脑组织中明显上调，使得SPC25有望成为肿瘤辅助诊断标记物。本发明专利技术为胶质瘤治疗提供了新的理论依据和全新靶标，也为胶质瘤提供了新的辅助诊断和预后诊断的方法。辅助诊断和预后诊断的方法。辅助诊断和预后诊断的方法。

【技术实现步骤摘要】
胶质瘤标志物SPC25及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及到一种胶质瘤标记物SPC25及其应用，具体涉及到SPC25在胶质瘤诊断、治疗以及预后中的应用。

技术介绍

[0002]胶质瘤是中枢神经系统中最常见、恶性程度最高的原发性恶性肿瘤，具有极高的死亡率，预后极差。近年来，尽管手术、放疗和化疗等综合治疗方式陆续问世并应用于临床治疗，但胶质瘤患者的治疗效果仍然很差，尤其是恶性程度最高的胶质母细胞瘤患者，其中位生存时间不足15个月。近年来，随着分子生物学技术的发展和基因测序技术的普及，大量肿瘤发生、发展相关的致癌或抑癌基因被发现，并基于相关基因的作用提出了分子靶向治疗的观点。目前，分子靶向治疗被视为改善胶质瘤治疗效果，实现彻底治愈胶质瘤最有希望的治疗方式之一。而且，相关致癌或抑癌基因的异常表达与胶质瘤患者的早期诊断和临床治疗预后结局密切相关，故寻找相关基因可作为胶质瘤发病风险、早期诊断和治疗预后结局的评估指标。
[0003]胶质瘤干细胞(glioma stem cells，GSCs)是一类特殊的胶质瘤细胞，具有自我更新和多向分化能力，被认为是肿瘤起始细胞，参与了胶质瘤的发生和胶质瘤细胞的增殖、侵袭、抗凋亡、耐药和复发等重要生物学过程。因此，针对胶质瘤干细胞的分子靶向治疗有助于提高目前胶质瘤治疗的效果，降低术后复发率和放化疗的耐受性，并实现胶质瘤的最终治愈。故寻找和发现新的高效的胶质瘤特异表达靶标对于胶质瘤的早期诊断、预后评估和分子靶向治疗均具有重要作用。
[0004]纺锤体极成分25(Spindle pole body component 25，SPC25)又名着丝粒复合物成分(NDC80 kinetochore complex component)，被认为参与着丝粒微管的相互作用和纺锤体检查点活性的调控，在肺癌、前列腺癌等肿瘤中均具有促癌作用。但是SPC25是否在胶质瘤中存在异常的表达，并对胶质瘤干细胞的增殖和肿瘤发生具有调控作用尚无任何研究报道。

技术实现思路

[0005]鉴于现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种胶质瘤标记物SPC25及其在胶质瘤诊断、治疗以及预后中的应用。专利技术人首先基于生物信息学分析发现SPC25在癌症基因图谱(the Cancer Genome Atlas，TCGA)和中国胶质瘤基因图谱(Chinese Glioma Genome Atlas，CGGA)两大数据库中进行分析，均发现SPC25在胶质瘤中的表达随胶质瘤WHO分级级别的升高而增高，其在胶质母细胞瘤中的表达水平明显高于低级别胶质瘤，其在患者预后更差的IDH野生型患者中的表达水平亦高于IDH突变型患者，而且SPC25高表达患者具有更短的生存时间和不良预后结局。随后基于临床病人的胶质瘤组织和对应的正常脑组织进行比较，确认了生物信息学的分析结果。以患者来源胶质瘤干细胞为研究对象，通过慢病毒介导的基因过表达和沉默技术，发现SPC25的过表达具有促进细胞增殖和肿瘤发生作
用，而SPC25的沉默可有效抑制胶质瘤细胞的增殖活性和肿瘤发生。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案。
[0007]一种胶质瘤的生物标志物，所述标志物是SPC25基因/蛋白。
[0008]SPC25基因/蛋白在制备诊断和/或预后判断胶质瘤的试剂盒中的用途。
[0009]一种用于诊断胶质瘤和/或预后判断胶质瘤的试剂盒，所述试剂盒以SPC25基因/蛋白作为检测靶标。
[0010]进一步地，所述试剂盒包含用于特异扩增SPC25基因的上下游引物序列，或特异识别/结合SPC25蛋白的试剂。
[0011]更进一步地，所述引物序列包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的序列。
[0012]更进一步地，所述试剂是抗体。所述抗体是单克隆抗体或多克隆抗体，优选单克隆抗体。
[0013]SPC25基因/蛋白的抑制剂在制备治疗胶质瘤药物中的应用，所述抑制剂能够抑制SPC25基因/蛋白的功能。
[0014]进一步地，所述抑制剂是抑制SPC25基因/蛋白表达的siRNA和/或中和性抗体和/或其他抑制和/或中和性抗体的化合物。
[0015]更进一步地，抑制SPC25基因/蛋白表达的siRNA序列如SEQ ID NO:3
‑
SEQ ID NO:6所示。
[0016]本专利技术中所述胶质瘤为人胶质瘤。本领域技术人员通过本领域中已知的引物设计方法即可设计出适用于扩增SPC25基因的上下游引物序列。另外，本领域技术人员知晓如何获得特异识别/结合SPC25蛋白的抗体。本专利技术可以通过基因手段，如荧光实时定量PCR，使用所述引物进行检测，也可以通过免疫手段，如蛋白质印迹、免疫组化、免疫荧光等检测SPC25蛋白。
[0017]与现有技术比，本专利技术的有益效果如下。
[0018]由于目前用于胶质瘤临床辅助诊断的标记物或技术尚不完善，本专利技术提供了胶质瘤标记物SPC25及其应用，SPC25基因和蛋白在体内胶质瘤中的表达较正常脑组织中明显上调，使得SPC25有望成为肿瘤辅助诊断标记物。并且根据本专利技术研究，抑制内源性胶质瘤可显著降低胶质瘤干细胞的增殖和肿瘤发生，使得SPC25可以成为肿瘤治疗有效靶点。本专利技术同时发现SPC25蛋白表达越高的胶质瘤患者其生存率越低，即SPC25蛋白过表达明确指示较差的生存预后，即SPC25基因/蛋白可以成为胶质瘤患者生存预后指标。本专利技术为胶质瘤治疗提供了新的理论依据和全新靶标，也为胶质瘤提供了新的辅助诊断和预后诊断的方法。
附图说明
[0019]图1a
‑
1h是SPC25在TCGA和CGGA两大数据库中的分析结果。
[0020]图2a
‑
2f是SPC25在70例临床病人的胶质瘤组织和10例正常脑组织进行比较。
[0021]图3是通过慢病毒介导的基因过表达和沉默技术在GSC
‑
42中沉默SPC25的表达，在GSC
‑
21中过表达SPC25，并经qPCR和westernblot实验证实SPC25的mRNA和蛋白水平发生改变。
[0022]图4a
‑
4h是体外实验中的各组胶质瘤干细胞生长实验结果。
[0023]图5是裸鼠颅内成瘤实验结果。
具体实施方式
[0024]下面结合具体实施例和附图对本
技术实现思路
进一步阐述。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆实验指南》(第三版)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0025]实施例1SPC25基因/蛋白在在胶质瘤临床样品中表达高于正常脑组织。
[0026]1.研究对象。
[0027]研究对象选取70例胶质瘤患者临床样本，其中WHO分级II级20例，III级25例，IV级25例，同期收集的应脑外伤接受手术切除的正常脑组织10例。本研究通过医院伦理委员会审查和批准，所有患者入组前均签署书本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶质瘤的生物标志物，其特征在于，所述标志物是SPC25基因/蛋白。2.SPC25基因/蛋白在制备诊断和/或预后判断胶质瘤的试剂盒中的用途。3.一种用于诊断胶质瘤和/或预后判断胶质瘤的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒以SPC25基因/蛋白作为检测靶标。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于特异扩增SPC25基因的上下游引物序列，或特异识别/结合SPC25蛋白的试剂。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述引物序列如SEQ ID NO:1
‑
SEQ ID NO:2所示。6.如权利要求4所述的试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：景治涛，蒋炀，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：